甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒-9057技术

本发明专利技术涉及利用酶循环扩增法、酶比色法及酶联法技术的甘氨酸含量的测定方法、试剂的组成及成分，其测定的技术原理是依据氰化氢合成酶、丙酮酸脱氢酶(EC?1.2.2.2)、丙酮酸脱氢酶(EC?1.2.1.51)的系列催化反应完成，本发明专利技术还涉及一种甘氨酸测定试剂盒。本发明专利技术的测定方法灵敏度高、误差小，因此本发明专利技术的测定方法与试剂盒可以广泛地应用于食品检验。

【技术实现步骤摘要】
甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒-905
本专利技术涉及食品检验测定
，更具体地，本专利技术涉及甘氨酸测定方法及其试齐U盒。
技术介绍
甘氨酸为非人体必需氨基酸。甘氨酸有独特的甜味，能缓和酸、碱味，掩盖食品中添加糖精的苦味并增强甜味。人体若摄入甘氨酸的量过多，不仅不能被人体吸收利用，而且会打破人体对氨基酸的吸收平衡而影响其它氨基酸的吸收，导致营养失衡而影响健康。甘氨酸不能被人体利用，只能分解转化为热能，这样会增加肝脏负担。而分解产物中的含氮化合物要通过尿液排出体外，又会增加肾脏负担。如果大量、长期食用这类食品，可能造成肝肾损伤。部分含乳饮料企业为提高产品中蛋白质含量，在生产加工中违规使用甘氨酸，对青少年及儿童的正常生长发育很容易带来不利影响。按照我国《食品添加剂使用卫生标准》GB2760规定，甘氨酸在作为食品添加剂只允许在调味剂与豆奶中使用，且最高限量为每公斤1克，但在含乳饮料中不允许使用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种甘氨酸的测定方法。本专利技术的另一个目的是提供一种甘氨酸测定试剂盒。本专利技术是通过下述技术方案实现的。本专利技术的方法是一种采用间接酶循环扩增法(Indirect Enzymatic Recycling Method)、酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)与酶(偶)联法(Couple Reaction) 的联用技术，利用测定还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处的吸光度变化测定甘氨酸的方法。本专利技术甘氨酸测定方法的的技术原理是根据下述氰化氢合成酶、丙酮酸脱氢酶 (EC 1. 2. 2. 2)、丙酮酸脱氢酶(EC 1. 2. 1. 51)的系列催化反应完成 甘氨酸+2辅酶氰化氢合成酶氰化氢+ 二氧化碳+2还原型辅酶二氧化碳+乙酸+亚铁细胞色素bl丙酮酸脱氢酶丙酮酸+高铁细胞色素bl+水丙酮酸+辅酶A+辅酶丙酮酸脱氢酶二氧化碳+乙酰辅酶A+还原型辅酶本专利技术的方法利用氰化氢合成酶(hydrogen cyanide synthase ；EC 1.4.99.5) 酶(偶)联丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase ；EC 1. 2. 2. 2)、另一种丙酮酸脱氢酶 (pyruvate dehydrogenase ；EC 1. 2. 1. 51)酶促反应连续监测法。氰化氢合成酶、丙酮酸脱氢酶(EC 1.2.2.2)作为作用酶，氰化氢合成酶功能为将甘氨酸酶解产生二氧化碳，丙酮酸脱氢酶(EC 1. 2. 2. 2)的酶促作用使二氧化碳产生丙酮酸；丙酮酸脱氢酶(EC 1. 2. 1. 51) 作为循环酶丙酮酸脱氢酶(EC 1. 2. 1. 51)再将丙酮酸再次变回二氧化碳，使二氧化碳不断地被重复循环利用。丙酮酸脱氢酶(EC 1.2. 1.51)又作为显色酶，将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在 340nm处吸光度上升的速度，这样可以通过测量340nm处吸光度上升的速度，可以测算甘氨酸的浓度大小。本专利技术是通过下述技术方案实现的。本专利技术涉及一种甘氨酸的测定方法。该甘氨酸测定方法的步骤如下A、样品准备A. 1标准样品的制备将一定量的甘氨酸溶于水或缓冲液中，再将甘氨酸浓度调整到1毫摩尔/升，得到的溶液作为标准样品；A. 2待测样品的制备待测液体样品直接测试，无须预处理；将一定量的待测固体样品像制备标准样品一样溶于水或缓冲液中；A. 3空白样品所述的水或缓冲液作为空白样品，其甘氨酸浓度为0毫摩尔/升；B、试剂溶液的制备分别移取或称取缓冲液、稳定剂、辅酶、氰化氢合成酶、丙酮酸脱氢酶 (EC1. 