本发明专利技术公开了一种从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，包括步骤：(1)乙酸乙酯萃取；(2)硅胶色谱纯化。本发明专利技术是一种制备钩吻碱子的简化工艺，能极大地提高钩吻碱子的得率，可用于钩吻碱子的工业制备。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种钩吻碱子(koumine)的制备方法,特别是涉及一种从钩吻提取物中分离制备钩吻碱子的方法。
技术介绍
钩吻(Gelsemium elegans Benth.)为马钱科胡蔓藤属植物,分中国钩吻和北美钩吻两种。我国盛产于福建、浙江、广西、广东、湖南等地，又名断肠草。其药用部位为全草。具有祛风攻毒，消肿止痛的功效。钩吻碱类化合物是存在于钩吻中的一类化合物，被证明在肿瘤、镇痛等方面有较好的活性。临床上用于抑制肿瘤细胞生长、治疗神经痛、局部用于扩瞳等作用，可以被认为是钩吻药效的物质基础之一。钩吻碱子(koumine，式I)是自钩吻中分离得到的一种钩吻碱类化合物其含量较高，具有一定的开发新药的潜力。其药理作用主要包括其能减轻慢性疼痛炎性疼痛和癌性疼痛。(专利号:200810071467. X，公开日200812月17日)目前技术公开钩吻碱子的制备方法(专利号200810071469. 9，公开日2008年12月17日)是将钩吻总碱用流动相溶解后，采用高速逆流色谱仪进行制备，该制备方法操作繁琐，设备费用昂贵，制备量少，不利于工业化生产。因此，钩吻碱子分离手段的不足是限制其医药用途的一个主要原因。 a#式I
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，以解决现有技术中制备手段繁琐，产率极低的技术问题。为解决上述技术问题，本专利技术的从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，包括步骤(I)乙酸乙酯萃取步骤将钩吻提取物的水溶液用体积比为0. 5 : I 2 : I的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A。(2)硅胶色谱纯化步骤将步骤(I)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇体积比为50 I 25 I进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，减压回收溶剂，得浸膏B。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇100 : I 50 : I梯度洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子。所述步骤⑴中钩吻提取物中所用的提取溶剂为体积浓度为70% 95%的乙醇溶液。采用本专利技术的方法依次经(I)乙酸乙酯萃取、(2)硅胶色谱纯化，能极大地提高得率，因此，该方法是一种制备钩吻碱子的简化工艺，可用于钩吻碱子的工业制备。附图说明图I钩吻碱子的1H-NMR谱。图2钩吻碱子的13C-NMR谱。 图3钩吻碱子的DEPT谱。具体实施例方式下面将结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例I钩吻碱子的制备钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为70%乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约1L。将提取液用2L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约40g。将浸膏A用硅胶柱色谱分离(硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为I : 30，硅胶柱规格0100*1000mm)，并以氯仿甲醇体积比为50 I进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿甲醇体积比为10 I展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，得浸膏B约10g。将浸膏B再用薄层娃胶柱色谱分离(浸骨样品与娃胶重量比为I : 100,娃胶柱规格C>60*600mm),并以氯仿-甲醇100 I进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿甲醇体积比为10 I展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子2. 5g。最终所得钩吻碱子经常规公知的NMR方法鉴定J. Nat. Prod. ,1989, 52 (5)1180-1182.,并经高效液相检测[Kromasil-C18柱(4. 6mm*25Omm),检测波长254nm,流动相为体积比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL mirT1，进样量10 U 1，柱温25°C，理论塔板数以钩吻碱子计不低于5000含量在96%以上，其得率为0. 25%。实施例2钩吻碱子的制备钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为95%乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约2L。将提取液用IL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约40g。将浸膏A用硅胶柱色谱分离(硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为I : 50，硅胶柱规格0100*1000mm)，并以氯仿甲醇体积比为25 I进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿甲醇体积比为10 I展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，得浸膏B约8g。将浸膏B再用薄层娃胶柱色谱分离(浸骨样品与娃胶重量比为I : 50,娃胶柱规格C>60*600mm),并以氯仿-甲醇50 I进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿甲醇体积比为10 I展开后 置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子2. lg。最终所得钩吻碱子经常规公知的NMR方法鉴定J. Nat. Prod. ,1989, 52 (5)1180-1182.,并经高效液相检测[Kromasil-C18柱(4. 6mm*25Omm),检测波长278nm,流动相为体积比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL mirT1，进样量10 U 1，柱温25°C，理论塔板数以钩吻碱子计不低于5000含量在96%以上，其得率为0. 21%。实施例3钩吻碱子的制备钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，体积浓度为80%乙醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约1L。将提取液用0. 5L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂得浸膏A约35g。将浸膏A用硅胶柱色谱分离(硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为I : 30，硅胶柱规格0100*1000mm)，并以氯仿甲醇体积比为40 I进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿甲醇体积比为10 I展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，得浸膏B约7g。将浸膏B再用薄层娃胶柱色谱分离(浸骨样品与娃胶重量比为I : 70,娃胶柱规格C>60*600mm),并以氯仿-甲醇75 I进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样，以氯仿甲醇体积比为10 I展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有钩吻碱子的部分，减压回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子2. 8g。最终所得钩吻碱子经常规公知的NMR方法鉴定J. Nat. Prod. ,1989, 52 (5)1180-1182.,并经高效液相检测[Kromasil-C18柱(4. 6mm*25Omm),检测波长278nm,流动相为体积比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL mirT1，进样量10 U 1，柱温25°C，理论塔板数以钩吻碱子计不低于5000含量在96%以上，其得率为0. 28%。以上实验结果表明，本方法用本文档来自技高网...
【技术保护点】
从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，其特征在于：包括步骤：(1)乙酸乙酯萃取步骤将钩吻提取物的水溶液用体积比为0.5∶1～2∶1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A。(2)硅胶色谱纯化步骤将步骤(1)所得浸膏A用100？200目或200？300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿？甲醇体积比为50∶1～25∶1进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，减压回收溶剂，得浸膏B。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿？甲醇100∶1～50∶1梯度洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，回收溶剂，即得纯化的钩吻碱子。
【技术特征摘要】
1.从钩吻提取物中制备钩吻碱子的方法，其特征在于包括步骤 (1)乙酸乙酯萃取步骤 将钩吻提取物的水溶液用体积比为0.5 : I 2 : I的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A。(2)硅胶色谱纯化步骤 将步骤(I)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇体积比为50 I 25 I进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，减压回收溶剂，得浸膏B。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇100 : I 50 : I梯度洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有钩吻碱子的流份，回收溶 齐U，即得纯...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁爽，冯怡，阮克锋，
申请(专利权)人：上海张江中药现代制剂技术工程研究中心，
类型：发明
国别省市：
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