一种黄曲霉毒素B1的发酵培养基及发酵方法技术

本发明专利技术属于发酵工程技术领域，特别涉及一种产生黄曲霉毒素B1的发酵培养基和发酵方法。一种黄曲霉毒素B1的发酵培养基，该培养基的组份中含有占培养基总重量1～5%的酵母提取物，所述的发酵培养基为复苏培养基、固体发酵培养基或生长促进营养液。一种黄曲霉毒素B1的发酵方法，包括菌种复苏和固体发酵培养两个步骤，采用黄曲霉菌种进行发酵，采用本发明专利技术提供的发酵培养基进行菌种复苏和固体发酵培养。按照本发明专利技术提供的培养基和培养程序，黄曲霉毒素B1发酵培养基固体风干物中浓度可达7349ppb，相比现有技术的发酵效价，具有显著的进步。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于发酵工程
，特别涉及一种产生黄曲霉毒素BI的发酵培养基和发酵方法。
技术介绍
黄曲霉毒素(Aflatoxins)是黄曲霉或寄生曲霉产生的一类真菌毒素，为剧毒和强致癌物，于1993年被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为I类致癌物。目前已确定的黄曲霉毒素有20多种，而污染粮食的黄曲霉毒素主要有黄曲霉毒素BI、B2、Gl、G2和Ml等。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至急性中毒死亡。在天然污染的粮食中，黄曲霉毒素BI毒性最大，量也最多，致癌性也最强。黄曲霉毒素BI可在玉米，花生，花生油、大米、棉籽、禽蛋、肉、奶(奶制品)和一些干果中检测至IJ，尤其是高温高湿地区的粮油及制品中检出率和含量更高。如果含有黄曲霉毒素BI的食 品被人食用，会引起急性黄曲霉毒素中毒或诱发肝癌。含有黄曲霉毒素BI的饲料被动物食用，常引起动物急性中毒或带来抗病力低等亚临床症状。此外，乳用动物(如奶牛)还可将饲料中的黄曲霉毒素BI转化为乳品中的黄曲霉毒素M1，进而带来乳品和乳制品的食品安全问题。为了探索食品或饲料中黄曲霉毒素BI的含量控制方法，需要开发出适合黄曲霉生长(复苏)快、活力高的培养基，研究黄曲霉的生长特性和产毒规律。在进行食品或饲料中黄曲霉毒素BI含量检测时，实验需要的黄曲霉毒素BI标准品，均来自国外纯品，原因之一在于国内黄曲霉发酵培养基中黄曲霉毒素BI含量偏低，提取所需培养基量大，成本高。另夕卜，要深入研究黄曲霉毒素BI的致病机理，也必须选用黄曲霉毒素BI含量高的培养物或黄曲霉毒素BI的提取物，进行动物实验，建立各种动物模型，对其致毒和解毒进行研究。目前，国内部分研究者进行动物毒理研究所使用的黄曲霉毒素BI，常来自国外的纯品，价格昂贵(如Sigma公司生产黄曲霉毒素BI价格为569RMB/mg)，试验成本高。而目前国内报道的黄曲霉培养物中黄曲霉毒素BI最高含量为3312ppb (庄振宏，2010)，毒素含量较低，单次实验所需培养物多，对实验的干扰也大。综上所述，有必要开发出黄曲霉毒素BI的发酵培养基及发酵方法，研究黄曲霉的生长特性，探索出饲料和食品中黄曲霉毒素BI含量的最佳控制方法和开展黄曲霉素BI对动物的致毒解毒实验研究。
技术实现思路
本专利技术提供了一种产生黄曲霉毒素BI的发酵培养基,用于解决目前传统培养基的孢子活力低、生长(复苏)周期长、以及产毒量低的问题。本专利技术还提供了一种生产黄曲霉毒素BI的发酵方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是一种黄曲霉毒素BI的发酵培养基，该培养基的组份中含有占培养基总重量I 5%的酵母提取物，所述的发酵培养基为复苏培养基、固体发酵培养基或生长促进营养液。作为优选，所述的复苏培养基各组分按重量百分比计包括5 20%蔗糖，I 5%酵母提取物，I 5%麸皮浸提液，I. 5%琼脂，I 4g/L硝酸钠，O. 2 O. 8g/L硫酸镁，O. 2 0.8 g/L氯化钾，O. 6 1.2 g/L磷酸氢二钾，0.01g/L五水硫酸亚铁，余量为水，培养基的初始pH为5. 5 7. O。为了实现黄曲霉孢子的快速复苏，专利技术人设计了由蔗糖、酵母提取物、麸皮浸提液、琼脂、NaNO3和微量元素配制成新的黄曲霉复苏培养基，试验显示利用本专利技术复苏培养基，黄曲霉孢子复苏所需的时间仅需二天，比传统Czapek’ s培养基的复苏时间缩短四天。作为优选，所述的固体发酵培养基各组分按重量百分比计包括60 80%籼米，8 30%蔗糖，4 10%豆柏，I 5%酵母提取物，I 5%麸皮，按比例配制完后，调节固体发酵培养基含水量为5 10%。