本发明专利技术涉及一种对带有移植器官的患者进行器官排斥反应风险评估的方法，及其他方面。这种方法包括测定患者的生物样本中非编码标记小RNA的表达量。这种方法进一步包括比较患者的非编码标记小RNA的表达量与非编码标记小RNA的参考表达量。在另外一个方面，本发明专利技术涉及一种用于对带有移植器官的患者进行器官排斥反应风险评估的试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种通过微小RNA表达水平评估人同种异体移植物状况的方法本申请要求一项申请号为61/160，188，申请日为2009年3月13日的美国临时专利申请的优先权益，此临时申请的内容在此全文参考并入。本申请所述的专利技术在美国国立卫生研究院的资助下完成，基金号为AI51652和 Al72790。美国政府享有本专利技术的某些权益。专利技术背景在过去短短的五十年中，器官移植已经由一项风险较高的实验性治疗发展成为一种安余的和能够挽救生命的治疗方法。然而，移植接受者需要使用非特异性的、有毒性的多种免疫抑制药物进行长期治疗，而且会因为移植器官存在免疫摊斥反应而一直生活在可能失去其网种异体移植物的阴影之下。在人体问进行器官移植时产生的急性排斥反应是导致同种异体移植失败的重要风险因素。但是急性排斥反应的结果却很难预测。目前，预测急性排斥反应能否对抗排斥治疗产生应答的最佳方法是通过芯针进行组织活检，取得同种异体移植物的组织，以观察其组织学特点。但是，进行组织活检的侵入性搡作会导致诸如出血、动静脉瘘、甚至移植物损失等并发症。因此，需要一种非侵入性测定方法，以确定移植器官出现急性排斥反应的患者是否存在丧失移植器官的风险。专利技术概述本专利技术满足了上述需求，在一个方面，其提供了一种对带有移植器官的患者进行器官排斥反应风险评估的方法。本方法包括测定患者生物样本中非编码标记小RNA的表达量。本方法进一步包括比较患者非编码标记小RNA的表达量与非编码标记小RNA的参考表达量。在一实施方式中，非编码标记小RNA选自SEQ ID NOs : 1_9，或其变体，其中与所述非编码标记小RNA的参考表达量相比，所述非编码标记小RNA表达量升高至少I倍时，即提示移植器官产生排斥反应的风险增加。 在另一个实施方式中，非编码标记小RNA选自SEQ ID NOs : 10_49，或其变体，其中与所述非编码标记小RNA的参考表达量相比，所述非编码标记小RNA表达量升高小于I倍时，即提示所述移植器官产生排斥反应的风险增加。在另一个实施方式中，这种方法进一步包括(C)测定生物样本中非编码标记小 RNA的表达量与非编码标记小RNA的参考表达量之间的差异；(d)测定患者的生物样本中内源性表达的非编码参比小RNA的表达量；(e)测定患者的生物样本中内源性表达的非编码参比小RNA的表达量与内源性非编码参比小RNA的参考表达量之间的差异；(f)比较步骤 (c)中的差异与步骤(e)中的差异；其中步骤(c)中的差异大于步骤(d)中的差异时，进一步提示所述移植器官产生排斥反应的风险增加。在另一个实施方式中，对带有移植器官的患者进行器官排斥反应风险评估的方法包括(a)测定患者生物样本中非编码标记小RNA的表达量,所述非编码标记小RNA选自 SEQ ID NOs :1-9或其组合；(b)测定患者生物样本中内源性表达的菲编码参比小RNA的表达量；(C)比较步骤(a)的测定结果与步骤(b)的测定结果，以确定第一个比率；(d)测定带有非排斥器官的人体的生物样本中所述非编码标记小RNA的表达量，所述非编码标记小 RNA选自SEQ ID NOs :1_9或其组合；(e)测定带有非排斥器官的人体的生物样本中内源性表达的非编码参比小RNA的表达量，且比较步骤(d)的测定结果与步骤(e)的测定结果，以确定第二个比率；其中计算得到第一个比率比第二个比率至少高I倍时，即提示所述移植器官产生排斥反应的风险增加。