重组微生物和使用该重组微生物的脂肪族聚酯的制造方法技术

在使用重组微生物的脂肪族聚酯的制造中，提高脂肪族聚酯生产率。培养以下重组微生物，所述重组微生物是对宿主微生物导入编码具有将乳酸转换为乳酰辅酶A的活性的蛋白质的基因、和编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因而成的；由培养基回收脂肪族聚酯。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及通过将规定的基因导入宿主微生物而被赋予了期望的功能的重组微生物及使用该重组微生物的脂肪族聚酯的制造方法。
技术介绍
脂肪族聚酯作为在自然界中容易分解的生物可降解性塑料，以及作为可由糖、植物油等可再生的碳资源合成的“绿色”塑料受到关注。现在，作为脂肪族聚酷，实际利用聚乳酸等具有乳酸骨架的物质。作为利用重组微生物来制造聚乳酸等脂肪族聚酯的技木，已知例如专利文献I (W0 2006/126796)所公开的技木。专利文献I中公开了ー种重组大肠杆菌，其是在成为宿主的大肠杆菌中，导入编码将乳酸转换为乳酰辅酶A的酶的基因和编码以乳酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的酶的基因而成的。在专利文献I所公开的技术中，作为编码将乳酸转换为乳酰辅酶A的酶的基因，使用源自丙酸梭菌(Clostridium propionicum)的pet基因。另外，在相同技术中，作为编码以乳酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的酶的基因，使用源自假单胞菌(Pseudomonas sp.)61-3株的phaC2基因。但是，在专利文献I中，不能说聚乳酸等脂肪族聚酯的生产率充分，另外用于提高该生产率的各种研究尚不充分。例如，在专利文献2(W02008/062999)中公开以下的尝试，通过在源自假单胞菌(Pseudomonassp. )6-19株的phaCl基因中导入特定的变异,提高以乳酰辅酶A作为底物的乳酸均聚物或聚乳酸共聚物的合成能力。如上述那样的利用重组微生物来制造聚乳酸等脂肪族聚酯的技木，是在该微生物内蓄积脂肪族聚酯，将微生物破碎并回收作为目标的脂肪族聚酯的技木。现有技术文献专利文献专利文献I :W0 2006/126796专利文献2 W0 2008/062999
技术实现思路
专利技术要解决的课题但是，以往利用重组微生物来制造聚乳酸等脂肪族聚酯的技木，由于在微生物的内部蓄积脂肪族聚酯，因而存在生产率低这样的问题，另外，存在需要用于破碎微生物并回收脂肪族聚酯的复杂エ序这样的问题。因此，本专利技术的目的在于，提供脂肪族聚酯的生产率优异的重组微生物的同时，提供利用该重组微生物的脂肪族聚酯的制造方法。用于解决课题的方法为了达成上述目的，本专利技术者们进行了深入研究，结果发现，导入了丙酰辅酶A转移酶基因和源自规定的微生物的聚羟基烷酸合酶基因的重组微生物在菌体外生产聚乳酸等脂肪族聚酯，从而完成了本专利技术。SP，本专利技术包含以下(I) (11)。(I) ー种脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，培养以下重组微生物，所述重组微生物是对宿主微生物导入编码具有将乳酸转换为乳酰辅酶A的活性的蛋白质的基因、和编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因而成的，由培养基回收脂肪族聚酷。(2)根据(I)所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述脂肪族聚酯是以2 5聚物为主的低聚物。(3)根据(I)所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述脂肪族聚酯是具有乳酸骨架的脂肪族聚酷。(4)根据(I)所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述脂肪族聚酯为聚乳 酸。(5)根据⑴所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述培养基为基主培养基。(6)根据(I)所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，将所述重组微生物培养48小时以上，然后回收所述脂肪族聚酷。(7)根据(I)所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因，是选自源自泊库岛食烷菌(Alcanivorax borkumensis)的基因、源自海王生丝单胞菌(Hyphomonas neptunium)的基因、源自类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)的基因、源自菜 根瘤菌(Rhizobiumetli)的基因、源自假单胞菌(Pseudomonas sp.)的基因以及源自死海盐盒菌(Haloarculamarismortui)的基因的至少一种以上的基因。(8)根据⑴所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因，是以下的(a) (C)所示的基因(a)编码包含序列号6、8、10、12、14、16或18所示的氨基酸序列的蛋白质的基因，(b)编码包含在序列号6、8、10、12、14、16或18所示的氨基酸序列中置換、缺失或添加了 I或多个氨基酸的氨基酸序列、并且具有上述活性的蛋白质的基因，(c)对具有序列号5、7、9、11、13、15或17所示的碱基序列的互补碱基序列的多核苷酸在严格的条件下杂交、并且编码具有上述活性的蛋白质的基因。