作为补体激活的抑制剂的MASP同种型制造技术

本发明专利技术涉及新型ficolin-相关多肽，和衍生于这些ficolin-相关多肽的多肽，其用于治疗与炎症、凋亡、自体免疫性、凝结、血栓形成或凝血病相关的疾病有关的病症的治疗，以及用作生物标记。本发明专利技术还涉及识别所述新型ficolin-相关多肽和衍生于其的多肽的抗体、编码所述多肽的核酸分子、用于生产所述多肽的载体和宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新型ficolin-相关多肽，和衍生于这些ficolin-相关多肽的多肽，其用于治疗与炎症、凋亡、自体免疫性、凝结、血栓形成或凝血病相关的疾病有关的病症的治疗，以及用作生物标记。本专利技术还涉及识别所述新型ficolin-相关多肽和衍生于其的多肽的抗体、编码所述多肽的核酸分子、用于生产所述多肽的载体和宿主细胞。
技术介绍
补体系统(C)的激活通过三种不同的起始途径完成旁路途径(AP)，经典途径(CP)，或凝集素途径(LCP)。AP激活发生在外源表面上，并且由C3的缓慢自发性水解和因子备解素、因子B和因子D形成功能性C3转换酶C3bBb的活性引起。AP还作为另外两种途径的放大途径(amplification pathway)(放大环)起作用。最近，已经表明，备用的转换酶组装还可以通过将备解素非共价连接到一些靶标表面上而起始。另一方面，当Clq结合与 抗原复合的免疫球蛋白时起始CP激活，Clq同与抗原复合的免疫球蛋白的结合引发Clq-缔合的丝氨酸蛋白酶Clr和Cls的激活。Cls分裂并且激活C4和C2，从而形成CP C3转换酶C4b2a。当甘露糖-结合凝集素(MBL)或ficolins结合限制性模式的糖类(carbohydrate)或乙酰化的化合物时，例如，在微生物体表面上，或当暴露在濒死宿主细胞上时，激活LCP。当与配体结合时，缔合的丝氨酸蛋白酶MASP-2激活并且分裂C4和C2，从而形成LCP C3转换酶C4b2a。已经提议MASP-I的功能涉及C2的MASP-2分裂的稳定，并且还指导C3的低级分裂。然而，其它研究将MASP-I和MASP-2的功能和活性与涉及凝血酶原、纤维蛋白原和因子XIII的凝结系统交叉通讯(coagulation system cross-talk)相关。使用MASPI/3敲除小鼠，最近证明MASP-I事实上有助于补体活性。最近发现的MBL缔合的丝氨酸蛋白酶MASP-3的准确功能尚未得到阐明。已经报道了一些研究，其表明MASP-3与有限范围的MBL寡聚体缔合，并且MASP-3和小的MBL-缔合的蛋白(sMAP)参与MBL依赖性LCP补体激活的调节或抑制。MASP-I和-3通过不同的剪接来源于同一 MASP1/3基因(存在于染色体3q27_q28上)。它们包含相同的A链，不同的是15个C端残基。A链包括由EGF(表皮生长因子)结构域隔开的两个CUB (Clr/Cls，Urchin-EGF,骨形态生成蛋白)结构域，接着是两个CCP结构域(补体控制蛋白)。包括丝氨酸蛋白酶结构域的B链不同于MASP-I和MASP-3。MASP-2和sMAP也来源于相同的基因(存在于染色体Ip36-p36. 2上)，其中sMAP是缺少丝氨酸蛋白酶结构域和A链主要部分的截短形式。已经表明MASP1/3基因是多态性的，但是其功能重要性仍然所知甚少。然而，存在一些证据表明MASP2/sMAP基因中的多态性与增加的感染风险有关。MASPs的表达定位在肝脏的肝细胞，但是最近的研究记载人MASP-3 mRNA (唯一的MASP-mRNA)在宽泛范围的组织中表达。专利技术目的本专利技术实施方案的目的是提供适于治疗与炎症、凋亡、自体免疫性、凝结、和/或血栓形成或凝血病相关的疾病有关的病症的多肽。本专利技术的多肽可以进一步适于作为生物标记，用于诊断和/或预测这些适应证以及用于恶性病，如癌症。专利技术概述本专利技术人已经发现与凝集素补体途径的识别分子相关的新型多肽以及诸如衍生于其的片段的多肽可以用于治疗与炎症、凋亡、自体免疫性、凝结、和/或血栓形成或凝血病相关的疾病有关的特定医学病症的治疗。