一株邻苯二甲酸二丁酯降解菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株邻苯二甲酸二丁酯降解菌及其应用。本发明专利技术所提供的一株邻苯二甲酸二丁酯降解菌D8属于Elizabethkingiasp，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2012年3月23日，保藏编号为CCTCCNO:M2012088，菌株16SrDNA的GenBank登录号为JQ673498。该菌为革兰氏阴性菌，菌落为黄色，边缘整齐，呈圆形，光滑湿润，中心凸起。该菌利用邻苯二甲酸二丁酯作为唯一碳源和能源进行生长繁殖。该菌纯培养时，在60h能将400mg/L的DBP降解完全。菌株D8能耐受浓度高达2000mg/L的DBP，对较高浓度DBP工业废水具有优良的降解效果，该菌应用于炼油废水、农药废水、啤酒废水和焦化废水的生物强化处理，具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于环境污染物生物强化
，具体涉及一株邻苯二甲酸二丁酯降解菌及其应用。
技术介绍
邻苯二甲酸二丁酯(DBP)是一种重要的增塑剂，广泛应用于电线电缆、家具、汽车、服装、化妆品等行业。DBP为环境激素类物质，能干扰动物及人类的生殖系统和发育，具有发育和胚胎毒性。因此美国环保局、欧盟和中国国家环境监测中心均将DBP列为优先控制污染物。 邻苯二甲酸二丁酯类增塑剂易通过不同途径扩散到自然环境中，且DBP在自然环境中非常稳定，水解和光解的速率均非常缓慢，其水解半衰期长达20年之久，因此生物降解成为环境中DBP矿化的主要手段。生物法降解DBP具有成本低，条件温和，不产生二次污染等优点，符合构建环境友好型及资源节约型社会的要求与发展趋势。目前，国内外已有部分学者针对DBP筛选出具有良好降解性能的菌株，如乙酸隹丐不动杆菌{Calcium acetate Acinetobacter)> 乳杆菌(XactobaciIlus、、深红红球菌iRhodococcus ruber)、突光假单胞菌iPseudomorms fluorescens)、铜绿假单胞菌(.Pseudomonas aeruginosa)等。Elizabethkingia sp.是最近新建的一个属，由以前属于黄杆菌属中的6个种所组成，目前尚未见其降解邻苯二甲酸二丁酯的报道。炼油废水、农药废水、啤酒厂废水和焦化废水中含有一定浓度的DBP，而DBP属于难生化降解有机物，因此仅靠生物处理装置中的普通微生物很难实现对DBP的有效降解。
技术实现思路
本专利技术旨在解决普通微生物对邻苯二甲酸二丁酯(DBP)降解效率低的问题，目的是提供一株DBP降解菌，实现其对炼油废水、农药废水、啤酒废水和焦化废水的生物强化处理。本专利技术所提供的DBP降解菌D8源于中国石油化工股份有限公司武汉分公司污水处理装置中的活性污泥。该菌是以DBP作为唯一碳源和能源进行生长繁殖，在DBP无机盐培养基中对活性污泥中的菌群进行驯化培养，并通过平板划线分离纯化得到。其中，DBP无机盐培养基成分是K2HP0412H20 为 I. 0g, KH2PO4 为 I. 0g, NH4Cl 为O. 8g，NaCl 为 I. 0g，MgSO4 ·7Η20 为 O. 5g, CaCl2 为 O. 006g, FeSO4 ·7Η20 为 O. 02g，2mL 微量元素储备液，补足蒸懼水至IOOOmL ;所述微量元素储备液(g/L)的组分是MnS04 -H2O为O. Ig,ZnSO4 · 7H20 为 O. 12g ；H3BO3 为 O. 07g !Na2MoO4H2O 为 O. 04g ；CuSO4 · 5H20 为 O. 02g ；CoCl2 为O.04g。按固体培养基I. 5wt% 2wt%添加琼脂。该菌为革兰氏阴性菌，经16S 鉴定为Elizabethkingia sp，编号D8，16S rDNA的GenBank登录号为JQ673498，于2012年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉大学)，保藏编号为CCTCC N0:M2012088，该菌的产硫化氢试验、吲哚试验、淀粉水解试验、V-P试验和硝酸盐还原试验均为阳性，甲基红试验和尿酶测定试验为阴性，能利用邻苯二甲酸二丁酯作为唯一碳源和能源进行生长繁殖。该菌菌落为黄色，呈圆形，光滑湿润，边缘整齐。较优培养条件为温度35°C，初始pH= 7，接种量7vol%，摇床转速150 r/min。