一种银杏叶提取物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种银杏叶提取物的制备方法，包括以下步骤：1)乙醇加热回流提取；2)调pH至碱性，冷藏放置；3)过大孔树脂柱；4)微孔滤膜过滤，灭菌，获得银杏叶提取物。其中，步骤3)中使用25%的乙醇和10%乙酸钠溶液洗脱杂质峰，使用30～50%乙醇洗脱目标成分峰。本发明专利技术的有益效果在于：有效地去除了有害成分总银杏酸，降低了类过敏反应的发生，提高了安全性；提高目标成分纯度，提高产品质量；实现了自动在线检测。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】
本专利技术涉及医药领域，具体涉及。
技术介绍
银杏叶是银杏科植物银杏（Ginkgo biloba)的叶，是当今地球上最古老的树种 之一。银杏树为银杏科植物银杏（Ginkgo biloba.L.)又名公孙树，为我国特产植物，银 杏叶提取物（GRE)主要含黄酮和内酯两类活性成分，黄酮以山柰酚（kaempferal)、槲皮素 (quercetin)和异鼠李素（isorhamnetin)等戒类化合物为主，内酯以白果内酯及银杏内酯 A、B和C(gimkgolide A.B. C)为主。由于银杏叶提取物在治疗冠心病、脑血栓、脑缺血、脑 功能障碍、脑外伤后遗症、神经系统疾病的氧自由基清除等方面的疗效确切，目前已成为世 界医药界研究的热点。 舒血宁注射液是银杏叶经提取制成的灭菌水溶液。主要的化学成分包括总银杏 酸、内酯和黄酮等化合物。内酯和黄酮是有效活性成分，总银杏酸为有毒成分。目前，银杏 叶提取物标准收载于《中国药典》2015年版一部。商务部中国医药保健品进出口商会正式 对外发布的《银杏叶提取物国际商务标准》指出，国内外大量文献报道显示，总银杏酸具有 细胞毒性、胚胎毒性、致敏性及致突变作用，被广泛认为是银杏叶提取物及其制剂中的毒性 物质，WHO及多国药典（包括现行版EP和USP)要求银杏叶提取物中总银杏酸的含量不得 大于5mg/kg，现行《中国药典》2015年版要求银杏叶提取物中含总银杏酸不得过10mg/kg， 舒血宁注射液国家药品标准中对总银杏酸的限量已与国际接轨。控制总银杏酸的含量即可 降低不良反应的发生，提高产品安生性。总银杏酸是公认的致敏物质，总银杏酸的去除，可 使舒血宁注射液产品质量上升一个新台阶。 中国专利200710098492. 2 (名称：一种银杏叶提取液/物的制备方法）公开了一 种银杏叶提取液/物的制备方法。该专利技术采用乙醇加热回流提取和大孔树脂柱纯化对银杏 叶进行处理，从而获得银杏叶提取液/物。该专利技术提供的技术方案虽然能够制得符合质量 标准要求的银杏叶提取液/物，但其所得银杏叶提取液/物中仍然存在有银杏酸，而且在大 孔树脂柱纯化过程中使用了高浓度的乙醇（60~80%)，造成了资源的浪费。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供。 为了达到上述目的，本专利技术是通过如下方案实现的：一种银杏叶提取物的制备方 法，包括如下步骤： (1)取银杏叶饮片粉碎，加入银杏叶重量10倍（v/w)的60~75%乙醇浸泡2~3小 时，60~70°C加热回流提取2~3小时，过滤，得药渣和提取液； (2) 向步骤（1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍（v/w)的60~75%乙醇，60~70°C加 热回流提取1~2小时，过滤，得药渣和提取液； (3) 将步骤⑴和⑵所得提取液合并，当温度降至30~40°C时，用20% NaOH溶液调 节pH至7. 9~8. 1，冷藏放置12~72小时，过滤，滤液于60~70°C浓缩回收乙醇，并浓缩 至1~3g银杏叶/mL，加纯化水至银杏叶重量的10倍（v/w)，在温度小于40°C时用HCl调 pH至2. 0~3. 0,在10~15°C的条件下静置2~8小时，过滤至滤液澄清，所述滤液浓缩至 近红外光谱仪在线检测总黄酮醇苷含量大于5mg/mL，得浓缩物； ⑷①将步骤⑶所得浓缩物以I. 〇~I. 6BV/h的流速加入到大孔树脂柱中，用1~ 3BV的纯化水以1. 2~2. 5BV/h的流速冲洗大孔树脂柱； ② 用2~4BV的10%的乙酸钠溶液以I. 0~4. OBV/h的流速冲洗大孔树脂柱； ③ 用纯化水以I. 0~3. OBV/h的流速将大孔树脂柱冲洗至中性； ④ 用1~3BV的25%乙醇以I. 0~3. OBV/h的流速冲洗大孔树脂柱； ⑤ 用2~6BV的30~60%乙醇以I. 0~2. OBV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液， 得到银杏叶提取物，所述银杏叶提取物经检测不含总银杏酸。 作为优选地，所述制备方法还包括以下步骤：将步骤（4)所得银杏叶提取物过滤， 滤液于60~70°C浓缩回收乙醇至无醇味，并浓缩至4g银杏叶/mL，再加入乙醇使含醇量达 到80%，用10%Na0H调pH至7. 9~8. 1，静置12~36小时，取上清液过滤，滤液浓缩回收乙 醇至无醇味，浓缩物加注射用水稀释至总黄酮醇苷的含量为0. 90~I. 10mg/mL、银杏内酯A 的含量为〇. 06~0. 90mg/mL、银杏内酯B的含量为0. 