因此，在第一方面，本专利技术涉及分离的ficolin-相关多肽。在第二方面，本专利技术涉及包括氨基酸序列SEQ ID NO :4的多肽或其变体或免疫学片段。在第三方面，本专利技术涉及特异性结合本专利技术的多肽的抗体。在第四方面，本专利技术涉及编码本专利技术的多肽的分离的核酸分子。在另一个方面，本专利技术涉及包含与SEQ NO :2的序列至少70%相同的核苷酸序列的分尚的核酸分子。在另一个方面，本专利技术涉及包含编码本专利技术的多肽的分离的核酸分子的载体。在另一个方面，本专利技术涉及包含含有编码本专利技术的多肽的分离的核酸分子的载体的宿主细胞。在另一个方面，本专利技术涉及产生本专利技术的多肽的方法，所述方法包括在允许多核苷酸构建体表达的条件下，在适合的生长培养基中培养本专利技术的细胞，并且从培养基中回收得到的多肽。在另一个方面中，本专利技术涉及包含本专利技术的多肽的组合物。在另一个方面中，本专利技术涉及包含本专利技术的多肽的药物组合物。在另一个方面中，本专利技术涉及检测生物样品中的本专利技术的多肽的方法，所述方法包括a)获得生物学样品；b)使所述生物学样品与本专利技术的抗体接触；并且c)如果有的话，检测所述抗体与多肽的复合物；作为所述样品中存在所述多肽的指示。在另一个方面中，本专利技术涉及本专利技术的多肽，其用作药物。在另一个方面中，本专利技术涉及本专利技术的多肽用于制备药物的用途。在另一个方面中，本专利技术涉及本专利技术的多肽，其用于治疗与炎症、凋亡和/或自体免疫性相关的任意适应证。在另一个方面中，本专利技术涉及本专利技术的多肽，其用于治疗与凝结、血栓形成或凝血病相关的疾病有关的任意适应证。在另一个方面中，本专利技术涉及本专利技术的多肽，其用于预防在鉴定的高危患者中发生血栓栓塞并发症，所述鉴定的高危患者如经历手术的那些或患有充血性心力衰竭(congestive heart failure)的那些。在另一个方面中，本专利技术涉及本专利技术的多肽，其用于治疗与心脏相关的医学病症。 在另一个方面中，本专利技术涉及本专利技术的多肽，其用于治疗与ficolin-相关多肽缺乏有关的医学病症。在另一个方面中，本专利技术涉及用于治疗与炎症、凋亡和/或自体免疫性相关的任意适应证的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用治疗或预防有效量的本专利技术的多肽。在另一个方面中，本专利技术涉及用于治疗与凝结、血栓形成或凝血病相关的疾病有关的任意适应证的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用治疗或预防有效量的本专利技术的多肽。在另一个方面中，本专利技术涉及用于预防在鉴定的高危患者中发生血栓栓塞并发症的方法，所述鉴定的高危患者如经历手术的那些或患有充血性心力衰竭的那些，所述方法包括向需要其的受试者施用治疗或预防有效量的本专利技术的多肽。在另一个方面中，本专利技术涉及用于治疗与心脏相关的医学病症的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用治疗或预防有效量的本专利技术的多肽。在另一个方面中，本专利技术涉及用于治疗与ficolin-相关多肽缺乏有关的医学病症的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用治疗或预防有效量的本专利技术的多肽。 在另一个方面中，本专利技术涉及能够在严格条件下与编码本专利技术的多肽的核酸序列杂交的核酸探针。在另一个方面中，本专利技术涉及检测生物学样品中存在编码本专利技术的多肽的核酸的方法，所述方法包括a)获得生物学样品；b)使所述生物学样品与本专利技术的核酸探针接触；并且c)如果有的话，检测所述核酸探针与编码多肽的核酸的复合物；作为在所述样品中存在所述编码多肽的核酸的指示。