本发明专利技术公开了一种固相萃取柱，包括玻璃柱和填料，所述填料为羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex?LH-20。所述的固相萃取柱可应用于生物样品的前处理，尤其可应用于血清、尿液及组织匀浆中的分子量相近的中、小分子的同时富集及分析检测。本发明专利技术的固相萃取柱可以有效排除干扰，保证待测物分析的高灵敏度、强专属性、高准确度，对于生物体代谢组学研究以及疾病的检测具有良好的指导意义。另外，本发明专利技术的固相萃取柱可反复使用，几乎不存在死吸附的现象，而且装填容易，操作简单，在生物样品分析中具有较强的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种固相萃取柱及其应用，具体说，是涉及一种凝胶固相萃取柱及其在生物样品前处理中的应用。
技术介绍
由于生物样品的成分复杂，基质干扰严重，因此对生物样品中的内源性物质分析检测，一直被分析工作者所关注。一般所采取的生物样品前处理方法包括有机溶剂沉淀法(OSP)、液液萃取(LLE)、固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)等。其中固相萃取以其操作简单、回收率高、重复性好、较绿色环保等特点而被广泛应用。固相萃取根据吸附剂的不同可分为反相固相萃取、正相固相萃取、尚子交换固相萃取和吸附固相萃取四种，需要根据所要检测的化合物的性质来选择不同吸附剂的固相萃取柱。固相萃取法，是主要通过固相填料对样品组分的选择性吸附及解吸过程，实现对样品 的分离、纯化和富集，其主要目的在于降低样品基质干扰，提高检测灵敏度。为了方便，固相萃取一般使用固相萃取小柱，根据不同的需求有各种规格，常见的有lml、6ml和10ml。但在具体使用中，这种方法存在如下问题I)预装固相萃取柱不可反复使用，使用进口固相萃取柱的成本很闻；2)要根据目标化合物的极性及溶解度选择合适的固相萃取柱和洗脱溶剂，具体洗脱过程需要进行大量前期文献考察和实验摸索；3)若目标化合物与吸附剂形成共价键，则在洗脱时可能会因与吸附剂死吸附而无法洗脱下来；4)使用时萃取流速低，影响样品处理效率，需要外界给予一定的压力；5)无法同时富集分子量大小相似的化合物。在固相萃取法中最常用的填料是颗粒型硅胶或键合相的硅胶。传统的颗粒型填料为了能实现较高的吸附效率，减少样品的损失，其填料的颗粒较小，而小的颗粒粒度却会引起高的柱压，吸附时间长，因此不能用于快速高效分离和富集。
技术实现思路
本专利技术针对上述现有技术所存在的缺陷和问题，提供一种具有操作简单、成本低、灵敏度高、能快速高效分离和富集分子量相近的中、小分子化合物等优点的固相萃取柱及其在生物样品前处理中的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下一种固相萃取柱，包括玻璃柱和填料，其特征在于所述填料为羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20。所述玻璃柱的长径比推荐为I : I 30 1，较佳为10 I 20 1，最佳为15 I0本专利技术提供的固相萃取柱在生物样品前处理中的应用，主要是起分离和富集分子量相近的中、小分子化合物的作用。所述的生物样品包括但不仅限于体液和组织匀浆，所述的体液主要是指血清和尿液。所述的分子量相近的中、小分子化合物主要是指血管紧张素类寡肽化合物、磷脂类化合物、胆汁酸类化合物和氨基酸类化合物。所述的固相萃取柱在生物样品前处理中的应用，包括如下步骤a)制作固相萃取柱；b)将生物样品溶液注入柱中，待样品溶液全部渗入固定相后，注入卒取液，根据目标分析物选取所要收集的萃取液的体积；c)浓缩干收集的萃取液中的溶剂； d)复溶目标物，进行高效液相色谱或高效液相色谱-质谱分离检测。Sephadex LH-20凝胶的主要分离原理是分子筛，在反相溶剂中兼具反相分配的作用。由于Sephadex LH-20凝胶的分子筛作用，所以分子大的化合物保留弱，先被洗脱下来，分子小的化合物保留强，后被洗脱下来。