一种适合双向电泳的蚯蚓蛋白样品制备方法技术

本发明专利技术公开了一种适合双向电泳的蚯蚓总蛋白样品制备的方法。以蚯蚓为试材，于液氮中快速研磨，制得蚯蚓干粉。向蚯蚓干粉中加入以丙酮为溶剂的10%（w/v）的三氯乙酸，之后将-20℃下预冷的以丙酮为溶剂的10%（w/v）的三氯乙酸与所得沉淀充分混合，洗涤沉淀，得到蚯蚓总蛋白粗提物。最后加入样品裂解液充分混合，离心取上清，制得适合双向电泳的高质量的蚯蚓总蛋白样品。本发明专利技术制备蚯蚓总蛋白双向电泳样品的方法可获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱，便于后续的生物质谱分析鉴定蛋白，为蚯蚓蛋白组学研究提供重要技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
蚯蚓在生态系统中具有重要的功能，能疏松土壤，增加土壤有机质并改善土壤结构，还能促进酸性或碱性土壤变为中性土壤，增加磷等速效成分，使土壤适于农作物的生长，促进农业增产。蚯蚓是土壤污染的敏感指示物，对多种重金属、有机农药、多氯联苯、多环芳烃、放射性污染物等环境有害物质有反应指示和积累指示的特殊作用。利用蚯蚓的分子、生物化学和生理反应(生物标志物)监测土壤污染情况现已备受关注。目前，国内外利用蚯蚓指示污染物对土壤生态系统造成的影响主要通过实地调查污染土壤中蚯蚓种群数量及种群结构；或是在实验室条件下，通过毒性和繁殖试验研究污染物对某一种类蚯蚓造成的伤害，即蚯蚓的生态毒理学研究。而从分子生物学，尤其是蛋白质组学方面的研究尚且较少。蛋白质组学分析是研究蚯蚓蛋白的自身变化及周围环境刺激响应的重要技术手段。其中双向电泳技术是在蛋白质水平上研究基因表达产物最有效的方法之一。选择合适的样品制备方法是双向电泳成功的关键因素之一，样品的制备直接影响到分离结果的有效性、可靠性及可重复性。由于蚯蚓中杂质成分复杂，如色素、多糖和核酸等都会严重干扰双向电泳，因此目前还没有制备适合双向电本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备蚯蚓总蛋白双向电泳样品的方法，其特征在于包括以下步骤：1）取吐泥1d后的蚯蚓于液氮中快速研磨成蚯蚓干粉，研磨时间为5？15min；2）按蚯蚓干粉质量与以丙酮为溶剂的溶液A的体积之比为1：10的比例，向蚯蚓干粉中加入适量溶液A充分混合，？20℃静置8？12h，得到蚯蚓总蛋白样品；所述以丙酮为溶剂的溶液A中的溶质为：0.01？0.03mmol/L的二硫苏糖醇、10%（w/v）的三氯乙酸；3）步骤2）中所得的蚯蚓总蛋白样品离心20？30min：4℃，转速12000？15000g，弃上清液；用？20℃下预冷的以丙酮为溶剂的溶液A洗涤沉淀，？20℃静置1？2h，弃上清液；使用溶液A洗涤沉淀3次以...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王金花，葛伟丽，朱鲁生，王军，谢慧，王慧，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：