本发明专利技术属于医学中的免疫学领域，特别涉及心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽及其单克隆抗体的应用，所述表位肽段如SEQIDNO.5所示，其可用于制备杂交瘤细胞株并分泌相应的单克隆抗体；该单克隆抗体可用于制备检测心脏型脂肪酸结合蛋白的诊断试剂；本单克隆抗体纯度高大于96%，纯化的抗体用间接ELISA法检测效价达1：256000，且特异性好、可大批量制备等优点；通过本发明专利技术制备的单克隆抗体、多克隆抗体可用于病人血液心脏型脂肪酸结合蛋白的检测，为急性心肌梗死的早期诊断奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学检测领域，特别涉及心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽，还涉及由该表位肽的制备的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
心血管疾病是严重威胁人类生命和健康的重要疾病，已成为21世纪人类健康的头号杀手。全球每年有1750万人死于心脏病和其他心血管疾病，约占全球死亡人数的1/3，预计到2020年这个数字将突破2500万，届时心血管疾病将成为人类死亡和致残的首要原因。急性心肌梗死(Acute myocardial infarction, AMI)是心血管疾病的主要类型,发病突然，急性期死亡率约为30%。在我国，急性心肌梗死的发病率呈明显上升趋势，正成为我国心血管领域的重要公共卫生问题。因此，AMI的早期诊断和治疗监测非常重要。寻找AMI的高特异性、高灵敏度的早期诊断标志物是临床亟待解决的热点问题。对AMI早期正确诊断，以便进行及时有效的治疗，是改善预后、降低AMI急性期病死率提高患者生存率的关键。临床上虽然可以通过患者的临床表现、心电图对典型AMI病例进行有效诊断及预后判断，但是对一些非典型病例仍然需要通过心肌损伤标志物的检测进行早期诊断。目前，用于诊断AMI的指标主要有肌酸激酶同工酶MB (creatine kinase isoenzymeMB, CK-MB)、心肌肌I丐蛋白 T ( cardiac troponin T, cTnT)、心肌肌I丐蛋白 I ( cardiactroponin I, cTn I)和肌红蛋白(Myoglobin,Mb)等,但它们对于早期诊断AMI均不够理想，主要原因是CK-MB、肌钙蛋白I、肌钙蛋白T缺乏足够的敏感性(胸痛后41小时后浓度才上升)。而肌红蛋白早期敏感性虽高(胸痛后2 3小时浓度上升)，但特异性较差，不能区分骨骼肌损伤和心肌损伤，也不是一个理想的早期诊断指标。心脏型脂肪酸结合蛋白(hearttype fatty acid-binding protein, H-FABP)是存在于心肌细胞胞质内的小分子可溶性蛋白质，分子质量约为15KD，其作用是与细胞内长链脂肪酸结合，促进细胞内长链脂肪酸转运，将其转运至线粒体，进入线粒体后参加P氧化，并最终生成ATP，后者是心肌收缩的主要能量来源。经研究发现H-FABP对于AMI的早期诊断更具有特异性和敏感性，有望成为理想的早期诊断AMI的生化指标。新近发现，H-FABP可弥补CK -MB、cTnl和Mb检测的不足，对于AMI的早期诊断更具有特异性和敏感性，有望成为理想的AMI的早期诊断生化指标。主要是由于H-FABP具备以下特点①心肌特异性高大量地存在于心肌组织中，在心肌中比骨骼肌高10倍，在肾脏、肝脏、小肠中水平很低；②敏感性高由于H-FABP的相对分子质量小，当心肌细胞缺血时，H-FABP可快速从心肌细胞释放，并迅速进入到血液中，在心肌损伤发生20分钟内可被检测到，3 4小时内可检测到其峰值，20-24小时后回到正常值。而且，H-FABP在AMI发生3小时内的敏感度显著高于肌红蛋白(72. 3 % Vs 57. 4 %)。上述特点表明，H-FABP对早期诊断和排除AM I是一个有用的生化标志物，是早期检测心肌损伤的理想指标。目前，对于H-FABP的B细胞表位肽未见相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽，与载体蛋白交联后能够刺激免疫体统产生免疫反应，制备成杂交瘤细胞株后能产生单克隆抗体。为实现上述专利技术目的，技术方案为 心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽，所述心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO. 5所示。本专利技术的目的之二在于提供心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物，技术方案为 含有权利要求I所述心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物，所述心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物为N端引入半胱氨酸的心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽与载体蛋白的交联体。