预处理方法及阿莫西林、青霉素G和青霉素V的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种预处理方法及阿莫西林、青霉素G和青霉素V的检测方法。预处理方法包括以下步骤：①将待测样品和乙腈的混合物，离心，收集上清液；待测样品为不含固体颗粒的乳制品；②将上清液上样至已经活化的Oasis PRiME HLB固相萃取小柱，收集流出液即得。本发明专利技术的预处理方法快速、简单、经济、可靠，能够有效地提取出待测组分，去除复杂基质影响，有益于待测样品的快速检测。在保持较高提取率的同时，节约了有机溶剂的使用、排放和损失，有利于保护环境，节约了预处理步骤、时间和能耗，检测方法快速，简单，精密度高，准确性高，具有较强的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种预处理方法及阿莫西林、青霉素G和青霉素V的检测方法。
技术介绍
阿莫西林、青霉素G和青霉素V是畜牧业最常用的兽药，都属于β-内酰胺类抗生素，是青霉素类广谱抗生素。阿莫西林，又名安莫西林或安默西林，其杀菌作用强，穿透细胞膜的能力强，是目前应用较为广泛的口服青霉素之一。青霉素G又被称为盘尼西林、青霉素钠、苄青霉素钠、青霉素钾或苄青霉素钾等。青霉素G是抗菌素的一种，是从青霉菌培养液中提制的分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，对多数革兰阳性菌、革兰阴性球菌、个别革兰阴性杆菌(如嗜血杆菌属)、螺旋体和放线菌均有抗菌活性，是第一种能够治疗人类疾病的抗生素。青霉素V抗菌谱与青霉素G相同，但对产β内酰胺酶的菌株无抗菌作用，比如金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌等。青霉素V与青霉素G相比，对大多数敏感菌株的活性弱2～5倍。青霉素V的作用机制也是抑制细菌细胞壁的合成，使细菌迅速破裂而溶解。牛奶是一种大众日常的消费品，随着人们对食品安全要求日益提高，牛奶的安全质量问题也越来越为人们重视。但从我国国内养殖环境来看，在我国大部分地区，特别是广大农村地区的养殖动物和生产饲料过程中，仍存在超量或超范围使用抗生素、不严格执行药物配伍禁忌或停药期规定的情况，甚至会存在使用违禁抗生素等现象。因食物链传递，牛奶中大量残留的抗生素会对人体造成危害。另外，从乳制品加工的角度来看，原料乳中残留的抗生素会严重影响干酪、黄油和发酵乳的起酵或后期风味的形成。现有技术中，原料乳和/或液态乳制品中残留的阿莫西林、青霉素G和青霉素V含量的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)和酶联免疫方法等；其预处理多采用液液萃取和固相萃取等方法，国标方法预处理方法采用3步固相萃取法。目前现有的固相萃取预处理方法主要包括：活化、上样、淋洗和收集流出液，其中，淋洗和收集流出液所占时间占前处理所需时间的80％左右。故现有的固相萃取预处理方法存在的问题是操作步骤多、耗时长、有机溶剂使用量大以及不利于环保的缺陷。该现象亟待解决。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服了现有技术对原料乳和/或液态乳制品中残留的阿莫西林、青霉素G和青霉素V中的一种或多种的含量进行检测前，其固相萃取预处理方法操作步骤多、耗时长以及有机溶剂使用量大的缺陷，提供了一种预处理方法及阿莫西林、青霉素G和青霉素V的检测方法。本专利技术的预处理方法快速、简单、经济、可靠，能够有效地提取出待测组分，去除复杂基质影响，有益于待测样品的快速检测。而且在保持较高提取率的同时，节约了有机溶剂的使用、排放和损失，有利于保护环境，节约了预处理步骤、时间和能耗，具有较强的应用价值。本专利技术的检测方法可用于检测阿莫西林、青霉素G和青霉素V中的一种或多种，且检测方法快速，简单，精密度高，准确性高。本专利技术通过以下技术方案解决上述技术问题。本专利技术提供了一种预处理方法，其包括以下步骤：(1)将待测样品和乙腈的混合物，离心，收集上清液；所述的待测样品为不含固体颗粒的乳制品；(2)将所述上清液上样至已经活化的OasisPRiMEHLB固相萃取小柱，收集流出液，即得预处理后的待测样品。步骤(1)中，所述的待测样品较佳地为原料乳和/或液态乳制品。其中，所述的液态乳制品为本领域常规的液态乳制品，较佳地为高钙牛奶、高铁牛奶、低乳糖牛奶和低脂牛奶中的一种或多种，更佳地为高钙牛奶、低乳糖牛奶和高铁牛奶中的一种或多种。其中，所述的原料乳为本领域常规的原料乳，较佳地为牛乳。除所述待测组分外，所述牛乳的成分及含量一般如表1所示：表1组分平均组成组成范围％水87.1％85.5～88.7％非脂乳固体8.9％7.9～10.0％乳糖4.6％3.8～5.3％脂肪4.0％2.4～5.5％蛋白质3.25％2.3～4.4％有机酸0.17％0.13～0.22％微量物质0.7％0.5～0.8％杂质0.18％0.13～0.22％其中，百分比为各组分相对于牛乳的质量百分比。步骤(1)中，所述的待测样品可能含有阿莫西林、青霉素G和青霉素V中的一种或多种。该些组分可能是由于养殖动物和生产饲料过程中，超量或超范围使用抗生素、不严格执行药物配伍禁忌或停药期规定或使用违禁抗生素等现象造成的。步骤(1)中，所述的待测样品中，阿莫西林的含量较佳地为4～1000μg/Kg，更佳地为10～500μg/Kg，最佳地为10～50μg/Kg。所述的待测样品中，青霉素G的含量较佳地为4～1000μg/Kg，更佳地为10～500μg/Kg，最佳地为10～50μg/Kg。所述的待测样品中，青霉素V的含量较佳地为5～1000μg/Kg，更佳地为10～500μg/Kg，最佳地为10～50μg/Kg。步骤(1)中，所述乙腈的添加量为本领域常规的添加量，较佳地为3～40mL/1～4g待测样品，更佳地为4～10mL/1g待测样品。步骤(1)中，较佳地，在所述离心的操作之前，先将所述混合物进行漩涡震荡。所述旋涡震荡的方法和条件为本领域常规的方法和条件，所述的旋涡震荡的时间较佳地为1～10min，更佳地为5min。所述漩涡震荡的温度本领域常规，一般为室温。所述旋涡震荡是为了利于提取，使乙腈进一步提取所述待测成分。步骤(1)中，较佳地，所述混合物中还包含酸。所述酸为本领域常规的酸，较佳地为甲酸和/或乙酸。所述酸的添加量为本领域常规，较佳地为0.1～2％，更佳地为0.8～1.2％，最佳地为1％；上述百分比为所述酸占所述乙腈的体积百分比。添加所述酸后，所述待测样品中所述阿莫西林、所述青霉素G或所述青霉素V的提取率至少能提高10％以上。步骤(1)中，根据本领域常识，可使用乙腈和酸进行多次离心操作，较佳地使用乙腈和酸进行两次离心操作。所述酸的种类和用量如前所述。根据本领域常识，将多次离心后所得上清液进行合并。步骤(1)中，所述的离心的方法和条件为本领域常规的方法和条件。所述的离心的转速较佳地为5000～15000rpm。所述的离心的时间较佳地为5～30min。步骤(1)中，较佳地，将所述上清液先进行定容后再进本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预处理方法，其特征在于，其包括以下步骤：(1)将待测样品和乙腈的混合物，离心，收集上清液；所述的待测样品为不含固体颗粒的乳制品；(2)将所述上清液上样至已经活化的Oasis PRiME HLB固相萃取小柱，收集流出液，即得预处理后的待测样品。

