一种改进的生产β-甘露聚糖酶的方法技术

技术编号:8239266 阅读:197 留言:0更新日期:2013-01-24 19:14
本发明专利技术涉及一种β-甘露聚糖酶的高产方法,本方法是通过将一个编码为内切β-甘露聚糖酶的多核苷酸被化学合成、克隆以及与a-因子信号肽结合后在胞外表达(受到乙醇氧化酶基因AOX1启动子的控制)等过程。在一个500L的生物反应器中,所选的高表达工程菌株能分泌大约4g/L蛋白至培养液中,高表达菌株能产生约4305U/mL的β-甘露聚糖酶酶活。Co2+和Mn2+能显著增强甘露聚糖的水解活性。产生的β-甘露聚糖酶能高效水解甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳甘露聚糖。

【技术实现步骤摘要】

本技术属于生物
,提供了,以及β -甘露聚糖酶水解甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳甘露聚糖的应用。
技术介绍
植物细胞壁包含2种主要的多糖纤维素和半纤维素。由β -1,4-D-糖苷键连接的半纤维素主要由甘露聚糖组成。甘露聚糖大部分存在于初级植物细胞壁中,在次级细胞壁中含量较少。全世界每年产生大量含有甘露聚糖的农业废弃物。在东南亚,每年产生数百万吨含有甘露聚糖的棕榈仁饼。在南美洲,咖啡产业和椰子油产业产生数百万吨的咖啡废物和椰子饼。棕榈仁饼、椰子饼由于富含甘露聚糖等抗营养因子,只能作为低级的反刍动物饲料。β -甘露聚糖酶是一类能够水解含β-1,4-甘露糖甘键的甘露寡糖和甘露多糖 (包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖等)的内切水解酶。甘露聚糖酶处理过的棕榈仁饼和椰子饼已经显示出良好的饲料价值,可以在畜禽饲料中使用。另外,甘露聚糖酶在造纸业和去污剂行业已经有良好的作用。当用包含甘露聚糖的生物材料生产生物燃料成为现实以后,甘露聚糖酶会越来越重要。毕赤酵母是一种甲基营养性酵母,能在普通培养基中产生较高细胞密度。它优良的表达系统可以产生大量的酶和蛋白质,比如,葡聚糖酶、木聚糖酶、鞣酸酶、植本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产β?甘露聚糖酶的方法,包括以下步骤:(1)一种合成的β?甘露聚糖酶基因与DNA载体中的启动子结合,产生一个表达框,(2)将DNA载体接种到一个酵母细胞中,(3)小规模培养条件下,通过测定β?甘露聚糖酶活性筛选出高表达菌株,(4)在500L的生物反应器中,筛选高表达β?甘露聚糖酶的菌株

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:项文胜王俊峰李尚坤
申请(专利权)人:江苏奕农生物工程有限公司
类型:发明
国别省市:

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