本专利技术还涉及所述sp. D8在DBP降解中的应用，应用于生物降解工业废水中的DBP ;工业废水为炼油废水、农药废水、啤酒废水和焦化废水中的一种。本专利技术与现有技术相比sp. D8能以DBP作为唯一碳源和能源进行生长繁殖，60 h内能将无机盐培养基中400 mg/L的DBP完全降解，并且能与原活性污泥中的土著微生物协同发挥高效降解作用，对炼油废水、农药废水、啤酒废水和焦化废水中的DBP具有良好的生物强化效果，具有良好的应用前景。附图说明 图I为本专利技术的菌株D8生长与DBP降解效果关系 图2为培养温度对本专利技术的菌株D8降解DBP的影响 图3为初始pH值对本专利技术的菌株D8降解DBP的影响 图4为接种量对本专利技术的菌株D8降解DBP的影响图； 图5为摇床转速对本专利技术的菌株D8降解DBP的影响 图6为本专利技术的菌株D8对添加较高浓度DBP炼油废水的处理效果 图7为本专利技术的菌株D8对添加较高浓度DBP农药废水的处理效果 图8为本专利技术的菌株D8对添加较高浓度DBP啤酒厂废水的处理效果 图9为本专利技术的菌株D8对添加较高浓度DBP焦化废水的处理效果图。具体实施例方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术做进一步描述，并非对其保护范围的限制。实施例I : Elizabethkingia sp. D8的分离与纯化、鉴定及其对DBP的降解特性 I、菌株的分离与纯化 (I)菌种来源 菌源来自中国石油化工股份有限公司武汉分公司污水处理装置中的活性污泥。(2)菌株的分离与纯化 将采集的样本置于4°C冰箱静置，取上清液I mL接种于100 mL已灭菌的LB培养基(蛋白胨lwt%，氯化钠lwt%，酵母抽提物O. 5wt%)中，30°C、150r/min活化培养过夜。然后将ImL菌液转接至含DBP为200mg/L的无机盐培养基中，同样条件下驯化培养2 d，逐步增大DBP浓度(400 mg/L,600 mg/L,800 mg/L、1000 mg/L,2000 mg/L)。驯化结束，将菌液分别按10_5、10_6、10_7、10_8体积比稀释，涂布于含DBP的无机盐平板上，30°C培养箱培养一周。挑取单个菌落，反复划线纯化，得到单菌落。进行降解试验，确定各菌株的降解能力，以LB斜面保藏降解性能好的菌株。2、菌株的鉴定 (I)DBP降解菌株D8的菌落形态特征及生理生化特性菌株D8的菌落为黄色，边缘整齐，呈圆形，光滑湿润，中心凸起。该菌的产硫化氢试验、吲哚试验、淀粉水解试验、V-P试验和硝酸盐还原试验均为阳性，甲基红试验和尿酶测定试验为阴性，能利用邻苯二甲酸二丁酯作为唯一碳源和能源进行生长繁殖。(2)菌株 D8 的 16S rDNA 鉴定 对菌株D8的16S rDNA基因进行克隆、测序，然后在GenB ank中进行Blast比对。结果显示，与其序列相似性达到99%的均为Elizabethkingia sp,其16S rDNA序列见序列表。结合菌株的生理生化特性，将其归属为sp.,编号为D8。3、菌株D8的生长及其对DBP降解效果 (I)菌悬液的制备 用接种环从试管斜面挑取一环菌接种于LB培养基，300C、150 r/min培养24h，取2 mL转接于新鲜LB培养基，30°C培养12 h (细菌处于对数生长期)，取菌液于4000 r/min条件下离心5 min收集菌体，再用已灭绝的DBP无机盐培养基(pH 7. O)洗涤2次，然后采用DBP无机盐培养基重悬菌体，调节细胞密度至0D_ 1，4°C保存备用。(2)菌株D8的生长与降解曲线 将菌株D8接种于含400 mg/L DBP的无机盐培养基中，于35°C、150 r/min和初始pH=7. O的条件下培养，测定细胞的生物量(0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株邻苯二甲酸二丁酯降解菌,经鉴定为sp,编号为D8,保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2012年3月23日，保藏编号为CCTCC N0:M2012088，菌株16S rDNA的GenBank登录号为JQ673498，其特征在于菌株D8为革兰氏阴性菌，菌落为黄色，呈圆形，光滑湿润，边缘整齐；该菌的产硫化氢试验、吲哚试验、淀粉水解试验、V-...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜家保，王巧凤，魏鑫，游海，许龙龙，
申请(专利权)人：武汉科技大学，
类型：发明
国别省市：