本发明专利技术涉及一种纳米脂质体抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）及抗妇科炎症病原体特异性复合ＩｇＹ及其组合制剂。优选产蛋禽类，分别制备瘤体细胞、病毒蛋白复合抗原和基因重组蛋白抗原以及细菌病毒复合抗原免疫产蛋禽类，亲和层析纯化抗人乳头瘤病毒特异性ＩｇＹ和抗妇科炎症病原体特异性ＩｇＹ，并将其纳米脂质体化，制得纳米脂质体特异性复合ＩｇＹ。其有益效果是：应用纳米脂质体技术，增加渗透能力和延效作用，提高疗效。可制成各种阴道或其它喷雾剂、洗液、凝胶剂、胶囊、栓剂、阴道膜、片剂和泡腾片以及软膏、霜剂等。纳米脂质体复合ＩｇＹ能渗入阴道粘膜层有效清除吸附在阴道表层和粘膜内的ＨＰＶ病毒和妇科炎症病原体，并经阴道粘膜吸收进入体内发挥预防和治疗作用，还可有效防止复发。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医疗卫生
，尤其涉及到一种纳米脂质体抗人乳头瘤病毒(HPV)及 抗妇科炎症病原体特异性复合IgY以及含这种纳米脂质体复合IgY的组合制剂。
技术介绍
目前宫颈癌是严重危害妇女健康和生命的疾病，每年约有50万新发病例，25万人死亡， 是引起妇女死亡的第二大原因，其中大部分在发展中国家，占80%左右。现代医学在大量试 验研究的基础上，己证实子宫颈癌源自一种人乳头瘤病毒(HPV)，这是目前人类所有癌症中 唯一一个病因明确的癌症。大量检测资料显示，HPV感染在18 28岁之间的青年人中最常见。可以说，所有在性 生活上活跃的人，50y。以上会在其一生中的某个时刻发生生殖器HPV感染。而比例高达80% 的绝大多数妇女，在50岁之前有过HPV感染。世界卫生组织的统计数字表明，全球被感染 总数约达到6,3亿人之多，占人口总数10%，其中女性占绝大多数；这是一个令人触目惊心 的大数字。比较麻烦的是，多数HPV感染没有体征和症状，但是病毒却可以通过性生活传染，这就 增加了这种病毒广泛传播的危险性。所以， 一般说来，如16岁前过早就有性生活的人，自己 或配偶有多个性伴侣的人，都是HPV的高危人群。此外，无论何种原因导致免疫力处于低下 状况的人，也都属于HPV病毒的易感者，如多孕早产的妇女、HIV病毒(艾滋病毒)感染者、 器官移植者或化疗患者，以及吸烟、吸毒和营养不良的妇女等。不过，迄今为止，医药界还没有开发出用于治疗HPV感染的抗病毒药物，抗生素和其它 杀菌药、消毒药对HPV病毒完全没有作用。目前，除了美国刚刚推出进行临床试验的一种疫12苗作为预防用外，还没有可用于治疗HFV感染的药物；对己经发生的HPV感染更没有任何 根除方法，现有的治标方法仅为去除外生的疣体；而且，各种暂时的处置手段均有复发的可 能。 一旦受到高危类型HPV病毒感染，最终往往会发展成为癌症。虽然美国已经研发出HPV 疫苗，不过经大量的临床试验证明，仅仅没有感染过HPV病毒的人，经过3针免疫注射，预 防HPV病毒感染的效果可以达到100%;但是，绝大多数妇女，在50岁之前都曾受到HPV 病毒感染，另外HPV疫苗对HPV病毒感染只有预防作用，并没有治疗作用，对于己受到HPV 病毒感染的人注射这种疫苗是无能为力的。更何况，要求每个女性特别是年青健康的青少年 在未受到感染前都一律要强制注射这种疫苗也不太现实；而且，现在也还没有足够证据表明 这种疫苗可使注射者获得终身免疫。目前的现状是l.临床上尚无预防HPV病毒感染的措施；2.对中晚期宫颈癌的化疗和手 术治疗效果不理想；3.宫颈癌的复发率较高，治疗费用又相当高；4.现有疫苗存在许多缺陷。另外，妇科感染也是危害女士健康的一种常见病，多发病。在健康女性中检查中，往往 有将近半数的人检查出患有轻重不同的妇科感染疾病。而且，女性一旦受到HPV病毒感染， 就很容易发生各种妇科炎症继发感染；而妇科炎症继发感染又反过来加剧HPV病毒感染的病 情。