作为优选，所述的籼米、豆柏和麸皮经粉碎，过20 40目标准分样筛。该固体发酵培养基可实现黄曲霉高效产黄曲霉毒素BI。 作为优选，所述的生长促进营养液各组分按重量百分比计包括5 20%蔗糖，I 5%酵母提取物，I 5%麸皮浸提液，I 4g/L硝酸钠，O. 2 O. 8g/L硫酸镁，O. 2 O. 8 g/L氯化钾，O. 6 1.2 g/L磷酸氢二钾，O. 01g/L五水硫酸亚铁，余量为水，培养基的初始pH为5. 5 7. O。该生长促进营养液用于补充发酵培养过程中营养物质和水分的损失,可确保黄曲霉菌在固体发酵培养基上高活力生长。作为优选，所述麸皮浸提液的制备方法如下取I单位重量麸皮置于干净烧杯中，然后加注4单位重量蒸馏水，将麸皮和水充分混合均匀后，放置在37°C恒温水浴锅中，浸泡10 12h，取上清液放置于离心管中，2000 3000rpm，离心5 10分钟，再将离心管中的上清液吸入到干净的烧杯中，麸皮浸出物制备完毕。制备的麸皮浸出物要求现配现用。培养基的灭菌要求所述的复苏培养基、固体发酵培养基及生长促进营养液，分别按比例配制好后(其中复苏培养基还需经过电炉加热溶解琼脂)，置于锥形瓶中在121 123 0C，O. 12MPa，灭菌20min，各培养基配制工作结束。复苏培养基的倒置在生物安全柜中，将灭菌好的复苏培养基倒置在经过灭菌的直径IOcm培养皿中，自然冷却。一种黄曲霉毒素BI的发酵方法，包括菌种复苏和固体发酵培养两个步骤，采用黄曲霉菌种进行发酵，采用本专利技术提供的发酵培养基进行菌种复苏和固体发酵培养。该方法采用了上述改进后的培养基，发酵选用的菌种为黄曲霉菌(来自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号3. 4409)，发酵工艺采用常规的工艺。按照本专利技术提供的培养基和培养程序，黄曲霉毒素BI发酵培养基固体风干物中浓度可达7349ppb，相比现有技术的发酵效价，具有显著的进步。本专利技术的有益效果是本专利技术研制的黄曲霉复苏培养基，霉菌生长速度快，孢子活力高，复苏或传代的时间极大缩短，提高了工作效率。本专利技术研制的固体发酵培养基，营养丰富，菌体生长旺盛，培养周期短，仅需12 14天，相对普通大米培养基，培养时间缩短3 4天，且黄曲霉毒素BI浓度显著提高。本专利技术提供的固体发酵培养基，主要采用籼米、麸皮、豆柏、蔗糖和酵母，原料易得、廉价。相对从国外进口的黄曲霉毒素BI，本专利技术提供的培养基生产出的黄曲霉素BI价格可降低80%以上。本专利技术提供的发酵方法，简单易行，可操作性强。具体实施例方式下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本专利技术的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本专利技术保护范围。在本专利技术中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。本专利技术的各实施例，以中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提供的黄曲霉(Aspergillus f lavus) 3. 4409,进行阐述。实施例1-4黄曲霉生长促进营养液的配制将表I所示的各组份混合后，用盐酸溶液调节混合溶液的PH值为5. 5 7. O。表I权利要求1.一种黄曲霉毒素BI的发酵培养基，其特征在于该培养基的组份中含有占培养基总重量I 5%的酵母提取物，所述的发酵培养基为复苏培养基、固体发酵培养基或生长促进营养液。2.根据权利要求I所述的一种黄曲霉毒素BI的发酵培养基，其特征在于所述的复苏培养基各组分按重量百分比计包括5 20%蔗糖，I 5%酵母提取物，I 5%麸皮浸提液，I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黄曲霉毒素B1的发酵培养基，其特征在于：该培养基的组份中含有占培养基总重量1～5%的酵母提取物，所述的发酵培养基为复苏培养基、固体发酵培养基或生长促进营养液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建新，熊江林，叶均安，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：