本发明专利技术涉及选择性地与RANKL/OPGbp结合并且调节RANKL/OPGbp与RANK/OPG之间的相互作用的拮抗剂或抑制剂。具体地讲，本发明专利技术涉及用于治疗、预防或减轻雄性不育症或雄性生育力降低，例如，少精子症或无精子症的、与RANKL/OPGbp肽具有免疫反应性的抗体或抗原结合域、其片段或衍生物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及选择性地与RANKL/OPGbp结合并且调节RANKL/OPGbp与RANK/0PG之间 的相互作用的拮抗剂或抑制剂。特别地，本专利技术涉及用于治疗、预防或减轻雄性不育症或雄 性生育力降低(例如，少精子症或无精子症)的、与RANKL/OPGbp肽具有免疫反应性的抗体或 抗原结合域、其片段或衍生物。
技术介绍
NF-κΒ受体活化因子配体（receptor activator of NF-κΒ IigancURANKL)系统被 认为对骨的体内稳态很重要并且包括三个重要因子。RANKL是与邻近细胞上的特异性受体 (NF-κΒ的受体活化因子(RANK))结合的跨膜配体，该特异性受体随后活化NFKB并且通过调 节细胞周期（即，增殖、分化和细胞凋亡)来调节细胞活化。OPG是结合RANKL并且抑制其信号 传导的内源性分泌蛋白。 RANK/RANKL触发促进破骨细胞分化的TRAF介导的激酶级联的网络。RANKL在成骨 细胞上表达并且其受体，Rank，在前破骨细胞上表达。RANKL表达受到许多因子的刺激，例 如，IL-l、IL-6、IL-ll、IL-17、TNF-α、维生素 D、Ca2+、甲状旁腺、糖皮质激素、前列腺素 E2和免 疫抑制药物，并且TGF-α下调RANKL表达。RANK/RANKL的相互作用诱导多核的成熟破骨细胞 的分化和形成，从而导致骨重吸收。第三蛋白激动剂，骨保护素(OPG)，也由成骨细胞产生， 并且已知对前破骨细胞的分化过程发挥抑制作用。OPG通过结合到RANKL，也称为骨保护素 结合蛋白（OPGbp)，抑制RANK/RANKL相互作用和后续的破骨细胞生成。OPG因此是非常有效 的抗吸收剂。它也用作肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的诱饵受体并且通过阻碍 这种配体的细胞凋亡作用来增加细胞存活率。小鼠中OPG的过表达导致重度骨硬化病并且 OPG缺失的小鼠患有骨质疏松症的事实证明了OPG的生理学重要性。缺失RANK或RANKL诱导 小鼠的骨硬化病。 因此，RANK/RANKL系统对骨再吸收细胞(破骨细胞)的活化至关重要。在骨中，骨合 成细胞(成骨细胞)表达向未成熟的破骨细胞上的RANK传导信号的RANKL。这诱导细胞的增 殖和活化，并且它们开始增殖并再吸收骨。OPG由骨中的体细胞产生并且这种产生受到性激 素、TGF-B和各种其他物质的调节。现在，人们制备了抗RANKL的重组抗体，狄诺塞麦 (denosumab)用于治疗骨质疏松症，因为它抑制RANKL的信号传导并且因此引起人体中的更 少的骨再吸收。RANKL信号传导在健康人体中仅具有两种另外的已知的额外功能，因为它涉 及哺乳细胞和免疫细胞。 最近，已经公开了使用RANK/RANKL拮抗剂治疗神经肌肉疾病、遗传性肌病和/或非 遗传性肌病，和/或用于调节骨骼肌和心肌废用、疾病和老化(W0 2013/067639 Al)。 降低的精液质量是雄性不育症的主要因素。精液质量是精液完成受精的能力的度 量标准。如今雄性生育潜力的评价基本上通过精液分析进行。精液分析评价雄性精液的某 些特性以及精液中包含的精子。评价精子质量所测量的最常见的变量是:精子计数、运动性 和形态。 然而，当今无法治疗射精没有精子的男性或者没有能够增加精子数量的药物。
技术实现思路
