一种铅离子检测试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术一种铅离子检测试纸条及其制备方法，特点是该试纸条由条形底板和在条形底板上依次搭接的样品垫、涂覆特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针的玻璃纤维结合垫、特定包被的硝酸纤维膜和吸水垫组成，硝酸纤维膜上有质控线C线和检测线T线，俘获DNA的碱基与特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针表面的条形码DNA的碱基之间可形成配对，制备方法包括将依次制备的样品垫、涂覆特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针的玻璃纤维结合垫、特定包被的硝酸纤维膜和吸水垫搭接成型，并粘贴于底板上，裁成3～5mm宽的细条，即得到成品，优点是该试纸条可以高灵敏度、高选择性地检测样品中的铅离子。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及重金属离子检测
，尤其是涉及。
技术介绍
铅(Pb)，是重金属之一，在生物体内和环境中残留时间长，对人体神经系统有严重 损害，对人体健康产生严重威胁。自然界中的铅主要以离子形式(Pb2+)存在，故实现对铅离子的准确、灵敏、快速的现场检测非常重要。目前检测铅离子的方法主要有紫外一可见分光光度法、原子发射光谱法、ICP-MS法、原子吸收光谱法、电化学法、离子色谱法、毛细管电泳法、重金属快速测定仪法、试纸条法等。紫外一可见分光光度法选择性差，检出限高；原子发射光谱法、ICP-MS法、原子吸收光谱法、电化学法、离子色谱法、毛细管电泳法，准确度和灵敏度高，但均需使用特定的仪器，价格昂贵，操作繁琐，且要求检测人员具备一定的专业知识，分析成本高，无法应用于现场检测，难以普及；重金属快速测定仪法可应用于现场检测，但灵敏度不高、选择性差，样品预处理复杂。与上述方法相比，试纸条法以其快速、简便而在现场检测中别具优势，但基于传统螯合显色剂的试纸条，选择性差，灵敏度低。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种基于纳米金(AuNPs)、脱氧核酶(DNAzyme)和条形码DNA的灵敏度高、选择性好且成本低的铅离子检测试纸条及其制备方法。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为一种铅离子检测试纸条，所述的试纸条由条形底板和在条形底板上依次搭接的样品垫、涂覆特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针的玻璃纤维结合垫、特定包被的硝酸纤维膜和吸水垫组成，所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针在脱氧核酶的一端结合有生物素，其另一端结合有纳米金，在纳米金表面结合有若干条条形码DNA，在所述的硝酸纤维膜上，用链霉亲合素包被直线式质控线C线，用生物素化的俘获DNA和链霉亲合素结合的复合物包被直线式检测线T线，所述的生物素化的俘获DNA的碱基与所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针表面的条形码DNA的碱基之间互补配对，所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针的结构为 is^'^MjyuyyyyyyyyyykJt 条) IAnNPs IIS 夕 AAAAAAAAAAAAAAACACTATtAGGAAGAGATCn'Ql3'Ηο ι GTGATA T CT TCTCTACAG T A C A TG C GC1 GcS C G，所述的生物素化的俘获DNA的结构为biotin-5’ -TTTTTTTTTTTTTTT-3’，所述的纳米金的直径为13 30 nm。所述的样品垫为经O. 01 O. 05 mol/L Tris-HCl缓冲液浸泡处理的玻璃纤维纸，其中Tris-HCl缓冲液含蔗糖的质量百分比为I 10%，pH值为5. O 8. O。所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针溶液在所述的玻璃纤维结合垫上的喷涂量为2. O 10. O μ L/cm2，所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针溶液为 2 μ L 的 100 μ M序列为 biotin-3’-ACTGTAGAGAAGG rA TATCACAAAAAAAAAAAAAAA-5' -SH的 DNA 与 2 μ L 的 100 μ M 序列为 5’ -TGACATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTG-3’ 的 D NA 混 合均匀得脱氧核酶结合物，然后将8 μ L的100 μ M序列为HS-5’ -ΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑ-3’条形码DNA与脱氧核酶结合物混合均匀后，将4 mL的50 nM纳米金溶液加入上述混合物中，温育16 h后，离心弃去上清液，沉淀重新溶解于50 μ L含100 mM NaCl和8%蔗糖的25 mMTris-HCl缓冲液中所得。所述的链霉亲合素包被用量为I. O 3. O μ g/cm。