本发明专利技术涉及能够结合ＣＸＣＲ４以及还诱导ＣＸＣＲ４同二聚体和／或异二聚体构象变化的新的分离的抗体、或其衍生化合物或功能片段。更特别地，本发明专利技术涉及对ＣＸＣＲ４蛋白有特异性的４１４Ｈ５和５１５Ｈ７抗体，及其用于治疗癌症的用途。本发明专利技术还涵盖由这样的抗体组成的药物组合物和选择这样的抗体的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及能够特异性结合趋化因子受体(CXCR)的新抗体，特别是鼠的、嵌合的和人源化的单克隆抗体，以及编码这样的抗体的氨基酸序列和核酸序列。根据一个方面，本专利技术涉及能够特异性结合CXCR4和具有强抗肿瘤活性的新抗体、衍生化合物或功能片段。 本专利技术还包括这样的抗体作为用于预防和/或治疗性治疗癌症的药物、以及在涉及癌症诊断的方法或试剂盒中的用途。最后，本专利技术包括包含这样的抗体与其它抗癌化合物比如抗体、毒素、细胞毒素/细胞增殖抑制剂的联合或结合的组合物，及其用于预防和/或治疗某些癌症的用途。
技术介绍
趋化因子是特别地在免疫反应期间，控制白细胞沿着配体的化学梯度(称为趋化因子梯度)迁移的小的分泌肽(ZlotnickA.等人，2000)。基于其NH2-末端半胱氨酸残基的位置，将它们分成两个主要的亚家族CC和CXC，其结合G蛋白偶联受体，该受体的两个主要的亚家族称为CCR和CXCR。迄今，已经发现超过50个人类趋化因子和18个趋化因子受体。许多癌症具有复杂的趋化因子网状，其影响肿瘤的免疫细胞浸润以及肿瘤细胞生长、存活、迁移和血管生成。免疫细胞、内皮细胞和肿瘤细胞自身表达趋化因子受体，可以响应趋化因子梯度。人类癌症活组织检查样品和小鼠癌症模型的研究表明癌细胞趋化因子受体的表达与转移能力的增加有关。来自不同癌症类型的恶性细胞具有趋化因子受体表达的不同特征，但是趋化因子受体4(CXCR4)是最常发现的。来自至少23个不同类型的上皮起源、间充质起源和造血起源的人类癌症的细胞表达CXCR4受体(Balkwill F.等人，2004)。趋化因子受体4 (也称为融合素、CD184、LESTR或HUMSTR)作为包含352个或360 个氨基酸的两种同工型存在。残基Asnll是糖基化的，残基Tyr21是通过添加硫酸根修饰的，Cys 109和186使用受体细胞外部分上的二硫桥结合(Juarez J.等人，2004)。该受体由不同类型的正常组织、天然的、非记忆T细胞、调节性T细胞、B细胞、嗜中性粒细胞、内皮细胞、初级单核细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、CD34+造血干细胞表达，且以低水平表达在心脏、结肠、肝、肾和脑中。CXCR4在白细胞转运(trafficking)、B细胞淋巴细胞生成和髓细胞生成中起关键作用。CXCR4受体在大量癌症中过表达，所述癌症包括但不限于结肠癌(Ottaiano A.等人，2004)、乳腺癌(Kato M.等人，2003)、前列腺癌(Sun Y. X.等人，2003)、肺癌、卵巢癌(Scotton C. J.等人，2002)、胰腺 (Koshiba T.等人，2000)、肾癌、脑癌(Barbero S等人，200 、恶性胶质瘤和淋巴瘤。迄今描述的CXCR4受体的唯一配体是基质细胞衍生的因子1 (SDF-I)或CXCL12。 SDF-I在淋巴结、骨髓、肝、肺中大量分泌，肾、脑和皮肤分泌的较少。CXCR4也被拮抗趋化因子识别，该拮抗趋化因子是III型人疱疹病毒编码的病毒巨噬细胞炎症蛋白II(vMIP-II)。CXCR4/SDF-1轴在癌症中起关键作用，直接参与迁移、侵入，导致转移。实际上，癌细胞表达CXCR4受体，它们迁移并进入体循环。然后，癌细胞被滞留(arrested)在产生高水平SDF-I的器官的血管床中，其中SDF-I增殖、诱导血管生成和形成转移性肿瘤(Murphy PM.，2001)。该轴也通过活化细胞外信号调节的激酶(ERK)途径(Barbero S.等人，2003) 和血管生成(Romagnani P.，2004)参与细胞增殖。实际上，CXCR4受体及其配体SDF-I通过刺激VEGF-A表达显然地促进了血管生成，所述VEGF-A表达转而增加了 CXCR4/SDF-1的表达(Bachelder R. E.等人，200 。