优选的，所述载体蛋白为血蓝蛋白、牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白。本专利技术的目的之三在于提供由心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物制备的杂交瘤细胞株，技术方案为 所述心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物制备的杂交瘤细胞株。优选的，所述杂交瘤细胞株的生物保藏号为CCTCC N0:C201269。本专利技术的目的之四在于提供杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体，技术方案为 所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。本专利技术的目的之五在于提供单克隆抗体的应用，技术方案为 所述的单克隆抗体在制备检测心脏型脂肪酸结合蛋白的诊断试剂中的应用。本专利技术的有益效果在于心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽，该表位肽的抗原性好，能够刺激免疫系统产生免疫反应，免疫后血清效价达到1:3200，因此该表位肽可用于制备杂交瘤细胞株并分泌相应的单克隆抗体，单克隆抗体的纯度大于96%，纯化后的抗体用间接ELISA法检测效价达I :256000用间接ELISA法检测效价达I :256000，且特异性好，可大批量制备，通过本专利技术制备的单克隆抗体和多克隆抗体可用于病人血液心脏型脂肪结合蛋白的检测，能够用于急性心肌梗死的早期诊断，为临床治疗急性心肌梗死提供指导。培养物保藏 本专利技术中杂交瘤细胞株3-Fabp送中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCCNO: C201269，地址位于中国武汉武汉大学，保存日期为2012年6月6日，保藏的培养物名称为杂交瘤细胞株3-Fabp。附图说明图I为纯化后的H-FABP重组蛋白SDS-PAGE电泳分析图。图2为H-FABP单克隆抗体的纯化色谱图。具体实施例方式下面结合实施例进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术，而非、限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法及未说明配方的试剂均为按照常规条件如分子克隆实验手册(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)和现代免疫学实验技术(沈关心周汝麟主编)中所述的条件或制造商建议的条件进行或配置，未注明来源的产品均可通过市场途径获得。实施例I、H-FABP重组蛋白的制备 通过逆转录PCR扩增H-FABP基因编码区核苷酸序列，克隆入原核表达载体pET28a，经测序鉴定后诱导蛋白表达，经性质鉴定后，纯化制备的H-FABP重组蛋白，该重组蛋白可用于制备多克隆抗体的免疫原及筛选原，同时可以作为后续建立H-FABP检测时的校准品，具体的 根据报道的可参考心脏型脂肪酸结合蛋白(heart type fatty acid-bindingprotein, H-FABP)的基因序列(Genbank :NM_004102)，其编码区的核苷酸序列如SEQ IDNO. I所示。翻译为氨基酸后相应的多肽序列如SEQ ID NO. 2所示，编码133个氨基酸，具体为MVDAFLGTffK LVDSKNFDDY MKSLGVGFAT RQVASMTKPT TIIEKNGDIL TLKTHSTFKNTEISFKLGVE FDETTADDRK VKSIVTLDGG KLVHLQKffDG QETTLVRELI DGKLILTLTHGTAVCTRTYE KEA上述氨基酸的中英文对照如下 谷酰胺gin Q;甘氨酸gly G本文档来自技高网...
【技术保护点】
心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽，其特征在于：所述心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的氨基酸序列如SEQ？ID？NO.5所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄洪涛，石延宾，姚静，张宪，胡伟，魏勇，
申请(专利权)人：重庆业为基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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