ＴＣＲ复合物免疫治疗剂制造技术

提供特异性结合ＴＣＲ复合物或其组分，例如ＴＣＲα、ＴＣＲβ或ＣＤ３ε的单链融合蛋白，及其组合物和使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及免疫学活性的重组结合蛋白，具体涉及TCR复合物或其组分，例如⑶3 的特异性单链融合蛋白。本专利技术还涉及治疗自身免疫疾病和其它病症或疾病(例如，移植物排斥)的组合物和方法。相关领域描述用抗CD3单克隆抗体使TCR复合物靶向人T细胞业已用于治疗器官同种异体移植物排斥。人CD3的特异性小鼠单克隆抗体，例如0KT3(Kung等(1979) Science 206 347-9)是第一代此类治疗药物。虽然0KT3具有很强的免疫抑制能力，但因它有免疫原性和丝裂原性相关的严重副作用阻碍了它的临床应用(Chatenoud(2003)Nature Reviews 3 123-132)。它可诱导抗球蛋白应答，从而促进了它本身的快速被清除和中和(Chatenoud 等· (1982)Eur. J. Immunol. 137 :830_8)。此外，0KT3体外可诱导T-细胞增殖和产生细胞因子，体内可导致细胞因子大规模释放(Hirsch等.(1989) J. Immunol 142 =737-43,1989) 0 细胞因子释放(也称为“细胞因子风暴”)进而导致“流感样”综合征，其特征有发热、寒颤、 头痛、恶心、呕吐、腹泻、呼吸窘迫、脓毒性脑膜炎和高血压(Chatenoud，2003)。此类严重副作用限制了 0KT3更广泛地应用于移植以及扩展至其它临床领域，例如自身免疫(疾病)的应用(同上)。为减少第一代抗⑶3单克隆抗体的副作用，开发了第二代遗传工程改造的抗⑶3 单克隆抗体，这种抗体不仅将鼠抗CD3单克隆抗体的互补决定区(CDR)嫁接入人IgG序列， 而且在 Fc 中引入了非-FcR-结合突变(Cole 等.(1999)Transplantation 68 563 ；Cole 等.(1997) J. Immunol. 159 3613)。这种鼠单克隆抗体的人源化导致其免疫原性降低和mAb 半衰期改善(同上)。此外，非-FcR-结合性mAb降低了诱导体内细胞因子释放和急毒性的可能性(Chatenoud等· (1989) N. Engl. J. Med. 320 1420)。然而，即使细胞因子释放水平降低但仍是剂量限制的，在非常低的药物剂量(微生物/患者)下仍有毒性(Plevy等.， (2007)Gastroenterology 133 1414-1422)。改进抗CD3/TCR抗体的治疗有几个难点。例如，抗CD3单克隆抗体介导免疫抑制的机制复杂，尚未完全了解。据信，此类抗体通过四种机制起作用包被细胞(cellcoating)、消耗细胞(cell cbpletion)、下调TCR和细胞信号传导，后二者是主要机制 (Chatenoud(2003)Nature Reviews :123_132)。还认为，细胞因子风暴的诱导和体内T 细胞激活是CD3/TCR-抗体治疗效果所必需(Carpenter等· (2000) J. Immunology 165 6205-13)。最后，据报道在体外是“非激活性”的第二代抗CD3单克隆抗体在体内仍能诱导细胞因子风暴。目前正检验许多抗CD3指导的抗体在自身免疫疾病、炎性疾病和移植患者中的临床应用。这些抗体包括h0KT3 y 1 (Ala-Ala) (MG公司(Macrogenics))、维喜单抗 (visilizumab) (Nuvion ，PDL)、TRX_4(托雷克斯公司(Tolerx))和 NI-0401 (诺伏免疫公司(Novlmmime))。然而，用这些抗体各自治疗的患者经历细胞因子释放相关的不利事件 (中等到严重)，有时在患者群体中常见到病毒重激活。鉴于细胞因子释放相关不良事件涉及目前的T细胞抗体和其它生物学疗剂，不断需要备选疗剂。本专利技术满足此类需求并进一步提供其它相关优点。专利技术简述本专利技术提供结合TCR复合物或其组分的融合蛋白、包含此类融合蛋白的组合物和单位剂型、编码此类融合蛋白的多核苷酸和表达载体、减少实体器官移植物排斥或治疗自身免疫疾病的方法和检测T细胞活化的方法。