在另一个实施方式中，对带有移植器官的患者进行器官排斥反应风险评估的方法包括(a)测定患者生物样本中非编码标记小RNA的表达量,所述非编码标记小RNA选自 SEQ ID NOs 10-49或其组合；(b)测定患者生物样本中内源性表达的非编码参比小RNA的表达量；(c)比较步骤(a)的测定结果与步骤(b)的测定结果，以确定第一个比率；(d)测定带有非排斥器官的人体的生物样本中所述非编码标记小RNA的表达量，所述非编码标记小RNA选自SEQ ID NOs : 10-49或其组合；(e)测定带有非排斥器官的人体的生物样本中内源性表达的非编码参考小RNA的表达量，且比较步骤(d)的测定结果与步骤(e)的测定结果，以确定第二个比率；其中计算得到第一个比率比第二个比率高至少小于I倍时，即提示所述移植器官产生排斥反应的风险增加。在另一个方面，本专利技术涉及一种用于对带有移植器官的患者进行器官排斥反应风险评估的试剂盒。这种试剂盒包括至少一种与选自SEQ ID NO :l-49s或其变体的非编码标记小RNA互补的核酸分子，以及一种用于测定生物样本中非编码标记小RNA表达量的方式。附图说明 图1.对miRNA表达谱差异进行的无监督聚类分析和主成分分析能够区分人肾脏同种异体移植物的急性排斥反应组织活检样本与正常同种异体移植物组织活检样本。(A) 采用含有365个人成熟miRNA的引物对和TaqMan探针的微流控芯片，测定7份人肾脏同种异体移植物组织活检样本中微小RNA(miRNA)的表达类型。在所有样品中，共有174±7个miRNA的表达水平具有显著性(即，Ct < 35)。性别、年龄、种族、移植类型以及从移植到组织活检的时间如下AR1 (男性，黑人，52岁，活体捐赠，161天)，AR2(男性，白人，32岁，活体捐赠，119天)，AR3 (女性，白人，48岁，尸体捐赠，31天)，NI (女性，黑人，40岁，活体捐赠，203天)，N2(男性，印第安人，50岁，活体捐赠，191天)，N3(男性，黑人，31岁，活体捐赠，196天)和N4 (男性，亚裔，51岁，尸体捐赠，88天)。根据表达类型的相似性，用无监督聚类分析对组织活检样本进行分组。组织活检样本表达类型的相关程度以图片顶部的树状图表示。分枝长度表示各样品(上部)或miRNA(左侧)之间的相似程度。两个主要的簇(上部)将AR组织活检样本与正常同种异体移植物组织活检样本精确分离。各列代表肾脏同种异体移植物组织活检样本的表达谱，各行代表miRNA。各格的颜色反映了与在组织活检样本的整体集合中相应miRNA的平均表达水平相比，相应样品中相应 miRNA的表达水平。红色强度增加表示给定样品中特定miRNA的表达量较高，绿色强度增加表示该miRNA的表达量较低。标尺(右下角)表示，给定样品中miRNA的丰度与所有样品中的平均水平之比。(B)根据在所有样本中具有显著性表达的174个小RNA( BP, Ct < 35)，对7个肾脏同种异体移植物组织活检样本进行主成分分析。PCA是一种用于减少多变量系统维度的双线性分解方法，其用于概述多变量数据中的簇。其将若干相关变量转化为被称为主成分(PC)的少数非相关变量。第一个PC用于解释数据中尽可能多的变异性，各后续成分用于解释尽可能多的剩余变异性。PCA显示了明显的聚类性，并且证实可以将AR样本从正常同种异体移植物组织活检样本中分离。通过PCl将样本精确分组，其解释了 miRNA 表达总体变异性的45. 91%，而PC2解释了变异性的21. 48%，且不能根据其诊断将样本分类。图2. miRNA在急性排斥反应组织活检样本与正常同种异体移植物组织活检样本中的差异性表达，P值< O. 05。采用含有365个人成熟miRNA的引物对和T本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·苏桑瑟冉，
申请(专利权)人：康奈尔大学，
类型：
国别省市：
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