用于病毒载体纯化的可扩缩生产平台和用于基因治疗中的如此纯化的病毒载体制造技术

本发明专利技术提供了用于制备高度纯化的AAV载体制剂的方法。本文所述非常纯的AAV制剂对于临床用途较优。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生产质量管理规范和病毒载体纯化的领域。更特别地，组合物和方法促进用于基因治疗方案的高度纯化的重组AAV的制备。
技术介绍
在本说明书各处引用若干出版物和专利文件以描述本专利技术所从属的领域的状态。这些引用各自通过引用如同全部陈述那样结合于本文中。基因递送是用于获得性疾病和遗传性疾病的治疗的充满前景的方法。已描述了用于基因转移目的的许多基于病毒的系统，包括基于腺相关病毒(AAV)的系统。AAV为属于依赖病毒属的依赖辅助病毒的DNA细小病毒。AAV需要与无关的辅助病毒(例如腺病毒、疱疫病毒或牛痘)共感染，以便发生生产性感染。在辅助病毒不存在的情况下，AAV通过将其基因组插入宿主细胞染色体中建立潜伏状态。通过辅助病毒的随后感染拯救整合的病毒基因组，其可接着复制以产生感染性的病毒子代。AAV具有广泛的宿主范围并且能够在存在合适的辅助病毒下在来自任何物种的细胞中复制。例如，人AAV在与犬腺病毒共感染的犬细胞中复制。AAV不与任何人或动物的疾病相关并且当整合时似乎并不改变宿主细胞的生物学性质。对于AAV的综述，参见例如 Berns 和 Bohenzky (1987) Advan本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.01.28 US 61/299,1841.一种用于从包含AAV载体颗粒、空衣壳和宿主细胞杂质的AAV制备物中纯化包含编码治疗蛋白或其片段的转基因的真正的AAV载体颗粒，从而提供基本不含AAV空衣壳的AAV产物的方法，所述方法包括 a)收获包含重组AAV的细胞； b)经由切向流过滤浓缩所述细胞； c)通过微射流裂解所述细胞以形成裂解液； d)过滤，从而使步骤c)的裂解液澄清； e)通过离子交换柱层析法纯化AAV颗粒并任选通过切向流过滤浓缩柱洗脱液； f)混合所述洗脱液和氯化铯并将所述混合物进行离心； g)在步骤f)之后收集病毒颗粒并通过切向流过滤进行相同的缓冲液交换； h)用表面活性剂配制纯化的AAV颗粒以提供AAV颗粒制剂； i)过滤所述制剂以移除任何残留的杂质，其中所述AAV产物中存在的所述真正的AAV载体颗粒的量为至少95%。2.权利要求I的方法，其中所述AAV载体颗粒以100mg/mL的浓度存在。3.权利要求I的方法，其中步骤i)的所述AAV颗粒以IO15个颗粒/mL的浓度存在。4.权利要求I的方法，其中步骤i)的所述AAV颗粒以IO16个颗粒/mL的浓度存在。5.权利要求I的方法，其中步骤i)的所述AAV颗粒以IO17个颗粒/mL的浓度存在。6.权利要求I的方法，其中所述AAV载体颗粒来源于选自以下的AAVAAVU AAV2、AAV5、AAV6、AAV8 和 AAV9。7.—种AAV载体制剂，其在药学上可接受的载体中包含使用权利要求I的方法纯化的AAV颗粒。8.权利要求I的方法，其中所述转基因编码选自以下的核酸SiRNA、反义分子、miRNA、核酶和 shRNA。9.权利要求I的方法，其中所述转基因编码选自以下的基因产物胰岛素、胰高血糖素、生长激素(GH)、甲状旁腺激素(PTH)、生长激素释放因子(GRF)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素、制管张素、粒细胞集落刺激...

【专利技术属性】
技术研发人员：JF赖特，G屈，B豪克，K海，
申请(专利权)人：费城儿童医院，
类型：
国别省市：