本发明专利技术公开了一种从钩吻提取物中制备1-甲氧基钩吻碱的方法，包括步骤：(1)乙酸乙酯萃取；(2)硅胶色谱纯化；(3)Sephadex?LH-20色谱纯化。本发明专利技术是一种制备1-甲氧基钩吻碱的简化工艺，能极大地提高1-甲氧基钩吻碱的得率，可用于1-甲氧基钩吻碱的工业制备。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种I-甲氧基钩吻碱(gelsevirine)的制备方法,特别是涉及一种从钩吻提取物中分离制备I-甲氧基钩吻碱的方法。
技术介绍
钩吻(Gelsemium elegans Benth.)为马钱科胡蔓藤属植物,分中国钩吻和北美钩吻两种。我国盛产于福建、浙江、广西、广东、湖南等地，又名断肠草。其药用部位为全草。具有祛风攻毒，消肿止痛的功效。钩吻碱类化合物是存在于钩吻中的一类化合物，被证明在肿瘤、镇痛等方面有较好的活性。临床上用于抑制肿瘤细胞生长、治疗神经痛、局部用于扩瞳等作用，可以被认为是钩吻药效的物质基础之一。 I-甲氧基钩吻碱(gelsevirine式I)是自钩吻中分离得到的一种钩吻碱类化合物，其含量较高，具有一定的开发新药的潜力。其药理作用主要包括其能抑制肿瘤细胞生长，镇痛、镇静等作用。目前，未见到I-甲氧基钩吻碱的制备工艺的相关报道，因此，I-甲氧基钩吻碱分离手段的不足是限制其医药用途的一个主要原因。式I
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种从钩吻提取物中制备I-甲氧基钩吻碱的方法，以解决现有技术中制备手段繁琐，产率极低的技术问题。为解决上述技术问题，本专利技术的从钩吻提取物中制备I-甲氧基钩吻碱的方法，包括步骤(I)乙酸乙酯萃取步骤将钩吻提取物的水溶液用体积比为0. 5 : I 2 : I的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A ；(2)硅胶色谱纯化步骤将步骤(I)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以体积比为50 I 25 I的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有I-甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，得浸膏B。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿洗脱5BV后，用氯仿-甲醇100 I洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有I-甲氧基钩吻碱的流份，回收溶剂，即得浸膏C。(3) Sephadex LH-20 色谱纯化步骤将步骤(2)所得的浸膏C Sephadex LH-20柱色谱分离，甲醇洗脱，洗脱液作TLC检识，合并含有I-甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，即得纯化的I-甲氧基钩吻碱。其中，所述娃胶色谱纯化步骤与Sephadex LH-20色谱纯化步骤的顺序能够颠倒。所述步骤⑴中钩吻提取物中所用的提取溶剂为体积浓度为70% 95%的乙醇溶液。采用本专利技术的方法依次经⑴乙酸乙酯萃取，⑵硅胶色谱纯化，(3)SephadexLH-20色谱纯化，能极大地提高得率，因此，该方法是一种制备1_甲氧基钩吻碱的 简化工艺，可用于I-甲氧基钩吻碱的工业制备。附图说明图I为I-甲氧基钩吻碱的1H-NMR图。图2为I-甲氧基钩吻碱的13C-NMR图。图3为I-甲氧基钩吻碱的DEPT图。具体实施例方式下面将结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例I I-甲氧基钩吻碱的制备钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为70%乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约1L。将提取液用2L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约40g。将浸膏A用硅胶柱色谱分离(硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为I : 30，硅胶柱规格0100*1000mm)，并以氯仿洗脱5BV后，换用体积比为50 I的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以体积比为20 I的氯仿-甲醇溶液展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有I-甲氧基钩吻碱的部分，减压回收溶剂，得浸膏B约12g。将浸膏B再用薄层硅胶柱色谱分离(浸膏样品与硅胶重量比为I : 100，硅胶柱规格0100*1000mm)，并以体积比为100 I的氯仿-甲醇溶液洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以体积比为50 I的氯仿-甲醇溶液展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有1_甲氧基钩吻碱的部分，减压回收溶剂，即得浸膏C约lg。将浸膏C Sephadex LH-20柱色谱分离(浸膏样品与S印hadex LH-20重量比为I 100，硅胶柱规格O 20*1500mm)，甲醇洗脱，洗脱液作TLC检识，合并含有I-甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，即得纯化的I-甲氧基钩吻碱0. 3g。最终所得I-甲氧基钩吻碱经常规公知的NMR方法鉴定J. Nat. Prod. ,49(3)483-487,并经高效液相检测[Sapphire-C18柱(4. 6mm*250mm),检测波长254nm,流动相为体积比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL min—1，进样量10 U 1，柱温25°C，理论塔板数以I-甲氧基钩吻碱计不低于5000含量在97%以上，其得率为0. 