自组装聚合分支DNA探针的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种自组装聚合分支DNA探针的制备方法。将常规探针高密度固定于芯片上可提高探针的杂交检测效率，但目前分支状DNA探针的制作操作复杂，制造成本高。本发明专利技术将互补探针溶于交联缓冲液中，加热变性降至室温静置，紫外光交联使互补结合的探针间形成共价结合，从而形成稳定的自组装聚合分支DNA探针；交联缓冲液配制方法为：将1.0g精氨酸和20g聚乙二醇1000溶解于0.1mol/L、700mL的PBS中，PBS的pH为7.2，然后用PBS定容至1L。本发明专利技术制备方法简捷快速、制备成本低，可有效提高芯片检测的灵敏性，交联缓冲液加精氨酸后所获探针杂交检测灵敏度提高10倍。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种DNA探针的制备方法，具体涉及ー种自组装聚合分支DNA探针的制备方法。
技术介绍
基因芯片是将不同单链DNA探针固定于固相表面不同位置形成的探针阵列。由于各DNA探针核酸序列可与相应靶核酸序列互补，因此基因芯片可以实现同步高通量地检测样品中多种靶核酸。基因芯片固定的探针为单链DNA，也有采用肽核酸(PNA)或锁核酸(LNA)合成的探针，后两者虽然在杂交灵敏性和特异性方面较前者有所提高，但由于合成本较高一般较少采用。探针的长度对杂交的特异性有影响，短探针的特异性高于长探针。长DNA探针多是由基因克隆扩増、PCR扩增或其它扩增技术获得的，长度一般为数十至数百个 碱基，可用于基因表达分析；短DNA探针多为人工合成的寡聚核苷酸链，长度一般为8-30个碱基，由于短探针杂交检测的特异性高，杂交速度快，因此短探针常用于基因芯片，可用于核酸突变或单核苷酸多态性检测。芯片上的探针固定有两类方法，一是采用光引导的原位合成技术在芯片表面直接合成所需要的探针，该方法适用于制备高密度基因芯片；ニ是采用点样的方法直接将制备好的探针点于芯片上，通过探针末端标记的活性基团或是通过紫外光照射，使探本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.自组装聚合分支DNA探针的制备方法，其特征在于 由以下步骤实现 步骤一于内表面硅烷化处理的印pendorf管中，将探针结构分别为5 ’ - a - P - Y -3 ’和5’ -Y-a ’ - 0 - 3’的两种探针各10 Umol/L等摩尔浓度溶于交联缓冲液中； 其中，探针捕获序列Y区与DNA靶序列互补，a区与a ’区互补，P区与P ’互补；步骤二 将溶有探针的交联缓冲液加热至80°C -94°C变性lmin，然后自然降至200C -25°C，放置5-10min，使探针互补形成由氢键连...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭晏海，颜真，王萌，向安，刘永兰，汪钦，包晗，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：