所述的生物素化的俘获DNA和链霉亲合素结合的复合物包被直线式检测线T线制备过程如下108 UL的100 μ M的生物素化的俘获DNA溶液与50 μ L的2 mg/mL的链霉亲合素溶液混合均匀，室温下温育2 h后，12000 rpm下离心10 min,弃去上清液,用54 μ L的25 mM的PBS缓冲液重新溶解后，以I 3 μ L/cm喷涂于硝酸纤维膜形成检测线T线。一种铅离子检测试纸条的制备方法，包括以下步骤 (1)样品垫的制备 将玻璃纤维纸用O. 01 O. 05 mol/L Tris-HCl缓冲液浸泡润湿后，在20°C 37°C下干燥4 12小时即得到样品垫，其中Tris-HCl缓冲液含蔗糖的质量百分比为I 10%，pH值为5. O 8. O ; (2)涂覆特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针的玻璃纤维结合垫的制备 将玻璃纤维纸用O. 01 O. 05 mol/L Tris-HCl缓冲液浸泡润湿后，在20°C 37°C下干燥4 12小时后，在每平方厘米的玻璃纤维纸上均匀喷涂2. O 10. O μ L的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针溶液，在20°C 37°C下干燥2 5小时后，即得到涂覆特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针的玻璃纤维结合垫，所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针在脱氧核酶的一端结合有生物素，其另一端结合有纳米金，在纳米金表面结合有若干条条形码DNA，所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针的结构为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种铅离子检测试纸条，其特征在于所述的试纸条由条形底板和在条形底板上依次搭接的样品垫、涂覆特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针的玻璃纤维结合垫、特定包被的硝酸纤维膜和吸水垫组成，所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针在脱氧核酶的一端结合有生物素，其另一端结合有纳米金，在纳米金表面结合有若干条条形码DNA，在所述的硝酸纤维膜上，用链霉亲合素包被直线式质控线C线，用生物素化的俘获DNA和链霉亲合素结合的复合物包被直线式检测线T线，所述的生物素化的俘获DNA的碱基与所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针表面的条形码DNA的碱基之间互补配对，所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针的结构为2.根据权利要求I所述的一种铅离子检测试纸条，其特征在于所述的样品垫为经O.01 O. 05 mo I/L Tris-HCl缓冲液浸泡处理的玻璃纤维纸，其中Tris-HCl缓冲液含蔗糖的质量百分比为I 10%，pH值为5. O 8. O。3.根据权利要求I所述的一种铅离子检测试纸条，其特征在于所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针溶液在所述的玻璃纤维结合垫上的喷涂量为2. O 10 UL/2cm ο4.根据权利要求3所述的一种铅离子检测试纸条，其特征在于所述的特异性条形码DNA-纳米金-脱氧核酶探针溶液为2 μ L的100 μ M序列为biotin-3’ -ACTGTAGAGAAGGrA TATCACAAAAAAAAAAAAAAA-5’ -SH 的 DNA 与 2 μ L 的 100 μ M 序列为 5’ -TGACATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTG-3’的DNA混合均匀得脱氧核酶结合物，然后将8 μ L的100 μ M序列为HS-5’ -ΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑΑ-3’条形码DNA与脱氧核酶结合物混合均匀后，将4 mL的50nM纳米金溶液加入上述混合物中，温育16 h后，离心弃去上清液，沉淀重新溶解于50 μ L含100 mM NaCl和8%蔗糖的25 mM Tris-HCl缓冲液中所得。5.根据权利要求I所述的一种铅离子检测试纸条，其特征在于所述的生物素化的俘获DNA和链霉亲合素结合的复合物包被直线式检测线T线制备过程如下108 μ L的100μ M的生物素化的俘获DNA溶液与50 μ L的2 mg/mL的链霉亲合素溶液混合均匀，室温下温育2 h后，12000 rpm下离心10 min,弃去上清液,用54 μ L的25 mM的PBS缓冲液重新溶解后，以I 3 μ L/cm喷涂于硝酸纤维膜形成检测线T线。6.根据权利要求I所述的一种铅离子检测试纸条，其特征在于所述的链霉亲合素包被用量为I. O 3. O yg/cm。7.一种根据权利要求I所述的铅离子检测试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (I)样品垫的制备将玻璃纤维纸用O. Ol O. 05 mo I/L Tris-HCl缓冲液浸泡润湿后，在20°C 37°C下干燥4 12小时即得到样品垫，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王泽波，郭智勇，段静，马青青，郝婷婷，杜书平，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：