本发明专利技术提供一种多特异性融合蛋白，其由ＣＤ８６拮抗物结合域和作为ＩＬ－１０激动剂、ＨＬＡ－Ｇ激动剂、ＨＧＦ激动剂、ＩＬ－３５激动剂、ＰＤ－１激动剂、ＢＴＬＡ激动剂、ＬＩＧＨＴ拮抗物、ＧＩＴＲＬ拮抗物或ＣＤ４０拮抗物的另一个结合域组成。所述多特异性融合蛋白还可包含分隔其它结构域的间插结构域。本发明专利技术还提供编码所述多特异性融合蛋白的多核苷酸、所述融合蛋白的组合物以及使用所述多特异性融合蛋白和组合物的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体涉及多特异性结合分子及其治疗应用领域，更具体而言，涉及由CD86 拮抗物结合域和对异源靶点如IL-10激动剂、HLA-G激动剂、HGF激动剂、IL-35激动剂、PD-I 激动剂、BTLA激动剂、LIGHT拮抗物、GITRL拮抗物或CD40拮抗物具有特异性的另一个结合域组成的融合蛋白，及其组合物和治疗应用。相关领域描述人免疫系统通常保护身体免受外来物质和病原体的损害。免疫系统保护身体的一种方式是通过产生称为T淋巴细胞或T细胞的特化细胞。T细胞和抗原呈递细胞(APC)之间的细胞间相互作用产生T细胞共刺激信号，从而引起T细胞对抗原产生应答。完整的T 细胞激活需要T细胞受体(TCR)与抗原呈递细胞上存在的抗原-MHC复合物结合以及T细胞表面上的受体CD^与抗原呈递细胞特别是树突细胞上存在的CD86和/或CD80配体结口 O⑶80 (也称为B7-1)最初描述为人B细胞相关激活抗原，随后发现其为相关T细胞分子CD^和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA4)的受体。在后来的研究中，鉴定出称为⑶86(也称为B7-0或B7-2)的CTLA4的另一个反受体。⑶86在其胞外区域与⑶80 具有约25%的序列相同性。尽管通常认为CD80和CD86在其启动和保持CD4(+)T细胞增殖的能力方面具有功能等效性(Vasilevko等(2002)DNA Cell Biol. 21 :137-49)，阻断这两种分子该活性的可溶性CTLA4 Ig融合蛋白的临床数据已显示出临床益处(Genovese等 (2005)NEJM 353 :114-1123)，一些证据表明对⑶86的特异性抑制作用可能有益。例如， ⑶86或⑶80的介入对B细胞具有不同作用。具体而言，⑶80已显示提供正常B细胞和B 细胞淋巴瘤的增殖和IgG分泌的负信号，而⑶86则增强B细胞的活性(Suvas等Q002) J. Biol. Chem. 277 :7766-7775)。还有一些证据表明，CD80介入T细胞有免疫抑制作用(Lang等(2002) J. Immunol. 168 :3786-3792 ；Taylor 等 O004)J. Immunol. 172 :34-39 ；Paust 等 (2004) PNAS 101 10398-10403)，且其可通过PD-Ll (CD274)信号传导介导对活化的APC或 T 细胞的进一步免疫抑制作用(Butte 等(2007) Immunity 27 :111-122 ；Keir (2008)Ann. Rev. Immunol. 26 :677-704)。因此，缺乏⑶80抑制作用下的⑶86抑制作用可在自身免疫和炎性疾病以及B细胞淋巴瘤的治疗中具有益处。CTLA4是免疫球蛋白超家族的1型跨膜糖蛋白，其主要表达于活化T细胞中，也有一些表达发现于⑶4+⑶25+调节T细胞(Treg)亚群中。⑶86和⑶80被认为是CTLA4仅有的内源配体。已显示CTLA4与⑶86和⑶80结合的亲和力和亲合力高于⑶观(Linsley等 (1991) J.Exp· Med. 174 :561-69 ;Linsley 等(1994) Immunity 1 :793-801)，并作为 T 细胞激活的负调节物发挥关键作用。具体而言，CTLA4与CD80/CD86的结合引起T细胞应答的下调以及T细胞稳态和外周耐受性的保持。认为这种情况是由CD^依赖性共刺激的拮抗作用和通过CTLA4胞质尾区的定向负信号传导造成的。CTLA4结构和功能的综述参见Teft等 (2006)Annu. Rev. Immunol. 24 :65-97。