【技术特征摘要】
1.一种预处理方法，其特征在于，其包括以下步骤：
(1)将待测样品和乙腈的混合物，离心，收集上清液；所述的待测样
品为不含固体颗粒的乳制品；
(2)将所述上清液上样至已经活化的OasisPRiMEHLB固相萃取小柱，
收集流出液，即得预处理后的待测样品。
2.如权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述的待测样品为
原料乳和/或液态乳制品；
所述的液态乳制品较佳地为高钙牛奶、高铁牛奶、低乳糖牛奶和低脂牛
奶中的一种或多种；
所述的原料乳较佳地为牛乳。
3.如权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，步骤(1)中，所述
的待测样品中，阿莫西林的含量为4～1000μg/Kg，较佳地为10～500μg/Kg，
更佳地为10～50μg/Kg；所述的待测样品中，青霉素G的含量为4～1000μg/Kg，
较佳地为10～500μg/Kg，更佳地为10～50μg/Kg；所述的待测样品中，青霉素
V的含量为5～1000μg/Kg，较佳地为10～500μg/Kg，更佳地为10～50μg/Kg；
步骤(1)中，所述乙腈的添加量为3～40mL/1～4g待测样品，较佳地为
4～10mL/1g待测样品；
步骤(1)中，在所述离心的操作之前，先将所述混合物进行漩涡震荡；
所述的旋涡震荡的时间较佳地为1～10min；
步骤(1)中，所述混合物中还包含酸；所述酸较佳地为甲酸和/或乙酸；
所述酸的添加量为0.1～2％，较佳地为0.8～1.2％；上述百分比为所述酸占所
述乙腈的体积百分比；较佳地使用所述乙腈和酸进行两次离心操作；
步骤(1)中，所述的离心的转速为5000～15000rpm；所述的离心的时
间为5～30min。
4.如权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，步骤(1)中，将所
述上清液先进行定容后再进行步骤(2)的操作；所述定容的操作过程中，
较佳地使用水或乙腈进行定容；所述定容的终点较佳地为10～25mL/g所述待

\t测样品；
步骤(2)中，活化采用的溶剂种类为乙腈水溶液或甲醇水溶液；所述
乙腈水溶液中，乙腈占水的体积百分比较佳地为10～80％；所述甲醇水溶液
中，甲醇占水的体积百分比较佳地为10～80％；所述乙腈水溶液或所述甲醇
水溶液的用量较佳地为3～8mL；
步骤(2)中，所述上清液在所述固相萃取小柱中的流速为0.025～0.30
mL/s。
5.一种待测成分的检测方法，所述待测成分为阿莫西林、青霉素G和
青霉素V中的一种或多种，其特征在在于，其包括以下步骤：
(1)将如权利要求1～4任一项所述预处理后的待测样品去除溶剂，再
用溶剂A溶解，过滤，得进料样品；所述溶剂A为甲醇水溶液、乙腈水溶
液或水；
(2)将步骤(1)中所述进料样品再进行高效液相色谱-电喷雾串联二

【专利技术属性】
技术研发人员：王渊龙，游春苹，刘振民，
申请(专利权)人：光明乳业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31