2. 2. 2)、丙酮酸脱氢酶(EC 1.2. 1. 51)、乙酸、亚铁细胞色素bl与辅酶A，然后将它们混合均勻，用水溶解得到所述的试剂溶液，它们的浓度分别是20-500mmo 1 /L、 0.001-7mol/L、0. l_5mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、I-IOOmmol/ LU-lOOmmol/L 与 l-lOOmmol/L ；C、待测样品与在步骤B)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/500进行混合，在温度15-45°C下反应5-60分钟，在主波长340nm与副波长405nm(如果受仪器限制可以不设副波长)下进行测定，测定其吸光度随时间的变化；D、在与步骤C)同样的条件下测定步骤A)标准样品的吸光度随时间的变化；E、在与步骤C)同样的条件下测定在步骤A)空白样品的吸光度随时间的变化；F、数据处理由步骤C-E)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化，根据下式计算得到甘氨酸的含量权利要求1.一种利用酶循环扩增法、酶比色法及酶联法技术的甘氨酸浓度测定方法，其测定的技术原理是根据下述氰化氢合成酶、丙酮酸脱氢酶(EC 1.2. 2. 2)、丙酮酸脱氢酶(EC 1. 2. 1. 51)的系列催化反应完成甘氨酸+2辅酶氰化氢合成酶氰化氢+ 二氧化碳+2还原型辅酶二氧化碳+乙酸+亚铁细胞色素bl丙酮酸脱氢酶丙酮酸+高铁细胞色素bl+水丙酮酸+辅酶A+辅酶丙酮酸脱氢酶二氧化碳+乙酰辅酶A+还原型辅酶。2.一种甘氨酸的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下 2. 1样品准备2. 1.1标准样品的制备将一定量的甘氨酸溶于水或缓冲液中，再将其浓度调整到1毫摩尔/升； 2. 1.2待测样品的制备待测液体样品直接测试，无须预处理；将一定量的待测固体样品像制备标准样品一样溶于水或缓冲液中； 2. 1.3空白样品所述的水或缓冲液作为空白样品，其甘氨酸浓度为0毫摩尔/升； 2. 2试剂溶液的制备分别移取或称取缓冲液、稳定剂、辅酶、氰化氢合成酶、丙酮酸脱氢酶(EC1. 2. 2. 2)、丙酮酸脱氢酶(EC 1.2. 1.51)、乙酸、亚铁细胞色素bl与辅酶A，然后将它们混合均勻，用水溶解得到所述的试剂溶液，它们的浓度分别是20-500mmol/L、0. 001-7mol/L、0. l-5mmol/ L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、l-100mmol/L、l-100mmol/L 与 l-100mmol/L ；2. 3待测样品与在步骤2. 2)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/500进行混合，在温度15-45°C下反应5-60分钟，在主波长340nm与副波长405nm(如果受仪器限制，可以不设副波长)下进行测定，测定其吸光度随时间的变化；2. 4在与步骤2. 3)同样的条件下测定步骤2. 1. 1)标准样品的吸光度随时间的变化； 2. 5在与步骤2. 3)同样的条件下测定在步骤2. 1. 3)使用的水或缓冲液作为空白溶液的吸光度随时间的变化；2.6数据处理由步骤2. 3-2. 5)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化，根据下式计算得到甘氨酸的含量3.根据权利要求1、2所述的测定方法，其特征在于使用全自动生化分析仪测定时，待测样品、所述标准样品与所述空白样品由该分析仪在设定条件下自动取样，然后在下述条件下进行测定测定方法为速率法，温度37°C，反应时间10分钟，测试主波长340nm本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种利用酶循环扩增法、酶比色法及酶联法技术的甘氨酸浓度测定方法，其测定的技术原理是根据下述氰化氢合成酶、丙酮酸脱氢酶（ＥＣ　１．２．２．２）、丙酮酸脱氢酶（ＥＣ　１．２．１．５１）的系列催化反应完成：甘氨酸＋２辅酶氰化氢合成酶氰化氢＋二氧化碳＋２还原型辅酶二氧化碳＋乙酸＋亚铁细胞色素ｂ１丙酮酸脱氢酶丙酮酸＋高铁细胞色素ｂ１＋水丙酮酸＋辅酶Ａ＋辅酶丙酮酸脱氢酶二氧化碳＋乙酰辅酶Ａ＋还原型辅酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32