04~0. 60mg/mL、银杏内酯C的含量 为0· 04~0· 50mg/mL，用HCl调pH至2. 0~3. 0,过滤，滤液灌装于容器中，115°C、30分钟 灭菌，冷冻，缓化，过滤，滤液用40%Na0H溶液调pH 5. 7~6. 0,混匀，待温度下降至50 °C以 下，过滤，滤液灌装于容器中，经115°C、30分钟灭菌。 进一步优选地，在浓缩物加注射用水稀释的过程中使用近红外光谱仪进行在线检 测。 优选地，步骤（4)中大孔树脂柱的洗脱液流出口安装有近红外光谱仪的样品流通 池，所述洗脱液从样品流通池流过而被近红外光谱仪在线检测。 优选地，步骤（4)中第⑤步为用5BV的40%乙醇以L 0~2. 0BV/h的流速冲洗大 孔树脂柱，收集洗脱液，所得洗脱液经检测不含总银杏酸。 优选地，步骤（3)中冷藏放置时间为24~48小时。 优选地，步骤（3)中所述过滤为采用3层中速滤纸过滤。 优选地，步骤（5)中所述过滤为采用0· 45~0· 80 μ m微孔滤膜过滤。 本专利技术中所述浓缩为真空旋转浓缩。 作为优选地，本专利技术中所述浓缩还可以为真空刮板浓缩。 在本专利技术提供的制备方法中，使用了近红外光谱仪对银杏叶提取物进行实时、多 组分的在线分析检测。因近红外光谱法检测不需要对样品进行前处理，因此其不消耗样品， 也不需要其它试剂，检测过程中无污染，安全性好。近红外光谱法实时获得检测结果，保证 了银杏叶提取物制备过程的连续性，节约了时间。 与现有技术相比本专利技术提供的技术方案其优点在于：有效地去除了有害成分总银 杏酸，降低了类过敏反应的发生，提高了安全性；提高目标成分纯度，提高产品质量；实现 了自动在线检测。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术作详细阐述，所述的实施例仅是对本专利技术的技术方 案进行解释和说明，而不是对本专利技术的技术方案进行限制。 实施例1 (1) 取银杏叶饮片lkg，粉碎，过8目筛，加入银杏叶重量10倍（v/w)的70%乙醇浸泡 2小时，70°C加热回流提取2小时，采用3层中速滤纸过滤，得药渣和取液； (2) 向步骤（1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍（v/w)的70%乙醇，70°C加热回流提取 2小时，用3层中速滤纸过滤，得药渣和提取液； (3) 将步骤⑴和⑵所得提取液合并，当温度降至30°C时，用20% NaOH溶液调节pH 至7. 9,用3层中速滤纸过滤，滤液于70°C真空旋转浓缩回收乙醇，并浓缩至Ig银杏叶/mL， 加纯化水至银杏叶重量的10倍（v/w)，在35°C时用HCl调节pH至2. 0,在10~15°C的条 件下静置2小时，用3层中速滤纸过滤至滤液澄清，滤液于65°C真空旋转浓缩至近红外光谱 在线检测总黄酮醇苷含量大于5mg/mL ; (4) 将步骤（3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种银杏叶提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)取银杏叶饮片粉碎，加入银杏叶重量10倍(v/w)的60～75%乙醇浸泡2～3小时，60～70℃加热回流提取2～3小时，过滤，得药渣和提取液；(2)向步骤(1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍(v/w)的60～75%乙醇，60～70℃加热回流提取1～2小时，过滤，得药渣和提取液；(3)将步骤(1)和(2)所得提取液合并，当温度降至30～40℃时，用20% NaOH溶液调节pH至7.9～8.1，冷藏放置12～72小时，过滤，滤液于60～70℃浓缩回收乙醇，并浓缩至1～3g银杏叶/mL，加纯化水至银杏叶重量的10倍(v/w)，在温度小于40℃时用HCl调pH至2.0～3.0，在10～15℃的条件下静置2～8小时，过滤至滤液澄清，所述滤液浓缩至近红外光谱仪在线检测总黄酮醇苷含量大于5mg/mL，得浓缩物；(4)①将步骤(3)所得浓缩物以1.0～1.6BV/h的流速加入到大孔树脂柱中，用1～3BV的纯化水以1.2～2.5BV/h的流速冲洗大孔树脂柱；②用2～4BV的10%乙酸钠溶液以1.0～4.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱；③用纯化水以1.0～3.0BV/h的流速将大孔树脂柱冲洗至中性；④用1～3BV的25%乙醇以1.0～3.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱；⑤用2～6BV的30～60%乙醇以1.0～2.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，得到银杏叶提取物，所述银杏叶提取物经检测不含总银杏酸。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：方同华，许照芹，项彦华，席桂才，李学东，岳大彪，周广红，贾文娟，
申请(专利权)人：黑龙江珍宝岛药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23