本发明专利技术公开了一种交替单胞菌及其在抑制赤潮藻生长中的应用。本发明专利技术提供的交替单胞菌(Alteromonas?sp.)18#，其保藏号为CGMCC?NO.5804。本发明专利技术还提供了一种制备上述交替单胞菌(Alteromonas?sp.)18#CGMCC?NO.5804胞外提取物的方法。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术发现了一种交替单胞菌(Alteromonas?sp.)18#，该细菌及其胞外产物具有抑藻的功能，可以用来抑制赤潮。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种交替单胞菌及其在抑制赤潮藻生长中的应用。
技术介绍
赤潮是一种严重的全球性海洋自然灾害，近年来赤潮发生次数增多、发生区域扩大、危害日益加剧。对赤潮(或赤潮藻)的发生进行有效防控是保护海洋环境的首要前提。 以往的研究中虽已开发出一些赤潮的控制技术，如物理方法、化学方法和一些生物治理方法，但这些方法都各自存在一定的缺陷，治理水华的效果不甚理想。例如物理方法中的黄泥浆絮凝法需要较大的剂量才能起到抑制的效果，这在一定程度上增加了操作的难度和成本的投入；一些化学方法如杀藻剂，在杀灭藻类的同时，也给其他生物带来了直接或间接的危害，不能体现环境友好型特性；一些生物学方法如投放摄食藻类的大型生物(鱼类)，也存在打破食物网结构，破坏种群稳定的生态风险。海洋环境的复杂性造就了其丰富的微生物多样性，其独特的遗传特性和特殊的适应机制，成为基因库和生物活性物质的重要来源。海洋微生物通过微食物环在海洋生态系统的物质循环和能量流动中起着极其重要的作用，并同藻类存在着错综复杂的关系。值得一提的是，细菌、放线菌、病毒等各种微生物可以通过直接或间接的作用专一性地抑制藻类的生长甚至裂解藻细胞，因此微生物是调节赤潮生消的重要因子之一。基于数量庞大、分布广泛、多样性丰富的海洋微生物及其重要作用，以微食物环为核心，探究有效调控赤潮生消的重要微生物因子，充分利用其与赤潮生物的互作特点与规律，开发和利用源自赤潮频发海域的特殊功效微生物并以宏基因组技术获得海洋环保功能菌与工程菌，进行赤潮的有效防治，将可能成为解决赤潮灾害这一复杂而严峻的海洋问题的金钥匙。近年来,溶藻细菌(algicidal bacteria)的发现给赤潮的治理带来了新的曙光。 它作为水生生态系统生物种群结构和功能的重要组成部分，对维持藻类生物量平衡具有非常重要的作用。不少国外研究者认为赤潮的突然消亡可能与溶藻细菌的感染有关。溶藻细菌作为水华防治的可能微生物，已引起越来越多的关注。多数溶藻细菌能够分泌细胞外物质，对宿主藻类起抑制或杀灭作用。因此，目前将赤潮的防治方法转向微生物治理，且这一类方法已日益得到关注和认可。在这一领域中已筛选和培养了多种杀藻、溶藻的微生物，包括放线菌、变形杆菌、假单胞菌、粘细菌等。以往的研究中对溶藻细菌的筛选是没有严格区分赤潮发生期和非发生期， 使得筛选的菌株缺乏针对性。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一株交替单胞菌(Alteromonas sp. ) 18#。本专利技术提供的交替单胞菌(Alteromonassp. ) 18#，其保藏号为CGMCC NO. 5804。本专利技术的另一个目的是提供一种制备上述交替单胞菌(Alteromonassp.) 18#CGMCC NO. 5804胞外提取物的方法。本专利技术提供的方法包括如下步骤I)发酵交替单胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804,离心收集上清液；2)用乙酸乙酯萃取所述上清液，收集有机相，即得到胞外提取物。上述方法中，步骤I)中，所述发酵的温度为30°C，所述发酵的时间为24_36h ;所述离心的转速为8000r/min,所述离心的时间为20min,所述离心半径为13. 5cm ；步骤2)中，所述上清液和乙酸乙酯萃取体积比为I : 2，所述萃取的时间为 2h-3h。上述方法中，所述发酵的温度为30°C，所述发酵的时间为24小时-36小时，所述发酵的培养基为2216E海水液体培养基(配方蛋白胨5. 