目前，世界各地的女士普遍采用抗生素或其它各种化学药剂来治疗这类感染性疾病。可 是，当人们服用抗生素或者用普通洗液、杀菌泡腾片、栓剂清洁阴道时，会把女士阴道内的 乳酸杆菌等有益菌也一道杀灭；从而，破坏阴道中起天然屏障作用的菌群生态平衡，造成各 种病原体乘机大量繁殖;结果，使不少女性因没有能根治的药物而终生受各种妇科感染和HPV 病毒感染的困扰。因此，寻找一种可同时对抗HPV病毒感染和妇科炎症，既可预防又具有治疗作用的新药， 是世界各国千百万女性的迫切需求，也是摆在国际医学科学界面前的一项重要课题。
技术实现思路
本专利技术针对上述现有技术的不足所要解决的技术问题是提供乳头瘤瘤体细胞蛋白和人乳头瘤病毒(HPV)基因表达蛋白两种方法，分别用乳头瘤瘤体细胞蛋白和基因工程重组HPV 病毒L1、 L2基因表达蛋白制作抗原，用淘汰法选择高免疫应答产蛋禽类，以免疫激活方法免 疫产蛋禽类，制成高活性抗HPV特异性lgY，以被动免疫的方式弥补现有注射疫苗方法之不足； 同时，应用纳米脂质体技术将所制得的抗HPV特异性IgY超微囊化，增加渗透能力和延效作用， 提高实际疗效。另外，本专利技术还制备一种纳米脂质体抗妇科炎症病原体特异性IgY，并将其与 纳米脂质体抗HPV特异性IgY复合成纳米脂质体抗HPV及抗妇科炎症病原体特异性复合IgY。 这种纳米脂质体化的抗人乳头瘤病毒(HPV)及抗妇科炎症病原体特异性复合IgY具有很强的 渗透能力和延效作用，会渗透阴道粘膜并进入体内抑灭人乳头瘤病毒(HPV)及妇科炎症病 原体；完全可用于治疗和辅助治疗HPV病毒感染以及妇科多种病毒和致病菌混合感染。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是一.制备抗人乳头瘤病毒(HPV)特异性IgY1筛选引致女性生殖器疣和宫颈瘤的有代表性的几种人乳头瘤病毒。 HPV病毒是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒，属双链死循环的小DNA病毒，包含约 8000个碱基对。其中包括8个早期开放读码框架(El-E8)、 2个晚期读码框架和1个非编码 长控区。在早期开放读码框架中，E6和E7基因对细胞生长刺激最为重要，E6、 E7编码的 E6、 E7蛋白引起宫颈上皮细胞永生化。而晚期读码框Ll和L2基因分别编码HPV的主要和 次要衣壳蛋白，组装成HPV病毒的衣壳。根据流行病学调查，人乳头瘤病毒(HPV)是一个大家族，共有100多型，约30型可以引 起男女生殖器部位的持续感染。HPV6、 ll为低危型，而HPV31、 33、 35、 39、 51、 52和58 为中危型，HPVI6、 18、 45和56为高危型。低危类型的HPV病毒可引起生殖器疣的形成，即 在生殖器表面或周围出现肉质的非癌变的生长物，6型和11型感染造成的生殖器疣占所有病 例的卯％。高危类型的HPV病毒有16、 18、 31和45型及其它型，感染如果长期存在，会导 致宫颈癌和阴道癌以及外阴癌等，其中16和18型感染导致的宫颈癌占70%左右。因此本发 明选择6、 11、 16、 18、 31和45型六种型作为有代表性的病原体。2.制备免疫用抗原。本专利技术采用以下两种方法制作免疫用抗原-2.1乳头瘤瘤体细胞蛋白2.1.1把从患者体内切割的乳头瘤瘤体组织置入"组织捣碎匀浆机"中，用8000-12000rpm 高速捣碎匀化，得到含乳头瘤瘤体细胞蛋白和人乳头瘤病毒(HPV)的蛋白悬浮浆液。乳头瘤瘤体组织经过"组织捣碎匀桨机"高速捣碎匀化后，其中的瘤体细胞和人乳头瘤 病毒(HPV)就都以蛋白形式存在于所制成的蛋白悬浮浆液中。根据本专利技术人的试验，以这 两种成份作为抗原免疫产蛋禽类，除了可得到抗人乳头瘤病毒(HPV)的抗体外，还可获得 抗人乳头瘤的抗体。