检测荧光增白剂VBL的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种检测荧光增白剂VBL的试剂盒，属于添加剂检测技术领域。包括盒体，盒体内主要有：具有放置试剂瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶、以及每个微孔内包被浓度为1-3μg/mL荧光增白剂VBL特异性抗原的酶标板；所述试剂瓶包括：装有浓度为1-3μg/mL荧光增白剂VBL特异性抗体溶液的试剂瓶。用该试剂盒对荧光增白剂VBL进行检测，具有成本低廉、操作简便、灵敏性高的优点，适合用于快速而准确的检测大批量样品中的荧光增白剂VBL中。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种添加剂检测技术，具体来说，特别是涉及一种检测荧光增白剂VBL的试剂盒。
技术介绍
荧光增白剂VBL(C. I.荧光增白剂85)，化学名称为4，4’-双二苯乙烯-2，2’- 二横酸钠,属二苯乙烯二嗪型增白剂，荧光强度为100%±5%，色光为青光微紫，易溶于水，中性，具有优良的匀染性和渗染性，能提高物质的白度和光泽，广泛用于纸张、塑料制品、洗涤剂、纺织品等。长期以来，荧光增白剂的安全性颇受争议，有资料显示荧光增白剂是低毒的，也有资料显示荧光增白剂的分子结构稳定，不易被分解，在生物体内长期累积，会使细胞发生变异，产生潜在的致癌因素。因此，在未充分评估荧光增白剂的安全性的情况下，并不是所有荧光增白剂都被允许使用，欧盟、美国、日本、中国等许多国家对荧光增白剂都有一定的监管，相关法规如欧盟2002/72/EC指令、美国联邦法规21CFR178. 3297和GB 9685-2008《食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准》都制定了允许用于生产塑料食品接触材料和制品的添加剂清单，对允许使用的荧光增白剂的最大添加量进行限制。鉴于此，建立相关产品的荧光增白剂的快速检测方法，开展定期监测和安全性评估，对于规范行业发展，保证产品质量，保护消费者身体健康和保护环境等具有深远的意义。而荧光增白剂VBL做为允许添加的荧光增白剂中的一种，也亟需一种合适的快速检测方法。目前，国内外对荧光增白剂的检测方法包括以下几种紫外灯直接照射观测法、色谱法、色谱质谱联用法。其中，紫外灯直接照射观测法只是一种简单的判断，不能鉴别荧光增白剂的种类；色谱法和色谱质谱联用法具有特异性高、结果准确的优点，但是这两种方法的缺点是样品前处理繁琐，消耗大量溶剂，且需要昂贵的实验室设备，检测成本高。
技术实现思路
基于此，本技术在于克服现有技术的缺陷，提供一种成本低廉、操作简便、灵敏性高的检测荧光增白剂VBL试剂盒。其技术方案如下检测荧光增白剂VBL的试剂盒，包括盒体，盒体内主要有具有放置试剂瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶、以及每个微孔内包被浓度为1-3 y g/mL荧光增白剂VBL特异性抗原的酶标板；所述试剂瓶包括装有浓度为1-3 u g/mL荧光增白剂VBL特异性抗体溶液的试剂瓶。下面对进一步技术方案进行说明在一些实施例中，所述试剂瓶还包括装有辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗的试剂瓶、装有荧光增白剂VBL标准品溶液的试剂瓶、两瓶装有显色剂的试剂瓶、装有终止液的试剂瓶、装有洗涤液的试剂瓶、装有浓缩样品稀释液的试剂瓶、装有封闭液的试剂瓶。在其中一个实施例中，该试剂盒还包括有用于检测时密封酶标板的封口膜。本技术的检测荧光增白剂VBL的试剂盒检测原理为将荧光增白剂VBL抗原吸附于固相载体上，加入样品或荧光增白剂VBL的标准溶液及荧光增白剂VBL抗体工作液，待测样品中荧光增白剂VBL和固相载体上包被的荧光增白剂VBL抗原竞争结合荧光增白剂VBL抗体，孵育后，加入酶标二抗进行酶活性的放大作用，孵育，显色后终止，测定样品的吸光度，该值与样品中荧光增白剂VBL的量呈负相关，与标准曲线比较即可得出荧光增白剂VBL浓度范围。下面对前述技术方案的优点进行说明本技术的检测荧光增白剂VBL的酶联免疫试剂盒，利用竞争酶联免疫测定法检测荧光增白剂VBL，具有特异性高，结果准确且前处理简单，对仪器设备要求低、检测成本低的特点。同时，本试剂盒中的试剂以工作液形式提供，操作简单、快捷，为使用者节省了时间并减少因步骤复杂造成的误差。适合用于快速而准确的检测大批量样品中的荧光增白剂 VBL。