(9) 一种重组微生物，其是对宿主微生物导入编码具有将乳酸转换为乳酰辅酶A的活性的蛋白质的基因、和编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因而成的，所述编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因，是选自源自泊库岛食烧菌(Alcanivorax borkumensis)的基因、源自海王生丝单胞菌(Hyphomonas neptunium)的基因、源自类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)的基因、源自菜豆根瘤菌(Rhizobium etli)的基因、源自假单胞菌(Pseudomonas sp.)的基因及源自死海盐盒菌(Haloarcula marismortui)的基因的至少ー种以上的基因。(10)根据(9)所述的重组微生物，其特征在于，所述编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因，是以下的(a) (C)所示的基因(a)编码包含序列号6、8、10、12、14、16或18所示的氨基酸序列的蛋白质的基因，(b)编码包含在序列号6、8、10、12、14、16或18所示的氨基酸序列中置換、缺失或添加了 I或多个氨基酸的氨基酸序列、并且具有上述活性的蛋白质的基因，(c)对具有序列号5、7、9、11、13、15或17所示的碱基序列的互补碱基序列的多核苷酸在严格的条件下杂交、并且编码具有上述活性的蛋白质的基因。(11)根据(9)所述的重组微生物，其特征在于，所述宿主微生物是大肠杆菌。本说明书包含作为本申请的优先权基础的日本专利申请2010-069688号的说明书和/或附图记载的内容。专利技术的效果根据本专利技术，可以提供能够在外部生产脂肪族聚酯的重组微生物。即，本专利技术的重组微生物，与现有的重组微生物比较，脂肪族聚酯的生产率优异。另外，通过利用本专利技术的重组微生物，可提供生产率优异的脂肪族聚酯的制造方法。 附图说明图I是显示通过GC-MS測定各重组大肠杆菌的乳酸聚合物的生产量的结果的特性图。图2是显示对于导入了源自海王生丝单胞菌(Hyphomonas neptunium)的的PHA合酶基因(编号8)、源自类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)的PHA合酶基因(编号I)、源自菜豆根瘤菌(Rhizobium etli)的PHA合酶基因(编号3)、源自假单胞菌(Pseudomonassp.)的PHA合酶基因(编号7)及源自死海盐盒菌(Haloarcula marismortui)的PHA合酶基因(编号10)的任一基因的重组大肠杆菌，測定培养基中的乳酸2聚物的结果的特性图。图3是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.03.25 JP 069688/20101.一种脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，培养以下重组微生物，所述重组微生物是对宿主微生物导入编码具有将乳酸转换为乳酰辅酶A的活性的蛋白质的基因、和编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因而成的， 由培养基回收脂肪族聚酯。2.根据权利要求I所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述脂肪族聚酯是以2 5聚物为主的低聚物。3.根据权利要求I所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述脂肪族聚酯是具有乳酸骨架的脂肪族聚酯。4.根据权利要求I所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述脂肪族聚酯为聚乳酸。5.根据权利要求I所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述培养基为基本培养基。6.根据权利要求I所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，将所述重组微生物培养48小时以上，然后回收所述脂肪族聚酯。7.根据权利要求I所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因，是选自源自泊库岛食烷菌的基因、源自海王生丝单胞菌的基因、源自类球红细菌的基因、源自菜豆根瘤菌的基因、源自假单胞菌的基因以及源自死海盐盒菌的基因的至少一种以上的基因。8.根据权利要求I所述的脂肪族聚酯的制造方法，其特征在于，所述编码具有以羟酰辅酶A作为底物来合成聚羟基烷酸的活性的蛋白质的基因，是以下的(a) (C)所示的基因 (a)编码包含序列号6、8、10、12、14、16或18所示的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：村松正善，神户浩美，伊藤正和，岛村隆，幸田胜典，
申请(专利权)人：丰田自动车株式会社，
类型：
国别省市：