人膜联蛋白V变体及其表达、制备和应用制造技术

本发明专利技术属生物技术领域，具体公开了一种膜联蛋白V变体的设计、制备方法及应用。该膜联蛋白V变体是具有序列表中序列1氨基酸残基序列的蛋白质，其特征在于序列1中的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加，且具有与序列1的氨基酸残基序列相同活性的由序列1衍生的蛋白质。通过该膜联蛋白V变体制备方法生产的膜联蛋白V变体纯度好、产率高、标记方便及标记效率和稳定性高且不影响膜联蛋白V变体的生物学功能，适用于工业化生产，为进一步研究膜联蛋白V变体及其在细胞凋亡监测试剂、疾病监测药物等方面的应用奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属基因工程生物
，涉及一种膜联蛋白V变体和所述膜联蛋白V变体的试剂制备和药学用途。
技术介绍
膜联蛋白V(Annexin V)属于膜联蛋白家族,此家族是一组进化上高度保守的、具有Ca2+和磷脂结合特性的蛋白质。它们在结构上具有同源性，被认为是Ca2+调节的膜结合组件。膜联蛋白家族功能上的相同点在于在Ca2+存在时，对酸性磷脂分子有高亲合力。人们在高等和低等真核生物中都发现存在有膜联蛋白家族的成员。膜联蛋白成员存在于很多不同的细胞类型中，它们的生化作用与免疫性质密切相关，参与抗凝、抗炎症过程，特别是细胞复制、分化及胞吐过程(Iwasaki A, Suda M, Nakao H, et al. Biochem, 1987,10 1261 ；Pollard H B，Haigler HT. Biol Chem, 1990,265 :21207)。该家族成员的生物学功能还待进一步的研究。尽管人们对成员的体内功能仍不甚了解，但普遍认为膜联蛋白与磷脂结合的活性是膜联蛋白家族体外活性的基础，并且与它们的生理性质紧密相关。目前，膜联蛋白V的应用主要集中在凋亡的检测。细胞凋亡(Apo本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种膜联蛋白V变体，具有序列表中序列I氨基酸残基序列的蛋白质，其特征在于是序列I中的氨基酸残基序列经过ー个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加，且具有与序列I的氨基酸残基序列相同活性的由序列I衍生的蛋白质。2.根据权利要求I所述的膜联蛋白V变体，其特征是在膜联蛋白V的C-末端添加一段具有柔性结构的、不含支链氨基酸的短肽，其中，短肽为1-25氨基酸残基，主要由甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸等不含支链的氨基酸组成，并含有1-3个半胱氨酸。3.根据权利要求I所述的膜联蛋白V变体，其特征在于膜联蛋白V的C-末端添加ー个半胱氨酸。4.ー种上述膜联蛋白V变体的制备方法，其特征在于按如下步骤进行 a.利用计算机辅助分子设计，在膜联蛋白V晶体结构的基础上，对膜联蛋白V的C-末端添加氨基酸序列进行分子模建和设计； b.设计膜联蛋白V蛋白编码序列的引物对，以膜联蛋白V基因为模板进行PCR扩增； c.PCR电泳回收产物与克隆载体连接并转入大肠杆菌感受态细胞ToplO上进行培养； d.用限制性内切酶NcoI和Xho I分别双酶切c步骤回收产物和表达载体pET28a，将得到的两种目的基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：华子春，胡敏进，
申请(专利权)人：江苏靶标生物医药研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：