本发明专利技术公开了一种用于创面修复的干细胞制剂及其制备方法。该干细胞制剂以脐带、胎盘或羊膜间充质干细胞为活性细胞，加入生物相容性良好的高分子材料海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、羟乙基淀粉作为细胞稳定剂；本发明专利技术干细胞制剂具有较高的细胞活率，且作用持久，突破了间充质干细胞用于治疗的有效性的技术瓶颈。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制剂领域，特别涉及。
技术介绍
有研究报道，严重创伤，大面积烧伤、整形术后的创面覆盖已经成为了ー个十分重要的问题，除了患者自体植皮外，人们采用过同种异体植皮，以及其他相关修复材料来覆盖创面，但是无论自体或异体皮肤移植均受到供体来源和免疫排斥反应的限制。亟待寻找ー种理想的无排斥反应、促进皮肤损伤修复、促进皮肤再生的天然药物。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一组源于基质的异质细胞群,可以从人体大多数组织获取。大量实验研究显示，间充质干细胞具有表皮细胞分化潜能，可促进受创皮肤的愈合。骨髄源性间充质干细胞由于存在病毒污染的隐患，且随着供者年龄增长，其细胞数量和扩增、分化能力出现明显下降趋势，不适合批量制备。而来源于人脐带、胎盘或羊膜的间充质干细胞，成功避开了胚胎干细胞来源缺乏、异体排斥、道德伦理等诸多限制，成为了骨髄源间充质干细胞的很好的替代物；它们具有自我更新、组织修复、免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，此外还能够向及其它胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞、血管内皮细胞分化；而且细胞在体外易于扩増，扩增后分化能力、増殖能力保持稳定，适合大規模制备。目前临床上已有将MSCs应用于病人的报道，在深度烧伤的患者的创面涂布自体MSCs悬液，能够促进皮肤再生和血管的新生。但是单纯的细胞悬液很难附着在创ロ表面持 续发生作用，并且单纯的细胞悬液中活细胞的数量随着用药时间的延长而降低，不能保证足够的活细胞发挥治疗作用。申请号为200810136415. 6的专利技术专利公开了ー种使用甲基纤维素作为细胞基质的人脐带间充质干细胞创面涂抹剂的制备方法，但是该专利技术含有抗生素庆大霉素，不适用于抗生素过敏人群；而且涂抹剂快速配制中含有动物源成分胎牛血清，有可能造成过敏以及具有动物源性安全隐患；快速配制中操作步骤多，过程繁杂，带来微生物污染风险，运输前不能按照药典要求完成2周的无菌检测，制品质量无法保证。
技术实现思路
针对现有技术中存在的缺陷，本专利技术提供了ー种活性稳定的用于创面修复的干细胞制剂及其制备方法，为治疗皮肤损伤提供了有效的治疗手段。具体地，本专利技术提供了ー种用于创面修复的干细胞制剂，所述干细胞制剂包含脐带、胎盘或羊膜间充质干细胞以及高分子稳定剂，所述高分子稳定剂选自海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、羟こ基淀粉。所述脐带、胎盘或羊膜间充质干细胞由脐带、胎盘或羊膜等组织，经体外分离、筛选、传代、扩增后制备而得，它们贴壁生长，表达⑶29、⑶73、⑶90、⑶105等细胞表面蛋白分子，而不表达⑶lib、⑶34、⑶45、HLA-DR等细胞表面蛋白分子；它们具有自我更新、组织修复、免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，如向脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞分化，也可以向其它胚层谱系分化，如向表皮细胞、血管内皮细胞分化。高分子材料海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、羟こ基淀粉生物相容性良好，可作为稳定剂制备外用药物制剂，已在 临床上广泛应用，如重组人干扰素a 2b凝胶、重组人干扰素a 2b喷雾剂、重组人表皮生长因子外用溶液、重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶等。本专利技术将上述高分子材料用于上述脐带、胎盘或羊膜间充质干细胞的稳定剂，可以保持间充质干细胞在有效期内的细胞活率。优选地，上述干细胞制剂中所述间充质干细胞的含量为每毫升含O. 4X IO6 2.5 X IO7个细胞。 优选地，上述干细胞制剂还包含细胞防冻剂和保湿剂。所述细胞防冻剂优选DMS0，所述保湿剂优选丙ニ醇或丙三醇。本专利技术的另ー个目的在于提供ー种上述干细胞凝胶制剂的制备方法，采用如下方案步骤I :用细胞培养基将所述脐带、胎盘或羊膜间充质干细胞制成细胞悬液；步骤2 :将经过无菌处理的高分子稳定剂加入细胞培养基中制成凝胶溶液；步骤3 :将步骤2制得的凝胶溶液加入步骤I制得的细胞悬液中制得干细胞凝胶制剂。