抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY的制备方法技术

本发明专利技术涉及治疗牛乳房炎的产品，公开了一种抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY的制备方法，包括以下步骤：(S1)、制取不同类的牛乳房炎致病微生物抗原；(S2)、制取免疫蛋；(S3)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉；(S4)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品；(S5)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY。按本发明专利技术生产的产品具有对采用常规药物治疗无效的顽固性牛乳房炎的疗效特别明显；同时，还会明显增强奶牛体内白细胞的吞噬功能，提升其抗病原体感染的能力；可直接给奶牛补充抗体，抑灭奶牛体内的病原体，消除感染，迅速降低鲜奶体细胞数。

【技术实现步骤摘要】
抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY的制备方法
本专利技术涉及治疗牛乳房炎的产品，尤其是涉及一种不产生耐药性的可有效预防和治疗各种细菌、真菌和霉形体以及病毒引发的牛乳房炎的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY。
技术介绍
奶牛乳房炎是世界范围内最常见而又最难防治的奶牛疾病之一。目前全世界约有2.2亿头奶牛，其中1/3患有各种类型的乳房炎。据统计，临床型乳房炎占奶牛总发病的2成多，一般造成产奶量下降，乳液废弃，严重时，患牛乳区肿胀硬化、化脓、坏疽甚至萎缩，失去泌乳能力，被迫淘汰，每年因乳房炎而最终淘汰的病牛约占总淘汰率的10％。在所有的牛乳房炎中，隐性乳房炎在奶牛群中最普遍，在一个牛群中，大多数乳房炎(大约90％)是隐性型。因此，造成经济损失的主要是隐性乳房炎，其损失占每头泌乳母牛每年总生产能力的10％～11％[。即使在饲养水平较高的发达国家，隐性乳房炎的发病率也在50％以上。因此，给世界各国以及我国的乳牛业造成相当大的经济损失。目前，全球对奶牛乳房炎普遍采用抗生素进行治疗。但是，使用抗生素治疗一方面会造成牛乳中抗生素残留，另一方面会诱发细菌产生耐药性，使抗生素失效，造成慢性乳房炎特别是隐性乳房炎比例越来越来大。而且，抗生素只对细菌性乳房炎有一定疗效，对由真菌和霉形体以及病毒引起的牛乳房炎是无效的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种不产生耐药性的可有效预防和治疗各种细菌、真菌和霉形体以及病毒引发的牛乳房炎的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY。本专利技术是通过以下技术措施实现的，一种抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY的制备方法，包括以下步骤：(S1)、制取不同类的牛乳房炎致病微生物抗原：分别按致病微生物的分类培养并纯化一种或任意几种同类不同种的致病微生物，按任意比例混合均匀，然后加以超声粉碎；最后按重量1-10∶10-1的重量比例加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中，以8,000-30,000rpm高速粉碎匀化，形成油包水溶液，重复上述方法分别制得各类不同类的致病微生物抗原；(S2)、制取免疫蛋：采用淘汰法筛选具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类，再分别采用上一步骤制备不同类的致病微生物抗原对高免疫应答能力的选择产蛋禽类进行免疫；每隔二周再强化注射一次，计免疫三次；第一次免疫20天后，检取免疫的母鸡所产免疫蛋，并进行编码标记；(S3)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉：根据免疫所用不同类的致病微生物抗原，将免疫蛋分类并标记编码，用流动水洗净免疫蛋，再用苏打水消毒，打蛋机打碎免疫蛋，筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀；按蛋黄液体积的4-6倍加入蒸馏水稀释并混合均匀，用1.0NHCI溶液调pH至5.5-6.0，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-60℃，静置12小时-24小时；将稀释液于10,000rpm离心20分钟；取分离所得的上清液置超滤器中进行超滤浓缩10-20倍；继而加入2.0％海藻酸钠水溶液，稀释至0.1％的浓度，搅拌至出现浑浊；再加入2.0％CaCl2液，稀释至0.1％的浓度，搅拌均匀，40℃静置8-12小时；8,000rpm离心20分钟，取上清液；0.45μm膜串连0.22μm膜过滤除菌；使用除病毒过滤器除去病毒；冷冻干燥，即分别制得不同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉；最后，将所制备的对应不同致病微生物抗原的特异性TgY粗提物进行编码标记；(S4)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品：将同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉分别经过蛋白层析装置进行纯化处理，制得不同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品；(S5)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY：将所制备的不同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品混合，充分搅拌均匀，即制得抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY。作为一种优选方式，所述步骤(S4)后为：步骤(S41)、制取纳米化抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品：抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品：对各类所述抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品进行纳米化处理，制得不同类的纳米化抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品；步骤(S42)、制取纳米脂质体抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品：对各类所述纳米化抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品进行脂质体化处理，制得不同类的纳米脂质体抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品；所述步骤(S5)更换为步骤(S50)、制取纳米脂质体抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY：将所制备的不同类的纳米脂质体抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品混合，充分搅拌均匀，即制得纳米脂质体抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY。具体的，所述致病微生物包括致病细菌、致病真菌、致病霉形体以及病毒。更具体的，所述致病细菌包括致病细菌包括无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌以及乳房链球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、星形诺卡氏菌、化脓链球菌、表皮葡萄球菌、变形杆菌、爱德华氏菌、肠杆菌、结核杆菌、多杀性巴氏杆菌和绿脓杆菌中的任意一种或任意几种组合；所述致病真菌包括隐球菌、奴卡氏菌、毛孢子菌、烟曲霉菌、酵母菌和白色念珠菌中的任意一种或任意几种组合；所述致病霉形体包括牛霉形体、牛生殖道霉形体和产碱霉形体中的任意一种或任意几种组合；所述病毒包括口蹄疫病毒、水疱性口炎病毒、牛瘟病毒、牛疱疹性乳头炎病毒和牛传染性鼻气管炎病毒中的任意一种或任意几种组合。其中所选的微生物来源为向ATCC(美国标准生物品收藏中心)购买以下代表性致病真菌和霉形体以及病毒(括号内数字是ATCC商品编号)，并采用常规方法培养和纯化这些真菌和霉形体以及病毒：，1.细菌：无乳链球菌Streptococcusagalactiae(编号：4768)停乳链球菌Streptococcusdysgalactiae(编号：6644)金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus(编号：BBA-1681)大肠杆菌Escherichiacoli(编号：35150)乳房链球菌Streptococcusuberis(编号：19436)肺炎克雷伯菌Klebsiellapneumoniae(编号：29011)星形诺卡氏菌Nocardiaasteroides(编号：9955)化脓链球菌Streptococcuspyogenes(编号：8669)表皮葡萄球菌Staphylococcusepidermidis(编号：35983)变形杆菌Proteusvulgaris(编号：8427)爱德华氏菌Edwardsiellatarda(编号：15947)结核杆菌Mycobacteriumtuberculosis(编号：25177)多杀性巴氏杆菌Pasteurellamultocida(编号：BBA-1113)绿脓杆菌Pseudomonasaeruginosa(编号：12175)2.真菌：隐球菌(编号：32040)、奴卡氏菌(编号：22338)、毛孢子菌(编号：4155)、烟曲霉菌(编号：1022)、酵母菌(编号：22873)、白色念珠菌(编号：)3.霉形体：牛霉形体(编号：27367)、牛生殖道霉形体(编号：14173)产碱霉形体(编号：29103)4.病毒：口蹄疫病毒(编号：VR-1432)、水疱性口炎病毒(编号本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(S1)、制取不同类的牛乳房炎致病微生物抗原：分别按致病微生物的分类培养并纯化任意一种或任意几种同类不同种的致病微生物，按任意比例混合均匀，然后加以超声粉碎；最后按重量1？10∶10？1的重量比例加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中，以8,000？30,000rpm高速粉碎匀化，形成油包水溶液，重复上述方法分别制得各类不同类的致病微生物抗原；(S2)、制取免疫蛋：采用淘汰法筛选具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类，再分别采用上一步骤制备不同类的致病微生物抗原对高免疫应答能力的选择产蛋禽类进行免疫；每隔二周再强化注射一次，计免疫三次；第一次免疫20天后，检取免疫的母鸡所产免疫蛋，并进行编码标记；(S3)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉：根据免疫所用不同类的致病微生物抗原，将免疫蛋分类并标记编码，用流动水洗净免疫蛋，再用苏打水消毒，打蛋机打碎免疫蛋，筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀；按蛋黄液体积的4？