在另一个方面中，本专利技术涉及诊断与ficolin-相关多肽异常表达有关的病症的方法，所述方法包括获得来自患者的生物学样品，并且测量所述生物学样品中ficolin-相关多肽的表达，其中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.07.17 EP 09165770.0;2009.10.01 EP 09171941.9;1.分离的ficolin-相关多肽。2.按照权利要求I的多肽，其基本上是纯的。3.按照权利要求I或2的多肽，其中所述多肽能够与甘露糖结合凝集素(MBL)缔合。4.按照权利要求1-3中任一项的多肽,其中所述多肽能够与ficolin-1,ficolin-2,或ficolin-3中的任一种相缔合。5.按照权利要求1-4中任一项的多肽，其中所述多肽能够与Clq，肺表面活性蛋白SP-A和/或SP-D，和细胞内胶原样防御分子，诸如CL-Ll中的任一种相缔合。6.按照权利要求1-5中任一项的多肽，其中所述多肽能够与特异性接受体蛋白，诸如特异性受体相缔合。7.按照权利要求1-6中任一项的多肽，其中所述多肽包含SEQNO 3的氨基酸序列20-297、或其功能性变体。8.按照权利要求1-7中任一项的多肽，其中所述多肽包含SEQNO 1的氨基酸序列20-380、或其功能性变体。9.按照权利要求1-8中任一项的多肽，其中所述多肽包含SEQIDNO 9的氨基酸序列16-296或其功能性变体。10.按照权利要求1-8中任一项的多肽，其中所述多肽在非还原条件下在SDS-PAGE上具有约40kDa的分子量。11.按照权利要求1-8或10中任一项的多肽，其中所述多肽在与选自SEQNO 1的49和178的位置相对应的一个或两个氨基酸处被N-连接糖基化。12.按照权利要求1-11中任一项的多肽，其中所述多肽是重组蛋白。13.按照权利要求1-12中任一项的多肽，其中所述多肽是同型二聚体形式的。14.按照权利要求1-8、10-13中任一项的多肽，其中所述多肽由SEQIDNO I的氨基酸序列20-380组成。15.按照权利要求1-14中任一项的多肽，其包含SEQID NO 4的氨基酸序列或其变体或免疫学片段。16.包含SEQID NO 4的氨基酸序列或其变体或免疫学片段的多肽。17.按照权利要求16的多肽，其由SEQID NO :4、或其变体或免疫学片段组成。18.按照权利要求1-17中任一项的多肽，其中所述多肽介导濒死细胞或死亡细胞、和/或细胞碎片的吞噬，所述濒死细胞或死亡细胞诸如凋亡细胞。19.按照权利要求1-18中任一项的多肽，其中所述多肽介导微生物的吞噬。20.按照权利要求1-19中任一项的多肽，其中所述多肽具有与具有序列同源性的其它蛋白相似的活性，所述其它蛋白如吞没衔接蛋白(GULP)。21.特异性结合按照权利要求1-20中任一项的多肽的抗体。22.编码权利要求1-20中任一项的多肽的分离的核酸分子。23.包含与SEQNO :2的序列具有至少70%同一性的核苷酸序列的分尚的核酸分子。24.包含按照权利要求22-23中任一项的分离的核酸分子的载体。25.包含按照权利要求24的载体的宿主细胞。26.按照权利要求25的宿主细胞，其是真核细胞。27.按照权利要求26的宿主细胞，其是哺乳动物来源的。28.按照权利要求27的宿主细胞，其中所述细胞选自由CHO细胞、HEK细胞和BHK细胞组成的组。29.产生如权利要求1-20中任一项定义的多肽的方法，所述方法包括在允许多核苷酸构建体表达的条件下在适合的生长培养基中培养如权利要求25-28中任一项定义的细胞，并且从所述培养基中回收得到的多肽。30.包含如权利要求1-20中任一项定义的多肽的组合物。31.包含如权利要求1-20中任一项定义的多肽的药物组合物。32.检测生物学样品中的如权利要求1-20中任一项定义的多肽的方法，所述方法包括 a)获得生物学样品； b)使所述生物学样品与按照权利要求21的抗体接触；并且 c)如果有的话，检测所述抗体与所述多肽的复合物； 作为所述样品中存在所述多肽的指示。33.如权利要求1-20中任一项定义的多肽，其用作药物。34.如权利要求1-20中任一项定义的多肽用于制备药物的用途。