附图说明图I是本技术实施例所述试剂盒结构示意图；图2是下凹瓶位设置示意图；图3是本技术实施例中酶标板结构示意图。附图标记说明1.盒体；2.下凹瓶位；3.塑料框架；4.酶标板；5.微孔。具体实施方式下面对本技术的实施例进行详细说明，但不对本技术的内容造成任何限制。实施例I本实施例所述的检测荧光增白剂VBL试剂盒的主要组成成份如下如图I-图3所示，所述检测荧光增白剂VBL试剂盒的盒体I内具有固定泡沫模具形成的下凹瓶位2 (共有14个下凹瓶位)，下凹瓶位用于放置装有溶液的试剂瓶；位于塑料框架3中的酶标板4，酶标板4中的微孔5内包被有荧光增白剂VBL特异性抗原。具体组成如下I)荧光增白剂VBL特异性抗原工作液；通过以下方法制得将荧光增白剂VBL0.87g，即I. Ommol和三乙胺I. Olg，即IOmmol分散于IOOmL干燥二氯甲烧中，零摄氏度下加入0. 5mL,即6. 46mmol甲磺酰氯作为活化试剂，室温搅拌反应3. 5h，荧光增白剂VBL的醇羟基可转化成甲磺酯基；随后将甲磺酯化对荧光增白剂VBL加入无水乙醇中，加入20倍量的液氨，回流搅拌反应5h，制得能够与蛋白质偶联的荧光增白剂VBL的半抗原；再将其与N-羟基丁二酰胺(NHS)和碳二亚胺(EDC)混合，再与牛血清白蛋白混合，室温搅拌lh，偶联制备得到荧光增白剂VBL特异性抗原，并用浓缩样品稀释液稀释至浓度为2 y g/mL。2)荧光增白剂VBL特异性抗体工作液；通过以下方法制得将合成得到的荧光增白剂VBL特异性抗原作为免疫原对10周龄的Balb/c小鼠进行免疫。首次免疫使用完全弗氏佐剂与荧光增白剂VBL特异性抗原的磷酸盐缓冲溶液(0. 01M, pH7. 4)乳化，抗原浓度为0. 4mg/mL，剂量为120 u g/只，以后每次加强免疫使用不完全弗氏佐剂与荧光增白剂VBL特异性抗原的磷酸盐缓冲溶液(0. 01M,PH7. 4)乳化，剂量同初次免疫。初次免疫两周后，每间隔10天加强免疫一次，共免疫5 10次，当抗体效价不再升高时，进行最后一次免疫，最后一次不加免疫佐剂直接用荧光增白剂VBL特异性抗原的磷酸盐缓冲溶液(0. 01M, pH7. 4)腹腔注射，剂量同初次免疫。尾部取血检测血清效价。取血清效价高的小鼠，在无菌条件下，取其脾细胞按6:1比例与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。采用有限稀释法筛选杂交瘤细胞，得到完全同质的单克隆抗体和稳定的单克隆杂交瘤细胞株。单克隆抗体的制备与纯化Balb/C小鼠，于一周前采用不完全佐剂腹腔注射进行致敏，剂量为0. 5mL/只。将细胞浓度为I. 5万/mL的杂交瘤细胞混悬液注射到小鼠腹腔中，剂量为0.5mL/只。接种杂交瘤细胞疒10天后，收集腹水，反复收集数次。存于4°C冰箱保存。经辛酸-硫酸铵沉淀法进行腹水纯化。具体方法每I份腹水中加入3份乙酸钠缓冲液(浓度 0. 05mol/L，pH4. 0)，用浓度 0. Immo 1/L NaOH调整 pH4. 5，在 4°C下搅拌 30min，期间缓 慢加入辛酸，按稀释前腹水体积计算40 V- L/mL ;在4°C静止3h,离心(10140r/min, 30min),取上清液，保持在4°C环境中，30min内加入(NH4) 2S04使其终浓度为0. 277g/mL,静止lh，4°C离心(10140r/min,30min),弃上清液,得到单克隆抗体沉淀,并用浓缩样品稀释液稀释至浓度为 g/mL。3)辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗；由商业公司提供的辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗；4)荧光增白剂VBL标准品溶液6瓶；浓度分别%=IX本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测荧光增白剂VBL的试剂盒，其特征在于，包括盒体，盒体内主要有：具有放置试剂瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶、以及每个微孔内包被浓度为1?3μg/mL荧光增白剂VBL特异性抗原的酶标板；所述试剂瓶包括：装有浓度为1?3μg/mL荧光增白剂VBL特异性抗体溶液的试剂瓶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冼燕萍，郭新东，罗海英，侯向昶，吴玉銮，邓龙，罗东辉，柯振华，
申请(专利权)人：广州市质量监督检测研究院，
类型：实用新型
国别省市：