因此，本专利技术没有必要从乳头瘤瘤体组织中分离人乳头瘤病毒(HPV) 蛋白。这也是本专利技术的新颖和独创之处。2丄2制备免疫用抗原将所制得的含乳头瘤瘤体细胞蛋白和人乳头瘤病毒(HPV)的蛋白悬浮浆液以1-10:1-10 的比例(通常为l:l)加入福氏佐剂，置入高速匀浆器以30,000rpm高速匀化，形成油包水乳 液，即制得乳头瘤瘤体细胞、病毒蛋白复合抗原。2.2基因工程表达蛋白根裾对HPV病毒结构的基因分析，HPV中的Ll和L2基因分别编码HPV的主要和次本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种纳米脂质体抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）及抗妇科炎症病原体特异性复合ＩｇＹ的制备方法，其特征在于纳米脂质体抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）及抗妇科炎症病原体特异性复合ＩｇＹ的制备方法是： １）、筛选引致女性生殖器疣和宫颈瘤的有代表性的人乳头瘤病毒以及引致阴道炎症的有代表性的病毒和致病菌、原虫； ２）、分别用人乳头瘤瘤体细胞、病毒蛋白和基因工程重组ＨＰＶ病毒Ｌ１、Ｌ２基因表达蛋白以及引致阴道炎症的有代表性的病毒和致病菌、原虫制备免疫用抗原； ３）、采用淘汰法选择高免疫应答的产蛋禽类，应用免疫激活方法分别以人乳头瘤瘤体细胞、病毒蛋白復合抗原和基因工程重组ＨＰＶ病毒Ｌ１、Ｌ２基因表达蛋白抗原以及妇科炎症病原体复合抗原免疫选择的产蛋禽类，制备含高活性抗体的免疫蛋； ４）、分别把三种含高活性抗体的免疫蛋制备成两种抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）特异性ＩｇＹ和一种抗妇科炎症病原体特异性ＩｇＹ； ５）、先后过离子交换柱、凝胶层析柱以及亲和层析柱，制得两种抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）特异性纯ＩｇＹ和一种抗妇科炎症病原体特异性纯ＩｇＹ； ６）用冷冻干燥机干燥，制得两种抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）特异性纯ＩｇＹ干粉和一种抗妇科炎症病原体特异性纯ＩｇＹ干粉； ７）、将所制得的两种抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）特异性纯ＩｇＹ干粉和一种抗妇科炎症病原体特异性纯ＩｇＹ干粉超微粉碎，得到两种纳米化抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）特异性纯ＩｇＹ和一种纳米化抗妇科炎症病原体特异性纯ＩｇＹ； ８）、将以上所制得的两种纳米化抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）特异性纯ＩｇＹ和一种抗妇科炎症病原体特异性纯ＩｇＹ制成纳米脂质体液晶微囊； ９）、将所述两种抗人乳头瘤病毒特异性ＩｇＹ脂质体中任一种与抗妇科炎症病原体特异性ＩｇＹ脂质体混合，制成纳米脂质体抗人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）及抗妇科炎症病原体特异性复合ＩｇＹ。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：包晟，
申请(专利权)人：深圳雅臣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]
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