35.如权利要求1-20中任一项定义的多肽，其用于治疗与炎症、凋亡和/或自体免疫性相关的任意适应证。36.如权利要求1-20中任一项定义的多肽，其用于治疗任意自体免疫性病症，诸如艾迪生病，自体免疫性溶血性贫血，自体免疫性甲状腺炎，局限性回肠炎，格雷夫斯病，吉兰-巴雷综合征，系统性红斑狼疮(SLE)，狼疮性肾炎，多发性硬化病，重症肌无力，银屑病，原发性胆汁性肝硬变，类风湿性关节炎和葡萄膜炎，哮喘，动脉粥样硬化，I型糖尿病，银屑病，各种过敏症。37.如权利要求1-20中任一项定义的多肽，其用于治疗选自由下列组成的组的任意炎性病症阑尾炎，消化性溃疡，胃溃疡，十二指肠溃疡，腹膜炎，胰腺炎，溃疡性结肠炎，假膜性结肠炎，急性结肠炎，缺血性结肠炎，憩室炎，会厌炎，失弛缓症，胆管炎，胆囊炎，肝炎，局限性回肠炎，肠炎，惠普尔病，过敏症，免疫复合物病，器官缺血，再灌注损伤，器官坏死，花粉症,脓毒症,败血病，内毒素性休克,恶病质,高烧,嗜酸性肉芽肿，肉芽肿病，肉瘤样病,感染性流产，附睾炎，阴道炎，前列腺炎，尿道炎，支气管炎，肺气肿，鼻炎，肺炎，肺尘病，肺泡炎，毛细支气管炎，咽头炎，胸膜炎，窦炎，流感，呼吸道合胞病毒感染，HIV感染，乙型肝炎病毒感染，丙型肝炎病毒感染，弥散性菌血症，登革热，念珠菌病，疟疾，丝虫病，阿米巴病，包虫囊肿，烧伤，皮炎，皮肌炎，晒伤，荨麻疫，抚，风疹块，血管炎，脉管炎，心内膜炎，动脉炎，动脉粥样硬化，血栓性静脉炎，心包炎，心肌炎，心肌缺血，结节性动脉周围炎，风湿热，阿尔茨海默病，腹腔病，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫综合征，脑膜炎，脑炎，多发性硬化病，脑梗死，脑栓塞，吉兰-巴雷综合征，神经炎，神经痛，脊髓损伤，瘫痪，葡萄膜炎，关节炎，关节痛，骨髓炎，筋膜炎，佩吉特病，痛风，牙周病，类风湿性关节炎，滑膜炎，重症肌无力，甲状腺炎，系统性红斑性狼疮，肺出血肾炎综合征，贝赫切特综合征，同种异体移植排斥，移植物抗宿主病，I型糖尿病，强直性脊柱炎，贝格尔病，莱特尔综合征和霍奇金病，角膜炎，2型糖尿病，囊性纤维化，心肌梗死，再灌注损伤，中风，皮肌炎，代谢综合征，系统性炎症反应综合征，脓毒症，多器官衰竭，弥漫性血管内凝血，过敏性休克，血管并发症和与I型和/或2型糖尿病相关的肾病，脑膜炎，细菌性败血病，并发性疟疾，非典型的溶血性尿毒症综合征，溶血性尿毒症综合征，年龄相关的黄斑变性，阵发性睡眠性血红蛋白尿症，蛇毒咬伤，烧伤，和器官移植并发症。38.如权利要求1-20中任一项定义的多肽，其用于治疗选自由下列组成的组的任意炎性病症器官缺血，再灌注损伤，器官坏死，血管炎，心内膜炎，动脉粥样硬化，血栓性静脉炎,心包炎,心肌炎,心肌缺血,结节性动脉周围炎，风湿热，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫综合征，脑梗死，脑栓塞，血管并发症和与I型和/或2型糖尿病相关的肾病。39.如权利要求1-20中任一项定义的多肽，其用于治疗与凝结、血栓形成或凝血病相关的疾病有关的任意适应证。40.如权利要求1-20中任一项定义的多肽，其用于治疗与凝结、血栓形成或凝血病相关的疾病或病症有关的适应证，包括炎性反应和与纤维蛋白形成有关的慢性血栓栓塞疾病或病症,包括血管病症,如血栓形成,诸如深静脉血栓形成,动脉血栓形成,术后血栓形成，冠状动脉旁路移植(CABG)，经皮透皮冠状血管成形(PTCA)，血小板沉积中风，肿瘤生长，肿瘤转移，血管发生，血栓溶解，动脉粥样硬化，再狭窄，如动脉硬化和/或血管成形后的再狭窄，急性和慢性适应证，如炎症，脓毒症，脓毒性休克，败血病，低血压，成人呼吸窘迫综合征(ARDS)，系统性炎症反应综合征(SIRS)，弥散性血管内凝血病(DIC)，肺栓塞，病理性血小板沉积，心肌梗死，或用...

【专利技术属性】
技术研发人员：彼得·加雷尔，蒂娜·胡梅尔肖伊·格卢，米克尔奥勒·舍尔德，
申请(专利权)人：丹麦国家医院，哥本哈根大学，南丹麦大学，
类型：发明
国别省市：