抑制CYP3A4的shRNA表达质粒及构建和应用制造技术

本发明专利技术提供抑制CYP3A4的shRNA表达质粒，根据干扰片段设计原则和CYP3A4的序列，通过Blast软件排除与基因组其他基因具有同源性的序列，获得三个符合要求的shRNA模板序列，将合成的上述shRNA模板分别克隆，通过氨苄抗性筛选和测序，成功获得三种shRNA表达质粒。在不同的细胞模型中，shRNA单独或混合表达质粒均能够较好地抑制CYP3A4mRNA表达(55％)和蛋白表达(50％)，且无脱靶效应，具有良好的专属性。因此，本发明专利技术提供的三种shRNA表达质粒可以作为CYP3A4的特异性抑制剂，用于CYP3A4底物和诱导剂的筛选和确证。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及抑制药物代谢酶CYP3A4表达的三种shRNA表达质粒及构建，以及三种shRNA表达质粒单独或混合使用时对CYP3A4基因和蛋白抑制作用，能够有效地降低CYP3A4的表达，用于新药研发中的成药性评价，以提高药物研发的成功率；用于临床使用药物的相互作用的预测，以减少或避免不良反应。
技术介绍
RNA干扰(RNA interference, RNAi)现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制，是指内源性或外源性与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)在细胞内特异地降解该mRNA,从而致使特异性的基因有效封闭的过程，是一种序列特异性的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS)。RNAi技术是利用RNAi原理，在体外利用化学或酶促合成siRNA，也可构建在体内合成siRNA的质粒或病毒表达载体，然后利用传统微注射磷酸钙法、电穿孔转染法、脂质体介导转染等方法转染细胞从而致使靶基因沉默的技术。RNA干扰有很多方法①化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曾苏，徐思云，余露山，蒋惠娣，周慧，胡海红，王鹭，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：