在患有生精障碍或具有原位瘤的重度睾丸发育不全的活组织检查中，似乎看来在 管周细胞中不产生OPG。这表明有可能用RANKL的拮抗剂或抑制剂(例如，拮抗性的抗RANKL 抗体)治疗人，这些拮抗剂或抑制剂可以影响生殖细胞的增殖和细胞凋亡。因此，拮抗性的 抗RANKL抗体，例如，狄诺塞麦，可以具有新适应症作为没有精子但是睾丸中存在生殖细胞 的男性的治疗。可替代地，相对物(RANKL)可以用于获得相反效果的男性生育控制。 本专利技术人现在已经解释了 RANKL、RANK和OPG在人和小鼠的睾丸中在RNA和蛋白水 平均表达。塞尔托利氏细胞表达RANKL，而生殖细胞表达RANK并且管周细胞表达OPG。正常 地，RANKL活化NFKB，并且在雄性性腺中此途径的活化决定了睾丸细胞在睾丸中是增殖还是 经历细胞凋亡。因此，此途径似乎是生殖细胞增殖的新的调节子。这在实施例3-5中有进一 步记载，实施例3-5显示了特异性化合物（以OPG说明）和特异性抗体（以狄诺塞麦说明）能够 正面影响精液质量。 本专利技术的目的是提供诘抗剂或抑制剂，例如，调节RANKL和RANK之间的相互作用的 抗体或抗原结合域，特别是阻碍RANKL和RANK之间的相互作用和/或抑制RANKL的至少一种 活性(其导致雄性不育症或雄生育力降低)的抗体或抗原结合域。本专利技术的另外的目的是提 供可用于治疗、预防或减轻雄性不育或雄性生育力降低的抗体或抗原结合域、其片段或衍 生物。本专利技术的另外的目的是提供调节睾丸中RANKL和RANK的相互作用并且中和RANKL的至 少一种活性的抗体、抗原结合域或其片段或变体。所述抗体或抗原结合域、其片段或衍生物 可用于治疗、预防或减轻男性不育或男性生育力降低，例如精子减少症或无精子症。【附图说明】图1示出了来自标记为1-23的人样本的选择的转录物的RT-PCR。两个不同的引物 集(primerset)检测正常的和病态的睾丸组织中的RANKL的两种不同的同种型。RANK和OPG 也在正常的和病态的睾丸样本中表达，并且与正常睾丸相比OPG表达在CIS和精原细胞瘤中 消失。有趣的是，仅一种RANKL同种型仅在塞尔托利氏细胞中表达，并且这种同种型在表示 性别特异性的RANKL同种型的卵巢中不表达。这种同种型在NTera2细胞中不表达，而在 TCAM2细胞中表达。RANK在非精原细胞瘤中不存在或者弱表达，而NFKB和RELa+b在所有样本 中均表达。图2A示出了来自具有正常维生素 D受体(Vdr wt)或具有突变的和无活性维生素 D 受体(Vdr K0)的瑞士小鼠的选择的转录物的RT-PCR。引物集检测正常小鼠中的RANKL，而表 达在Vdr KO小鼠中很低或不存在。RANK、OPG、RELa在所有动物中均表达，而NFKB看起来在 Vdr KO小鼠中表达较低。图2B示出了来自具有正常Vdr(wt)、一个无活性等位基因（+/-)或两个失活的等位 基因（-/_)的小鼠的RANKL的定量PCR。杂合和纯合突变小鼠中的RANKL的显著下调表明主同 种型为RANKLl，因为它由维生素 D调节，而同种型3并非如此。图3示出了 RANKL和RANK除在正常小鼠的睾丸中表达之外在从人获得的正常睾丸 和原位癌小管中的免疫组织化学表达。RANK在生殖细胞中表达，而RANKL在塞尔托利氏细胞 和生殖细胞的后期阶段中表达。图4:在正常培养基中生长14小时+4小时的NT2细胞在用刃天青染料处理20小时之 后的存活率/增殖。所有处理的浓度为l〇〇ng/ml。值为平均值土标准差(η = 8)，其中*表示在 t检验之后的显著性差异ρ〈0.05。 图5:在正常培养基中生长10小时+6.5小时的TCam-2细胞在用刃天青染料处理4小 时和20小时之后的存活率/增殖。所有处理的浓度为100ng/ml。值为平均值土标准差(η = 8)，其中*表不在t检验之后的显著性本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种化合物，所述化合物是与NF‑κB(RANK)的受体活化剂结合的NF‑κB配体(RANKL)的骨保护素结合蛋白(OPGbp)/受体活化剂的拮抗剂或抑制剂、用于刺激睾丸中的(生殖)细胞增殖、和/或用于治疗和/或预防哺乳动物的雄性不育症、和/或用于诱导或提高哺乳动物的雄性生育力。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：马丁·布隆贝格·延森，
申请(专利权)人：丹麦国家医院，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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