作为优选，步骤I所得细胞悬液中所述间充质干细胞的含量为每毫升含I.2X IO6 7· 5X IO7 个细胞。作为优选，步骤I和步骤2中所述细胞培养基为无血清的DMEM或DF12培养基。更优选地，步骤2所述细胞培养基还包含细胞防冻剂和保湿剂；所述细胞防冻剂优选为DMS0，所述保湿剂优选为丙ニ醇或丙三醇。作为优选，步骤3所述凝胶溶液与细胞悬液的体积比为2 I优选地，上述方案的具体操作步骤如下(I)细胞悬液的制备从脐带、胎盘或羊膜分离、纯化所述间充质干细胞，使用含10%胎牛血清的DMEM或DF12培养基(完全培养基)常规培养，待细胞融合度达90 %左右时，用胰蛋白酶消化，使用上述完全培养基进行中止，离心收集细胞，再用无血清DMEM或DF12培养基悬浮细胞沉淀，调整细胞悬液中所述间充质干细胞的含量，为每毫升细胞悬液含I. 2 X IO6 7. 5 X IO7个所述间充质干细胞；(2)凝胶制备称取I IOg海藻酸钠，于121°C高压灭菌15分钟后加入到含10%DMS0、5%丙ニ醇的IOOml无血清DMEM或DF12培养基中，制成均一的海藻酸钠凝胶溶液；(3)干细胞制剂的配制将上述凝胶制剂逐滴添加到上述细胞悬液中，边添加，边进行混合，所述凝胶制剂与细胞悬液的体积比为2 I ;混合均匀后，分装到预充注射器中，放到_80°C冰箱中冻存待用。使用时，将装有上述干细胞凝胶制剂的预充注射器从-80°C冰箱中取出，立即在37°C水浴中复苏，将干细胞凝胶从注射器中打出，均匀涂抹于患处。本专利技术将高分子材料凝胶添加到活细胞悬液中，可以提高细胞活率，延长细胞存活时间，达到长时间促进表皮细胞生长，缩短创ロ愈合时间，促进经久不愈的溃疡愈合等作用。本专利技术可通过调节处方和粘度，制成喷雾剂或擦剂，分装于不同形式的容器中。本专利技术所述干细胞制剂具有以下优势(I)采用高分子材料作为细胞稳定剂，保证了有效期内的细胞活率，突破了间充质干细胞用于治疗的有效性的技术瓶颈；(2)配方中不含动物源成分，不含抗生素、防腐剂；凝胶制备后采用低温保存方式，可以有充足的时间进行放行检验，满足药典法微生物检测、支原体检测的时间要求，保证了制品质量；(3)通过冷链运输，制品达到用户处，无需繁杂操作，只需37°C水浴复苏细胞后，打开，直接用于患处。附图说明图I为本专利技术干细胞制剂对兔皮肤损创面的影响。具体实施例方式为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面结合具体实施例对本专利技术作进ー步的详细说明。实施例I本专利技术所述干细胞制剂的制备细胞悬液的制备使用含10%胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37°C、5% CO2的条件下对兔脐带间充质干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90%左右吋，用O. 25%的胰蛋白酶进行消化，后用上述完全培养基中止，将所得细胞悬液进行离心，弃上清，再用无血清DMEM培养基对细胞沉淀进行悬浮，调整细胞悬液中兔脐带间充质干细胞的含量，为每毫升细胞悬液含1.5X107个兔脐带间充质干细胞，配成均一细胞悬液待用；凝胶制备称取IOg海藻酸钠，121°C高压灭菌15分钟后加入到含10% DMS0,5%丙ニ醇的IOOml无血清培养基中，配制均一的海藻酸钠凝胶溶液；干细胞制剂的制备将上述配好的凝胶制剂逐滴添加到细胞悬液中，所述凝胶溶液与细胞悬液的体积比为2本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.ー种用于创面修复的干细胞制剂，包含脐带、胎盘或羊膜间充质干细胞以及高分子稳定剂，所述高分子稳定剂选自海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、羟こ基淀粉。2.如权利要求I所述的干细胞制剂，其中所述间充质干细胞的含量为每毫升含O.4X IO6 2. 5X IO7 个细胞。3.如权利要求I所述的干细胞制剂，其特征在于，还包含细胞防冻剂和保湿剂。4.如权利要求3所述的干细胞制剂，其特征在于，所述细胞防冻剂为DMSO，所述保湿剂为丙ニ醇或丙三醇。5.一种如权利要求I所述干细胞凝胶制剂的制备方法，包括以下步骤 步骤I :用细胞培养基将所述脐带、胎盘或羊膜间充质干细胞制成细胞悬液； 步骤2 :将经过无菌处理的高分子稳定剂加入细胞培养基中制成凝...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩忠朝，耿洁，梁璐，
申请(专利权)人：北京汉氏联合干细胞研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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