03%实施例2 I-甲氧基钩吻碱的制备钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为95%乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约2L。将提取液用IL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约35g。将浸膏A用硅胶柱色谱分离(硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为I : 50，硅胶柱规格0100*1000mm)，以体积比为25 I的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以体积比为10 I的氯仿-甲醇溶液展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有I-甲氧基钩吻碱的部分，减压回收溶剂，得浸膏B约Sg。将浸膏B再用薄层硅胶柱色谱分离(浸膏样品与硅胶重量比为I : 50，硅胶柱规格0100*1000mm)，并以体积比为50 I的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以体积比为20 I的氯仿-甲醇溶液展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有I-甲氧基钩吻碱的部分，减压回收溶剂，即得浸膏C约2. 5g。将浸膏C Sephadex LH-20柱色谱分离(浸膏样品与S印hadex LH-20重量比为I 125，硅胶柱规格O 20*1500mm)，甲醇洗脱，洗脱液作TLC检识，合并含有I-甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，即得纯化的I-甲氧基钩吻碱0. 35g。最终所得I-甲氧基钩吻碱经常规公知的NMR方法鉴定J. Nat. Prod. ,49(3)483-487,并经高效液相检测[Sapphire-C18柱(4. 6mm*250mm),检测波长254nm,流动相为体积比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL min—1，进样量10 U 1，柱温25°C，理论塔板数以I-甲氧基钩吻碱计不低于5000含量在98%以上，其得率为0. 035%实施例3 I-甲氧基钩吻碱的制备钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为80%乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约1L。将提取液用0. 5L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约35g。将浸膏A用S印hadex LH-20柱色谱分离(浸膏样品与S印hadex LH-20重量比为I 150，硅胶柱规格O 20*1500mm)，甲醇溶液洗脱，洗脱液作TLC检识，合并含有I-甲氧基钩吻碱的流份，减压回收本文档来自技高网...
【技术保护点】
从钩吻提取物中制备1？甲氧基钩吻碱的方法，其特征在于：包括步骤：(1)乙酸乙酯萃取步骤将钩吻提取物的水溶液用体积比为0.5∶1～2∶1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A；(2)硅胶色谱纯化步骤将步骤(1)所得浸膏A用100？200目或200？300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以体积比为50∶1～25∶1的氯仿？甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有1？甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，得浸膏B。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿洗脱5BV后，用氯仿？甲醇100∶1洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有1？甲氧基钩吻碱的流份，回收溶剂，即得浸膏C。(3)Sephadex？LH？20色谱纯化步骤将步骤(2)所得的浸膏C？Sephadex？LH？20柱色谱分离，甲醇洗脱，洗脱液作TLC检识，合并含有1？甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，即得纯化的1？甲氧基钩吻碱。其中，所述硅胶色谱纯化步骤与Sephadex？LH？20色谱纯化步骤的顺序能够颠倒。
【技术特征摘要】
1.从钩吻提取物中制备I-甲氧基钩吻碱的方法，其特征在于包括步骤 (1)乙酸乙酯萃取步骤 将钩吻提取物的水溶液用体积比为0.5 : I 2 : I的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A ； (2)硅胶色谱纯化步骤 将步骤(I)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以体积比为50 : I 25 : I的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有I-甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，得浸膏B。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿洗脱5BV后，用氯仿-甲醇100 I洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有I-甲氧基钩吻碱的流份，回收溶剂，即得浸膏C。 (3)Sephadex LH-20色谱纯化步骤 将步骤(2)所得的浸膏C Sephadex LH-20柱色谱分离，甲醇洗脱，洗脱液作TLC检识，合并含有I-甲氧基钩吻碱的流份，减压回收溶剂，即得纯化的I-甲氧基钩吻碱。其中，所述娃...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁爽，冯怡，阮克锋，
申请(专利权)人：上海张江中药现代制剂技术工程研究中心，
类型：发明
国别省市：
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