本专利技术一方面提供一种融合蛋白，其从氨基末端到羧基末端包含以下、基本上由以下组成或由以下组成(a)特异性结合TCR复合物或其组分的结合域，(b)接头多肽，(c) 任选的免疫球蛋白Ch2区多肽，其包含(i) 297位天冬酰胺的氨基酸取代；(ii) 234-238位的一个或多个氨基酸取代或缺失；(iii) 253、310、318、320、322或331位的至少一个氨基酸取代或缺失；(iv)297位天冬酰胺的氨基酸取代和234-238位的一个或多个取代或缺失； (ν) 297位天冬酰胺的氨基酸取代和253、310、318、320、322或331位的至少一个取代或缺失；(vi) 234-238位的一个或多个氨基酸取代或缺失，和253、310、318、320、322或331位的至少一个氨基酸取代或缺失；或(vi) 297位天冬酰胺的氨基酸取代，234-238位的一个或多个氨基酸取代或缺失，和253、310、318、320、322或331位的至少一个氨基酸取代或缺失，和 (d)免疫球蛋白Ch3区多肽；其中该融合蛋白不诱导细胞因子风暴，或诱导最少的可检测细胞因子释放，该免疫球蛋白Ch2区的氨基酸残基根据EU编号系统编号。其它融合蛋白见权利要求2-20和本文所述。本专利技术另一方面提供包含本文提供的融合蛋白和药学上可接受的运载体、稀释剂或赋形剂的组合物。本专利技术的另一方面提供包含上述药物组合物的单位剂型。本专利技术的另一方面提供编码本文提供的融合蛋白的多核苷酸。本专利技术的另一方面提供一种表达载体，其包含编码本文提供的融合蛋白的多核 苷酸，所述多核苷酸操作性连接于表达调控序列。本专利技术另一方面提供降低实体器官移植物排斥的方法，包括给予实体器官移植物受者有效量的本文提供的融合蛋白。本专利技术另一方面提供治疗自身免疫疾病(例如，炎性肠病，包括克罗恩病和溃疡性结肠炎、糖尿病、哮喘和关节炎)的方法，包括给予有此需要的患者有效量的本文提供的融合蛋白。本专利技术另一方面提供检测蛋白质诱导细胞因子释放的方法，所述蛋白质包含特异性结合TCR复合物或其组分的结合域，该方法包括(a)提供丝裂原_致敏的T细胞，(b)用包含特异性结合TCR复合物或其组分的结合域的蛋白质(例如，融合蛋白和抗体)处理步骤(a)的致敏T细胞，和(c)检测在步骤(b)中处理的致敏T细胞的细胞因子释放。本专利技术另一方面提供检测蛋白质诱导T细胞活化的方法，所述蛋白质包含特异性结合TCR复合物或其组分的结合域，该方法包括(a)提供丝裂原-致敏的T细胞，(b)用包含特异性结合TCR复合物或其组分的结合域的蛋白质(例如，融合蛋白和抗体)处理步骤 (a)的致敏T细胞，和(c)检测在步骤(b)中处理的致敏T细胞的活化。 附图简述附图说明图1显示用各种抗体和小调节性免疫药物(SMIP )产品处理PHA致敏人T细胞所产生的活化T细胞百分数。“No Rx”指未处理，用作阴性对照。图2显示在混合淋巴细胞反应试验中用各种抗体和SMIP融合蛋白处理应答细胞所产生的活化T细胞百分数。“MLR”指不作任何额外处理的混合淋巴细胞反应。“仅有应答细胞”指仅存在应答细胞的反应。“IgG2a”指用10yg/ml I本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种单链融合蛋白，其从氨基末端到羧基末端包含：（ａ）特异性结合ＴＣＲ复合物或其组分的结合域，（ｂ）接头多肽，（ｃ）任选的免疫球蛋白ＣＨ２区多肽，其包含：（ｉ）２９７位天冬酰胺的氨基酸取代，和２３４－２３８位的一个或多个取代或缺失，（ｉｉ）２３４－２３８位的一个或多个取代或缺失，和２５３、３１０、３１８、３２０、３２２或３３１位的至少一个取代，（ｉｉｉ）２９７位天冬酰胺的氨基酸取代，２３４－２３８位的一个或多个取代或缺失；和２５３、３１０、３１８、３２０、３２２或３３１位的至少一个取代，和（ｄ）免疫球蛋白ＣＨ３区多肽，其中该融合蛋白不诱导或诱导最小的可检测细胞因子释放，而免疫球蛋白ＣＨ２区的氨基酸残基根据ＥＵ编号系统编号。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：V·厄德高，
申请(专利权)人：新兴产品开发西雅图有限公司，
类型：发明
国别省市：US