本发明专利技术描述了一种能够在兔中治疗和/或预防兔出血热病毒感染的治疗剂，即，一种重组副痘病毒，其特征在于由外来核酸表达来自兔出血热病毒(RHDV)的VP60主要衣壳蛋白。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达兔出血热病毒的VP60主要衣壳蛋白的副痘病毒描述本专利技术涉及一种能够在兔中治疗和/或预防兔出血热病毒感染的治疗剂，即，一种重组副痘病毒，其特征在于由外来核酸表达来自兔出血热病毒(RHDV)的VP60主要衣壳蛋白。
技术介绍
兔出血热病毒(RHDV)是野兔和家兔(如欧洲野兔种(Oryctolagus cuniculus))中的一种高度接触性疾病，它首次在1984年于中华人民共和国报道。RHDV随后在1987年至1989年期间传播遍及欧洲。感染的成年兔通常在感染后48至72小时内死于坏死性肝炎和出血性综合征。群体中的发病率和死亡率可以高达90-100%。本疾病是商品兔生产中严重经济损失以及野兔中高死亡率的原因。遍及世界的商 品兔生产是一项重要产业,尤其在其中小规模兔养殖业良好建立的亚洲和中欧。RHDV的高度接触性和致命性质已经产生遍及许多国家的重大经济影响。在多个国家如新西兰和澳大利亚，额外的保护方面如兔子数量的控制已经导致理解和控制本疾病的明显国际性努力。许多实验室中的工作导致将RHD病毒基于衣壳形态、核酸类型和其他物理特征表征为一种杯状病毒。病毒粒子由无包膜的二十面体的直径35-40nm的衣壳组成，所述衣壳主要由60kDa主要多肽种类组成。该病毒由大约7. 4kb的正义单链RNA基因组编码并且组织为编码主要60kDa(VP60)衣壳蛋白、12kDa推定蛋白和3种非结构蛋白(包括RNA聚合酶和蛋白酶)的两个可读框。病毒衣壳因大约180拷贝的单个VP60蛋白的多聚化产生。已经做出许多努力以产生在兔群体中治疗和预防RHDV感染的疫苗，大部分所述疫苗依赖于VP60衣壳蛋白的施用。VP60衣壳蛋白已经在多种表达系统中产生，如酵母(Boga 等人，Journal of General Virology (1997)，78，2315-2318)、杆状病毒 / 细胞培养系统(Laurent 等人,Journal of Virology, 1994 年 10 月，6794-6798，Marin 等人，Virus Research 39 (1995) 119-128)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris) (0. Farnos等人，Antiviral Research 81(2009)25-36)。重组产生的VP60蛋白已经随后作为有效的疫苗应用。然而重组蛋白的生产伴随诸多难题，如形成结构上不规则的蛋白质聚集物、费时和复杂的蛋白质纯化系统，和难以产生足够质量和数量用于商业生产。还已经在马铃薯植物中产生重组VP60并且随后将其作为叶提取物中的疫苗应用(Castanon 等人，Journal of Virology, 1999 年 5 月，第 4452_4455 页)。虽然有效在接种的兔中产生针对VP60的抗体，但是从植物产生提取物与细胞培养物中产生病毒相比是比较慢的。必须培育、收获和加工转基因植物，因此使产量限于不适于商业应用的规模。类似地，豌豆衍生的重组VP60可以导致不良产率并因此限制商业应用(MikschofskyH等人，Plant Biotechnol J. 2009年8月；7(6) : 537-549)。相似的复杂情况在通过植物中的表达产生VP60抗原的相关尝试中是明显的。在胡萝卜中的表达导致相对于有效免疫而言不充分的表达水平(Mikschofsky, H.等人，2009，Journal of Agricultural Science147, 43-49, Mikschofsky, H.等人，2009，In Vitro Cell. Dev. Biol. Plant 45,740-749)。使用霍乱毒素B作为功能性佐剂的烟草植物表达也表明，除与植物表达系统中的生产相关的其他复杂性之外，VP60的表达水平是次最佳的(Mikschofsky, H.等人，2009，Plant Sci.doi : 10.1016/j.plantsci. 2009. 03. 010(Cholera toxin B as a functionaladjuvant intobacco plants (烟草植物中作为功能性佐剂的霍乱毒素B))。使用病毒作为RHDV疫苗为重组VP60蛋白的施用提供了一个有前景的替代。基于疫苗的痘苗病毒已经应用于RHDV(Bertagnoli等人，Vaccine,第14卷，第6期，第506-510页，1996)，虽然由痘苗病毒诱导的长期免疫可以导致再接种不成功或针对痘苗病毒编码的外来抗原的保护作用减弱。在目前，归咎于不能在细胞培养系统中培养RHDV (因此阻碍病毒疫苗生产)，现有疫苗涉及感染和处死动物，以便提取可以随后分离出RHDV的肝脏。这导致借助感染和处死而获得的灭活或死病毒疫苗，这是一项就动物保护和财务局限性而言行为具有明显缺点的行为。从感染动物获得的RHDV(在现有技术的疫苗中)随后在应用于接种之前灭活。与本专利技术的优选活的副痘-VP60病毒相比，这导致活性显著降低。在其制造期间还需要额外的 病毒灭活产物并且在应用之前经常需要额外的佐剂，以便增加接种后产生的免疫应答。副痘病毒(PPV)是痘病毒科(Poxviridae)的一个属，具有模式种PPV绵羊病毒(羊口疮病毒，0RFV)，它为用作疫苗载体提供几个潜在优点载体(Rziha等人，Journal ofBiotechnology 73 (1999) 235-242)。有利于ORFV疫苗载体的证据包括有限的宿主范围(绵羊和山羊)、其嗜性限于皮肤、无全身性感染、短期载体特异性保护性免疫和在感染部位出人意料强烈地刺激快速固有细胞免疫机制(Buttner，Μ.和H. J. Rziha. 2002. J. Vet. Med. BInfect. Dis. Vet. PublicHealth 49:7-16.)。已经成功地施用ORFV重组体作为针对多种病毒感染的疫苗，如针对猪中(Dory等人，Vaccine 24 (2006) 6256-6263，和 van Rooi j 等人，Vaccine 28(2010) 1808-1813)或小鼠中(Fischer 等人，Journal of Virology, 2003 年 9 月，第 9312-9323 页)的伪狂犬病毒以及针对大鼠中的博尔纳病毒(Henkel等人，J. ofVirology 2005，第314-325页)。然而ORFV未曾在兔中应用或用作针对RHDV的疫苗。尽管近来在针对RHDV的疫苗方面取得进展，但是仍迫切需要强用于控制野生兔群和商品兔群中RHDV感染的新方法。
技术实现思路
根据现有技术，作为本专利技术基础的技术问题是提供能够在兔中治疗和/或预防兔出血热病毒感染的有效治疗剂。这个问题由独立权利要求的特征解决。本专利技术的优选实施方案由从属权利要求提供。本专利技术因此涉及一种重组副痘病毒，其包含来自兔出血热病毒(RHDV)的VP60主要衣壳蛋白。羊口疮病毒提供有限的宿主范围(绵羊和山羊)和嗜性，并且因此是相对安全的病毒载体。在一个实施方案中，本专利技术副痘病毒的特征在于来自兔出血热病毒(RHDV)的VP60主要衣壳蛋白由外来核酸序列表达。从重组副痘病毒表达的RHDV的VP60蛋白发挥作用以在治疗的动物中诱导抗原本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿希姆·日哈，
申请(专利权)人：里姆瑟药物股份公司，
类型：
国别省市：
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