如上所述，有效免疫应答同时需要TCR的介入以及⑶观与⑶80和/或⑶86的结合。缺乏⑶观结合下的TCR结合导致T细胞发生凋亡或变为无反应性。此外，已显示⑶观信号传导增加T细胞细胞因子的产生。具体而言，已显示CD^刺激作用使活化T细胞中的 IL-2、TNFa、淋巴毒素、IFN γ和GM-CSF的产量增加5_50倍。此外，已显示即使在免疫抑制环孢菌素的存在下，CD^也会诱导淋巴因子和/或细胞因子基因表达(Thompson等(1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 :1333-1337)。还已显示 CD28 通过诱导上调抗凋亡 BCL-XL 促进 T 细胞存活(Alegre 等 Q001) Nature Rev. Immunol. 1 :220-228)。通过将CTLA4的可变样胞外结构域与免疫球蛋白恒定结构域融合提供CTLA4_Ig 融合蛋白来构建CTLA4的可溶性形式。已显示可溶性CTLA-4-Ig通过与⑶86和⑶80 二者结合防止CM8依赖性共刺激，并显示其抑制T细胞共刺激，对人具有有益的免疫抑制作用(Bruce 和 Boyce (2007) Ann. Pharmacother. 41 1153-1162)。目前采用 CTLA4_Ig 融合蛋白阿巴西普(abatac印t)在抗TNF α治疗应答不足的情况下治疗类风湿性关节炎。然而， 并非所有患者对CTLA4-Ig均有应答，持续应答需要频繁的给药，可能部分因为阻断CM8与 CD86/CD80的相互作用是Treg的弱诱导物，不足以在疾病环境中阻断活化效应T细胞应答。附图简要说明附图说明图1显示各种蛋白质与⑶80的结合，所述蛋白质包括阿巴西普、CTLA4-Ig(N2) (SEQ ID NO 11)和包含与ILlO融合的CTLA4胞外域的多特异性交叉受体(xc印tor)融合蛋白(SEQ ID NO 9)。图2显示CTLA4-Ig(N2) (SEQ ID NO :11)和包含与ILlO融合的CTLA4胞外域的多特异性交叉受体融合蛋白(SEQ ID NO 9)可与可溶性ILlORa(SlLlORa)结合。图3和4显示包含与ILlO融合的CTLA4胞外域的多特异性交叉受体融合蛋白(SEQ ID NO 9)可诱导PBMC中的STAT3磷酸化。图5显示包含来自3D1和人源化FUNl单克隆抗体的抗⑶86结合域的交叉受体与 WIL2-S细胞上的CD86结合。图6显示包含⑶86结合域和ILlO的交叉受体可同时结合细胞表面⑶86和 sIL 服a。图7显示各种不同形式的人源化抗⑶86FUN1SMIP均可结合⑶86。图8显示具有将ILlO与交叉受体羧基末端(B^)连接的各种接头的CTLA4: ILlO 交叉受体分子可结合 ILlORl-Ig0 Δ -SEQ ID NO :9 ; -SEQ ID NO 171 ；· -SEQ ID NO 302 ;▲ -SEQ ID NO :173。图9显示具有将ILlO与交叉受体羧基末端(BD2)连接的各种较短接头的 CTLA4: ILlO 交叉受体分子可结合 IL10R1-Ig。Δ -SEQ ID NO :171 ; -SEQ ID NO :175; -SEQ ID NO 177 ；▲ -SEQ ID NO :179。 图10显示若干交叉受体蛋白结合⑶80。图11显示若干交叉受体蛋白结合⑶86。图12显示若干交叉受体蛋白结合sILlORa。图13显示若干交叉受体蛋白可同时结合⑶80和sILlORa。图14显示若干本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种多特异性融合蛋白，包含通过间插结构域与异源结合域连接的ＣＤ８６结合域，其中所述异源结合域是ＩＬ－１０激动剂、ＨＬＡ－Ｇ激动剂、ＨＧＦ激动剂、ＩＬ－３５激动剂、ＰＤ－１激动剂、ＢＴＬＡ激动剂、ＬＩＧＨＴ拮抗物、ＧＩＴＲＬ拮抗物或ＣＤ４０拮抗物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·A·汤普森，
申请(专利权)人：新兴产品开发西雅图有限公司，
类型：发明
国别省市：US
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