6倍加入蒸馏水稀释并混合均匀，用1.0N？HCI溶液调pH至5.5？6.0，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2？60℃，静置12小时？24小时；将稀释液于10,000rpm离心20分钟；取分离所得的上清液置超滤器中进行超滤浓缩10？20倍；继而加入2.0％海藻酸钠水溶液，稀释至0.1％的浓度，搅拌至出现浑浊；再加入2.0％CaCl2液，稀释至0.1％的浓度，搅拌均匀，40℃静置8？12小时；8,000rpm离心20分钟，取上清液；0.45μm膜串连0.22μm膜过滤除菌；使用除病毒过滤器除去病毒；冷冻干燥，即分别制得不同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉；最后，将所制备的对应不同致病微生物抗原的特异性TgY粗提物进行编码标记；(S4)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品：将同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉分别经过蛋白层析装置进行纯化处理，制得不同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品；(S5)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性復合IgY：将所制备的不同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品混合，充分搅拌均匀，即制得抗牛乳房炎致病微生物特异性復合IgY。...

【技术特征摘要】
1.一种抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY的制备方法，其特征在于包括以下步(S1)、制取不同类的牛乳房炎致病微生物抗原：分别按致病微生物的分类培养并纯化任意一种或任意几种同类不同种的致病微生物，按任意比例混合均匀，然后加以超声粉碎；最后按重量1-10:10-1的重量比例加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中，以8,000-30,000rpm高速粉碎匀化，形成油包水溶液，重复上述方法分别制得各类不同类的致病微生物抗原；(S2)、制取免疫蛋：采用淘汰法筛选具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类，再分别采用上一步骤制备不同类的致病微生物抗原对高免疫应答能力的选择产蛋禽类进行免疫；每隔二周再强化注射一次，计免疫三次；第一次免疫20天后，检取免疫的母鸡所产免疫蛋，并进行编码标记；(S3)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉：根据免疫所用不同类的致病微生物抗原，将免疫蛋分类并标记编码，用流动水洗净免疫蛋，再用苏打水消毒，打蛋机打碎免疫蛋，筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀；按蛋黄液体积的4-6倍加入蒸馏水稀释并混合均匀，用1.0NHCI溶液调pH至5.5-6.0，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-60℃，静置12小时—24小时；将稀释液于10,000rpm离心20分钟；取分离所得的上清液置超滤器中进行超滤浓缩10-20倍；继而加入2.0％海藻酸钠水溶液，稀释至0.1％的浓度，搅拌至出现浑浊；再加入2.0％CaCl2液，稀释至0.1％的浓度，搅拌均匀，40℃静置8-12小时；8,000rpm离心20分钟，取上清液；0.45μm膜串连0.22μm膜过滤除菌；使用除病毒过滤器除去病毒；冷冻干燥，即分别制得不同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉；最后，将所制备的对应不同致病微生物抗原的特异性IgY粗提物进行编码标记；(S4)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品：将同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY粗提物干粉分别经过蛋白层析装置进行纯化处理，制得不同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品；(S5)、制取抗牛乳房炎致病微生物特异性复合IgY：将所制备的不同类的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品混合，充分搅拌均匀，即制得抗牛乳房炎致病微生物特异性复合IgY。2.根据权利要求1所述的抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY的制备方法，其特征在于：所述步骤(S4)后为：步骤(S41)、制取纳米化抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品：对各类所述抗牛乳房炎致病微生物特异性IgY纯品进行纳米化处理，制得不同类的纳米化抗牛乳房炎致病微生物特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员：包晟，杨荣鉴，包海威，张善钧，汪玲，
申请(专利权)人：深圳雅臣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：