本发明专利技术公开了利用FecB基因预测洼地绵羊繁殖力的方法，是检测待测洼地绵羊基因组中的FecB基因的第746位核苷酸，从而确定洼地绵羊的基因型，然后通过基因型确定洼地绵羊繁殖力；如果洼地绵羊基因组中的FecB基因的第746位核苷酸为A时，其纯合体的基因型为++，洼地绵羊基因组中的FecB基因的第746位核苷酸为G时，其纯合体的基因型为BB；杂合体基因型为B+；BB基因型的繁殖力高于B+基因型，B+基因型的繁殖力高于++型。本发明专利技术利用PCR-SSCP和PCR-RFLP遗传标记多态性确定洼地绵羊的繁殖力，可以迅速、简便的检测洼地绵羊的繁殖力，为洼地绵羊的育种提供了一个准确简便的检测其繁殖力的方法。
【技术实现步骤摘要】
技术介绍
FecB基因1985年在澳大利亚的Booroola Merino绵羊品种中发现,是被形容为影响绵羊排卵率和繁殖力的第一个主效基因。Booroola突变，即BMPR-IB位点编码区的点突变，已经通过杂交进入其他的绵羊品种中，并且在自然状态下也发现了除Booroola Merino 绵羊以外的其他的多产的绵羊品种。FecB基因定位在绵羊6号染色体6q23 q31的狭窄区域内，位于骨桥蛋白和表皮生长因子之间。FecB位点的基因型分配，开始是基于检测排卵率和产盖记录上，后来用于遗传标记与Booroola基因的联系,如今可以通过在BMPR-IB位点的个体的分子基因分型来得到。ー个FecB拷贝增加排卵数I. 3枚-I. 6枚，两个FecB拷贝增加排卵数2. 7枚-3. 0枚，携带ー个FecB拷贝的母羊繁殖力增加0. 9只-I. 2只，携带两个FecB拷贝的母羊繁殖力増加I. I只-I. 7只(储明星，狄冉，叶素成，方丽，刘忠慧，彭志兰，张跟喜，贾丽华，孙洁，冯涛.绵羊多胎主效基因FecB分子检测方法的建立与应用[J].农业生物技术学报，2009，17 (I) :52-58)。洼地绵羊(简称洼羊)，是分布于鲁北盐碱洼地滨海地区的优良地方绵羊品种。经考证，洼地绵羊是从明朝时期经400多年驯化、适应、选育，在滨海地区逐渐形成的独具特色的优良地方品种。洼地绵羊一年四季均可发情，春秋两季尤为明显。头胎产羔率与小尾寒羊无明显差异，属于多胎绵羊品种。洼地绵羊具有耐粗饲，生长较快的特点。从体型看，洼地绵羊无角，四肢短而结实，方尾，而且性格温顺不好斗，使得洼地绵羊屠宰率高、生长发育快。经过长期选育，洼地绵羊适应了当地贫瘠的草场，常年放牧锻炼了羊群体质。尤其当地滨海湿地盐碱严重，对羊蹄的腐蚀性很强，其他品种羊很难适应。而洼地羊很好适应了当地环境，具有抗腐蹄能力。Montgomery等(1993)首次发现FecB基因与微卫星标记OarAElOl和0arHH55紧密连锁，距离分别为13cM和20cM，而此两个基因又与定位在人染色体HSA4qll ql2上的分泌型磷酸蛋白I基因(SSPl)的ー个RFLP标记连锁。随后该研究组采用连锁分析法，对Booroola羊半同胞家系和17个全同胞家系进行了研究，发现血小板生长因子受体a基因(platelet-derived growth factor receptor-alpha gene, PDGFRA)与 a SI 酪蛋白基因(alpha sl-casein gene, CSN1S1)及微卫星标记BM143和0arHH55连锁，遗传距离分别为12cM、29cM、33cM。Lord等用微卫星OarAElOl和BM1329作标记来研究FecB基因时，发现FecB基因存在于OarAElOl位点的97bp等位基因以及BM1329位点的162bp等位基因上，因此FecB基因被进ー步定位于6号染色体的BM1329和OarAElOl之间IOcM连锁群中(Montgomery G ff, et al. Nat Genet,1993,4(4) :410-414)。Montgomory进ー步的研究发现，FecB基因与EGF(表皮生长因子)基因连锁，其距离为26cM,而EGF定位于人染色体的4q25上,这是迈向FecB突变位置克隆的重要ー步(Montgomery G W, et al. Genomics, 1994, 22 (I) :148-153)。Wilson 等(2001)在前人的研究基础上，将FecB基因进ー步定位在羊6号染色体6q23 q31，与人染色体4q21 q25同线性。另有报道，将绵羊6号染色体上的基因定位在猪的8号染色体上，同时在8号染色体发现了一个提高排卵率的位点(Wilson T, et al. Biol Reprod, 2001,64 (4) :1225-1235)。Wilson等、Souza等、Mulsant等(2001)几乎同时发现，与FecB基因所在的绵羊6号染色体区域同线性的人4号染色体q22 q23上的骨形态发生蛋白受体IB基因(BMPR-IB)与Booroola Merino羊的排卵率相关联。 