0g，酵母膏I. 0g，磷酸铁O. Olg,陈海水 1000mL,iI pH 至 7. 8)；上述方法中，在步骤2)中，在所述收集有机相后还依次包括去除所述有机相中的乙酸乙酯和溶解的步骤；上述去除所述有机相中的乙酸乙酯具体为旋转蒸发所述有机相，收集产物I ;上述溶解具体为用甲醇溶解所述产物I ;在所述步骤I)和步骤2)之间还包括过滤所述上清液的步骤；上述过滤具体采用的滤膜孔径为O. 22 μ m。由上述方法制备的所述交替单胞菌(Alteromonas sp. ) 18#CGMCC NO. 5804胞外提取物也是本专利技术保护的范围。上述的交替单胞菌(Alteromonas sp. ) 18#CGMCC NO. 5804或上述的胞外提取物在防治赤潮中的应用也是本专利技术保护的范围。上述应用中，所述防治赤潮通过抑制赤潮藻生长实现。上述抑制赤潮藻生长体现在如下I) -4)中4种或者其中任意一种I)降低赤潮藻密度；2)降低赤潮藻的叶绿素含量；3)降低赤潮藻的光合效率；4)改变了赤潮藻中蛋白表达谱。上述蛋白具体为功能蛋白上述应用为向赤潮藻的生长体系中加入上述的交替单胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804或上述的胞外提取物，以抑制赤潮藻生长；所述赤潮藻具体为亚历山大藻。在本专利技术的实施例中，具体抑制赤潮藻生长的方法为向赤潮藻的生长体系中加入上述的交替单胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804的胞外提取物，以抑制赤潮藻生长。上述赤潮藻的生长体系为人工培育体系；上述人工培育体系为将赤潮藻在培养液中培养，得到人工培育体系；上述人工培育体系中的培养液为f/2培养液；上述胞外提取物在所述人工培育体系中的终浓度具体为10ppb-100ppb。上述方法中，所述赤潮藻为亚历山大藻。本专利技术的第三个目的是提供一种赤潮藻抑制剂。本专利技术提供的赤潮藻抑制剂，其活性成分为上述的交替单胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804或其胞外产物；所述赤潮藻具体为亚历山大藻。上述菌株18#为Y -变形杆菌纲(Gammaproeobacterium),交替单胞菌目 (Alteromonadales),交替单胞菌科(Alteromonadaceae),交替单胞菌属(Alteromonas)菌株，已于2012年2月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称 CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC NO. 5804，其分类命名为交替单胞菌(Alteromonas sp.)。本专利技术的实验证明，本专利技术发现了一种交替单胞菌(Alteromonas sp.)18#,该细菌及其胞外产物具有抑藻的功能，可以用来抑制赤潮；该细菌其胞外产物具体具有如下优点1)筛选的抑藻细菌来自赤潮发生的海域，利于重新投放到自然环境中使用；2)胞外产物的杀藻效果明显且该物质可规模化发酵制备，具有很强的可操作性；3)藻类抑制赤潮的方法，遵循了生物“生生相克”的原理，不会产生二次污染，是一种环境友好型方法。附图说明图I 为弯角藻(Eucampia zoodiacus Ehrenberg)的形态特征图2为编号为18#细菌对藻类抑制的结果其中，*表不差异显著(P < O. 05) 表不差异极显著(P < O. 01)图3为编号为18#细菌16S_rRNA的编码基因的PCR电泳图谱图4为胞外产物的提取示意5为6天时不同剂量胞外产物对藻细胞的生存状态的影响图6为不同剂量胞外产物对藻密度影响的效果曲线图7为胞外产物对亚历山大藻叶绿素含量的影响图8为胞外产物对亚历山本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡中华，周进，詹五根，陈璐，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，
类型：发明
国别省市：
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