【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动 物生殖生理与生物
具体涉及牛体细胞核移植中供体细胞的选择方法。
技术介绍
目前核移植的效率平均不到10%。体细胞核移植效率的提高，有赖于各环节的进一步完善，而供体细胞的准备是核移植关键的一步。供体细胞的来源和种类，不同发育阶段的供体核，以及供体细胞体外培养的代数和供体细胞来自个体的年龄等的不同，其核移植效果都存在着很大差异。当前一些研究是从细胞的代数上进行选择，研究结果尚无定论(高国龙，牛体细胞克隆中供体和受体细胞制备及重构胚构建的影响因素研究；博士论文，2007)，但是在目前很多核移植研究中，大多数使用的是传代次数较少的细胞，一般为4-6代，很多学者认为这类细胞利于核移植胚的发育。在注入受体细胞前，供体细胞的体外传代培养，极有可能造成遗传损伤。所以，研究者们一般采用短期培养的细胞(10代以内)做核供体，不过也有例夕卜，Kubota等用成年牛体细胞传至10和15代的细胞进行克隆的重构胚发育率比传5代的高，并且只有传至10和15代的细胞进行克隆得到了克隆牛犊。这个明显不同的研究结果可能是与供体动物年龄和供体细胞体外培养的时间长短有很大关系...
【技术保护点】
一种筛选牛核移植供体细胞的方法，其特征在于以下步骤：1)剪取牛耳尖端4？5cm2的组织，利用接种法培养得到牛耳组织成纤维细胞；2)在步骤1)的细胞传至2、6、13、20代时分别测定细胞活力，即MTT？OD值；3)挑选细胞活力OD值为0.609±0.053的第六代的细胞，备用；4)用浓度为100μmol/L的β？巯基乙醇处理步骤所得的细胞24h的细胞作为供体细胞；5)取牛卵母细胞在成熟培养液中培养至成熟，备用；6)将步骤5)的牛卵母细胞作为受体，进行核移植，观察并记录重构胚的卵裂率和囊胚率；其中：上述试剂的组分及配制方法如下细胞培养液？1和细胞培养液？2；细胞培养液？1：胎牛...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：易建明，赵玲玲，宋海泉，杨利国，陶林林，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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