Eli sha Go otwine 等(2008)通过对 FecB 位点的++ 和 B+ 基因型繁殖力的调查，结果显示，B位点在繁殖力上具有乘法效应，因为B+基因型的繁殖力显著高于++基因型的繁通力(P < 0. O5) (Elisha Gootwine, Shay Reicher, Alexander Rozov.Proliiicacy and lamb survival at birtn in Awassi and Assaf sheep carrying theFecB (Booroola)mutation. [J]. Animal Reproduction Science,2008，108 (2) :402-411)。A. K. Mishra等(2009)通过对51只Garole和Malpura的杂交绵羊的繁埴カ分祈，结果显示，累计一生的产仔数(CLS)，累计羔羊的断奶数(CWL)和以及累计母羊的繁殖效率(CEPE)在杂交母羊上，B+基因型相対的比++基因型的母羊要高(A.K.Mishra，A. L. Arora, S. Kumar, L. l.L.Prince. Studies on effect of Booroola(FecB) genotype onlifetime ewes productivity efficiency, litter size and number of weaned lambsin Garole XMalpura sheep[J]. Animal Reproduction Science,2009,113(3) :293-298)；S. Kumar等(2008)通过PCR-RFLP的实验方法，在Kendrapada绵羊中发现FecB突变,在46个Kendrapada绵羊个体中，26个BB基因型，15个B+基因型，5个++基因型，B的基因型频率约为0. 73，结果表明，尽管FecB突变频率很高，但该基因并不像在Garole绵羊中所报道的那样，在群体中是不固定的(S. Kumar, A. K. Mishra, A. P. Kolte, S. K. Dash,S. A. Karim. Screening for Booroola(FecB) and Galway (FecXG) mutations in Indiansheep[J]. Small Ruminant Research,2008,80(4) :57-61)。王根林等(2003)年利用限制性酶切片段多态性PCR技术，检测湖羊、小尾寒羊和新疆细毛羊的DNA样本，发现湖羊和小尾寒羊中存在FecB多胎基因，而新疆细毛羊均不携带Booroola基因(王根林,毛鑫智,George H Davis,赵宗胜，张利军，曾永庆 DNA分析发现我国湖羊和小尾寒羊存在B00r00la(FecB)多胎基因[J].南京农业大学学报，2003，26 (I)104-106)。张利平(2本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测洼地绵羊繁殖力的方法,是检测待测洼地绵羊基因组中的FecB基因编码区的746bp处是否存在ー个A — G的突变，以确定洼地绵羊的基因型，然后通过基因型确定洼地绵羊繁殖力；所述FecB基因的核苷酸序列GENBANK ACCESSION NUMBER为AF357007的第156bp至3255bp位核苷酸； 所述确定洼地绵羊的基因型的方法为如果洼地绵羊基因组中的FecB基因的第746位核苷酸为A时，其纯合体的基因型为++ ;洼地绵羊基因组中的FecB基因的第746位核苷酸为G时，其纯合体的基因型为BB ;它们的杂合体基因型为B+ ； 通过基因型确定洼地绵羊繁殖力的方法为所述BB基因型洼地绵羊的繁殖力高于B+基因型洼地绵羊，B+基因型洼地绵羊的繁殖力高于++型洼地绵羊。2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述检测洼地绵羊基因组中的FecB基因的第746位核苷酸为A还是突变G的方法是利用PCR方法扩增洼地绵羊基因组中的核苷酸序列GENBANK ACCESSION NUMBER为AF357007的第626bp至812位核苷酸的片...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙伟，李达，郭玉泉，陈玲，孙炜，周洪，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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