融合表达重组制备人β干扰素制造技术

技术编号:6957059 阅读:200 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种在大肠杆菌中利用融合表达重组制备可溶性人β干扰素的工艺,其中包含融合表达的重组质粒和专一性蛋白酶酶切位点,以及重组制备中不含SDS的工艺方法。经本发明专利技术制备的重组人β干扰素具有更高的抗病毒比活性和安全性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及DNA重组技术和药物领域,涉及通过融合表达的重组人β 干扰素,含编码该融合蛋白的DNA序列,含该DNA序列的载体,含该载体的宿主细胞,用于基因工程制备该蛋白的方法,以及该蛋白在治疗疾病领域的应用。
技术介绍
人β干扰素是成纤维细胞和上皮细胞产生的一类具有广泛生物学活性,包括抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节作用的重要细胞因子(KozovsKa ME, et al. Neurology (J), 1999,53 :1692-1697),具有 5 个 α 螺旋结构和 22KDa 的分子量 (Arduini, et al. Protein Science〔J〕,1999,8 :1867-1877)。目前人 β 干扰素分为 β 干扰素-Ia和β干扰素_lb,其中β干扰素-Ia是天然结构,包含有糖基化结构。而β 干扰素-Ib是将17位的Cys突变成Ser而成,且N端不含甲硫氨酸,由165个氨基酸组成(Goodkin DE, et al. Lancet〔J〕,1994,344 :1057-1060)。大量研究表明,人 β 干扰素可在大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞中实现稳定高效的表达(Ja本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在大肠杆菌中可溶性融合表达人β干扰素和重组制备方法,其特征在于:融合蛋白标签为硫氧还原蛋白(TRX),融合表达方式为:TRX-Linker-IFN-β,其中TRX位于N末端,IFN-β位于C末端,中间由连接肽Linker相连。

【技术特征摘要】
1.一种在大肠杆菌中可溶性融合表达人β干扰素和重组制备方法,其特征在于融合蛋白标签为硫氧还原蛋白(TRX),融合表达方式为=TRX-Linker-IFN-β,其中TRX位于N末端,IFN-β位于C末端,中间由连接肽Linker相连。2.权利1中所述人β干扰素序列(SEQID NO :1),第1位氨基酸前可带有甲硫氨酸 (Met)或甘氨酸(Gly)。3.权利要求1中所述的重组融合蛋白中连接肽(Linker)含有专一性的蛋白酶切位点。4.权利要求1、3中所述重组融合蛋白中连接肽含有位于蛋白酶酶切位点前的6XHis 标签。5.权利要求3、4中所述蛋白酶切位点可以是肠激酶酶切位点DDDDK,或凝血酶酶切位点LVPRGS,或TEV酶酶切位点E...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘日勇李祥陈海容谭克海胡春兰
申请(专利权)人:重庆富进生物医药有限公司
类型:发明
国别省市:85

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