还已知与肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)聚集在肿瘤的低氧区域，受刺激会与肿瘤细胞合作，促进血管生成。据观察缺氧选择性地上调包括TAM的各种细胞类型中CXCR4的表达(Mantovani A.等人，2004)。最近证实CXCR4/SDF-1轴调节 CXCR4+造血干细胞/祖细胞(HSC)的转运/回位(homing)，可在新生血管形成中起作用。 证据显示除了 HSC之外，功能性CXCR4也在来自其它组织(组织定向干细胞=TCSCs)的干细胞上表达，因此，SDF-I可在器官/组织再生所需的化学引诱CXCR4+TCSC中起关键作用， 但是这些TCSC也可以是癌症发展的细胞起源(癌症干细胞理论)。对于人类白血病，和最近对于几种实体肿瘤，比如脑肿瘤和乳腺肿瘤，证实了癌症的干细胞起源。存在几个可以从正常CXCR4+组织/器官特异性干细胞衍生的CXCR4+的肿瘤实例，比如白血病、脑肿瘤、小细胞肺癌、乳腺癌、肝胚细胞瘤、卵巢癌和宫颈癌(Kucia M.等人，2005)。使用针对CXCR4受体的单克隆抗体在体内证实了通过干扰CXCR4受体可以靶向癌症转移(MullerA.等人，2001)。简而言之，已表明针对CXCR4受体(Mab 173R & D Systems) 的单克隆抗体显著地减少了 SCID小鼠中常位乳腺癌模型(MDA-MB231)中淋巴结转移的数量。另一个研究(Phillips R. J等人，2003)也显示SDF-1/CXCR4轴在使用抗SDF-I多克隆抗体的常位肺癌模型(AM9)的转移中起决定性作用，但是在该研究中，其对于肿瘤生长和血管生成都没有作用。几个其它的研究也描述了使用CXCR4的siRNA双链(Liang Ζ.等人，200 生物稳定的CXCR4肽拮抗剂(Tamamura H.等人，200 对体内转移的抑制，或使用 CXCR4 的小分子拮抗剂如 AMD 3100 (Rubin J. B.等人，2003 ；De Falco V.等人，2007)或 Mab (专利W02004/05^85 A2)对体内肿瘤生长的抑制。因此，CXCR4是证实的用于癌症的治疗靶点。趋化因子受体2(CXCR2)是另一种趋化因子受体，也被描述为肿瘤学中感兴趣的靶点。实际上，CXCR2在几种肿瘤细胞类型中传递自分泌细胞生长信号，也可以通过促进血管生成间接地影响肿瘤生长(Tanaka T.等人2005)。CXCR2趋化因子受体包含360个氨基酸。其主要在内皮细胞中表达，尤其是在新生血管形成期间。几种趋化因子结合0乂0 2受体工乂(^5、-6、-7、11^-8、61 0-0、-0和y , 其属于ERL+促血管生成趋化因子。所述CXCR2受体与CXCR4受体共享序列同源性37% 的序列同一性和48%的序列同源性。CXCR2/配体轴参与几种肿瘤生长机制，比如转移 (Singh RK.等人，1994)、细胞增殖(Owen J. D.等人，1997)和ERL+趋化因子介导的血管生成(Strieter R. M.等人，2004 ;Romagnani等人，2004)。最后，与肿瘤相关的巨噬细胞和嗜中性粒细胞是炎症诱导的肿瘤生长的关键元素，趋化因子比如CXCL5、IL-8和GRO-α启动嗜中性粒细胞的募集。二聚化作为调节G蛋白偶联受体功能的常见机制出现，所述G蛋白偶联受体是趋化因子受体(Wang J.和本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种用于选择能够抑制ＣＸＣＲ４活化的抗ＣＸＣＲ４抗体或其功能片段或衍生物之一的方法，特征在于其包括下述步骤：ｉ）筛选产生的抗体，并且选择能够特异性结合ＣＸＣＲ４和还能够调节ＣＸＣＲ４活化的抗体；ｉｉ）测试步骤ｉ）中选择的抗体，并且选择能够诱导ＣＸＣＲ４同二聚体构象变化的抗体，然后ｉｉｉ）测试步骤ｉｉ）中选择的抗体，并且选择能够诱导ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＲ２异二聚体构象变化的抗体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·克林格阿穆，
申请(专利权)人：皮埃尔法布雷医药公司，
类型：发明
国别省市：FR
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