本专利技术利用Sephadex LH-20凝胶的这一特性和固相萃取柱的优点，一方面可以分离生物样品中如蛋白质等大分子化合物，排除其干扰，另一方面可富集分子量相近的中、小分子化合物。因此，与现有技术相比，本专利技术的固相萃取柱可应用于血清、尿液及组织匀浆中的中、小分子的同时富集及分析检测，可以有效排除干扰，保证待测物分析的高灵敏度、强专属性、高准确度，对于生物体代谢组学研究以及疾病的检测具有良好的指导意义。另外，本专利技术的固相萃取柱可反复使用，几乎不存在死吸附的现象，而且装填容易，操作简单，在生物样品分析中具有较强的应用价值。附图说明图I是血清经本专利技术的固相萃取柱处理得到的血管紧张素类寡肽化合物的分析图谱。图2是血清经本专利技术的固相萃取柱处理得到的磷脂类化合物的分析图谱。图3是肝脏匀浆经本专利技术的固相萃取柱处理得到的胆汁酸类化合物的分析图谱。图4是尿液经本专利技术的固相萃取柱处理得到的氨基酸类化合物的分析图谱。具体实施方法下面结合实施例对本专利技术做进一步详细、完整地说明，但并不限制本专利技术的内容。实施例I :利用本专利技术的固相萃取柱处理血清中的血管紧张素类寡肽取一个自制空心玻璃柱,长15厘米，内径I. O厘米,填装Sephadex LH-20凝胶,用甲醇不断洗脱，填实，作为固定相。取血清1ml，加4ml甲醇，立即涡旋混匀，在4°C离心15分钟；取上清液4. 5ml，氮气吹干后用O. 5ml甲醇溶液复溶，再次在4°C离心15分钟；再取上清液缓慢上样至凝胶固相萃取柱，用甲醇不断洗脱，收集第3 9ml的洗脱流份。浓缩干甲醇后，用含20mmol/L甲酸铵及O. 1% (V V)甲酸的水溶液与乙腈按体积比为88 12混合的溶液150 μ L复溶，在4°C高速离心(20000转/分钟)15分钟后取上清液，利用超高效液相色谱-质谱联用仪(UPLC-MS)进行分析，分析条件如下色谱条件Waters,Acquity UPLC BEH C18 (50 X 2. Imm)色谱柱,柱温 50°C ;流动相A为含O. 1% (V : V)甲酸的水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱；流速为O. 5ml/min ;检测模式为正离子多反应监测；质谱条件采用电喷雾离子源，正离子多反应监测模式进行数据采集，离子源温度为120°C ;去溶剂温度为400°C ;氮气为去溶剂和锥孔气，流速分别为600L/h和50L/h ;氩气为碰撞气,流速为O. 15ml/min ;毛细管电压为3. O千伏；锥孔电压为40伏；碰撞电压为5电子伏。分析结果(检测到的峰面积)见表I所示 。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种固相萃取柱，包括玻璃柱和填料，其特征在于：所述填料为羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex？LH？20。
【技术特征摘要】
1.一种固相萃取柱，包括玻璃柱和填料，其特征在于所述填料为羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20。2.根据权利要求I所述的固相萃取柱，其特征在于所述玻璃柱的长径比为I: I 30 : I。3.根据权利要求2所述的固相萃取柱，其特征在于所述玻璃柱的长径比为10 I 20 : I。4.根据权利要求3所述的固相萃取柱，其特征在于所述玻璃柱的长径比为15 I。5.权利要求I所述的固相萃取柱在生物样品前处理中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于用于分离和富集生物样品中的分子量相近的中、小分子化合物。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨莉，祁萌，王峥涛，耿放，
申请(专利权)人：上海中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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