淡紫醌霉素及其甲酯的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种淡紫醌霉素及其甲酯的制备方法。以链黑菌素产生菌-柔毛链霉菌Streptomyces.flocculus?CGMCC4.1223作为出发菌株，对该链黑菌素生物合成基因簇中的双氧化酶基因stnBl实行选择性敲除，获得相应的stnBl基因失活突变株ΔstnBl；对突变株发酵产物粗提物采用反相硅胶、凝胶等柱层析和半制备HPLC等色谱分析技术，制得淡紫醌霉素及其甲酯。本发明专利技术建立了利用链黑菌素产生菌通过基因工程手段制备淡紫醌霉素的方法，提高了淡紫醌霉素和淡紫醌霉素甲酯的产量，分别达到每5升培养基可以获得约1mg淡紫醌霉素和20mg淡紫醌霉素甲酯，并且经过菌种优化和发酵优化还有进一步提升的空间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗肿瘤试剂制备领域，尤其涉及一种抗肿瘤试剂淡紫醌霉素Iavendamycin及其甲酯的生产工程菌株构建方法及它们的制备方法。
技术介绍
链黑菌素是一个由绒毛链霉菌(Streptomyces flocculus)产生的具有独特喹啉环结构的抗肿瘤抗生素。其抗肿瘤活性良好，是一种广谱抗肿瘤抗生素，对脑癌、颈癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌，特别是对白血病、淋巴瘤和黑素瘤具有很好的疗效。链黑菌素的药理作用是可选择性地抑DNA合成，主要作用于S期，一个分子的链黑菌素可与2000个分子的脱氧核苷酸稳定地结合，并能使瘤细胞染色体断裂，使已形成的DNA降解.由于具有较大的骨 髓毒性，因此很少单独用药用于临床。链黑菌素含有四个环，其中三个环几乎处于同一个平面，而第四个环与这个平面几乎呈垂直状态。淡紫醌霉素(Iavendamycin)是从链霉菌(S.1avendulea strain C22030)分离鉴定的氨基醌类化合物，具有与链黑菌素相类似的结构，但是其化学结构含有五个环，这五个环几乎处于同一平面。淡紫醌霉素具有与链黑菌素相近的抗肿瘤活性和抗肿瘤谱，但是比链黑菌素低得多的毒性。自1981年淡本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种淡紫醌霉素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：A、以链黑菌素原始产生菌柔毛链霉菌Streptomyces?flocculus?CGMCC4.1223为出发菌株，克隆得到链黑菌素生物合成基因簇；B、对所述链黑菌素生物合成基因簇中的双氧化酶stnBl基因进行选择性失活，获得stnBl基因失活突变菌株ΔstnBl；C、对所述突变菌株ΔstnBl进行发酵，将发酵液离心，离心后的滤液调整pH值至9～10，用不溶于水的中等极性有机溶剂A反复萃取，取水相滤液；D、调整所述水相滤液pH值至4～5，用所述不溶于水的中等极性有机溶剂A反复萃取，收集中等极性有机溶剂相B，浓缩得到粗提物B，对所述粗提物B进行纯...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林双君，邓子新，徐飞，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：