本发明专利技术属于天然药物化学领域，特别是涉及一种纯化葫芦素E的方法，其特征在于：取山芝麻药材粉碎，加7-10倍量80-90%乙醇回流提取2-3次，提取液减压回收乙醇，浓缩液用乙酸乙酯萃取，取有机层浓缩，注入高速逆流色谱仪，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析出结晶，过滤，结晶加乙醇回流溶解，放置重结晶。采用本发明专利技术制备葫芦素E，工艺简单易操作，收率高，产品含量高，适合规模化制备。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然药物化学领域，特别是涉及一种采用高速逆流色谱技术纯化葫芦素E方法。
技术介绍
山芝麻又名大山麻、石秤砣，为梧桐科山芝麻属植物山芝麻Helictercs angustifolia L.，以根或全株入药，具有清热解毒、止咳的功效。用于感冒高烧，扁桃体炎， 咽喉炎，腮腺炎，麻疹，咳嗽，疟疾；外用治毒蛇咬伤，外伤出血，痔疮，痈肿疔疮。郭新东等(中山大学学报(自然科学版)，2003，42 (2) :52_54)从山芝麻根乙醇提取物的乙酸乙酯可溶部分分离出葫芦素E、小麦黄素等化合物。葫芦素E具有抗肿瘤、保护肝脏、增强细胞免疫和催吐等药理作用，临床用于急性和迁延性慢性肝炎、原发生性肝癌。大鼠试验表明，葫芦素E皮下注射或口服，对四氯化碳所致急性和亚急性肝损害具有明显的保护作用，使动物的肝细胞疏松变性，气球样变性和脂肪性病变的数目明显减少，病变程度大力减轻，肝小叶中央坏死区迅速修复，血清转氨酶活性明显下降，肝糖原蓄积增多。葫芦素E 口服能提高机体的细胞免疫功能，且此作用与其对肝炎的疗效密切相关。葫芦素E有强烈的催吐作用，2.5mg/kg给兔口服，可致吐；由此推断其催吐作用系刺激胃粘膜，反射性引起呕吐中枢兴奋所致。葫芦素E在体内对肉瘤 180(S180)和Hirlich瘤的生长有抑制作用，5 15mg/kg剂量对前者的抑制率为40% 42%，2. 5 7. 5mg/kg剂量对后者的抑制率为29% 37% ；体外对人体鼻咽癌(KB)细胞和 Hela人体癌细胞有细胞毒活性，其ED5tl分别为0. 01 μ g/ml和0. 05 0. 01 μ g/ml。专利
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术的不足和缺陷，提供一种纯化纯化葫芦素E方法。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下一种纯化葫芦素E的方法，其特征在于取山芝麻药材粉碎，加7-10倍量80-90%乙醇回流提取2-3次，提取液减压回收乙醇，浓缩液用乙酸乙酯萃取，取有机层浓缩，注入高速逆流色谱仪，以氯仿-甲醇-水为溶剂系统，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析出结晶，过滤，固体物加乙醇回流溶解，放置结晶。所述的回流温度为70-100°C。所述的氯仿-甲醇-水溶剂系统体积比为4-6:3-5:2-4，上相为固定相，下相为流动相。本专利技术优势在于采用高速逆流色谱分离，分离过程无产品损失，制备周期短，制备量大，易操作，克服了传统填充柱分离过程中样品死吸附、工艺繁琐、重现性差的技术缺陷。下面将结合具体实施方式进一步说明本专利技术，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施例方式实施例1:取山芝麻药材粉碎，取^g，加7倍量90%乙醇溶液，在70°C温度下回流提取3次，合并两次提取液减压回收乙醇，加适量水，放入分液漏斗，加入乙酸乙酯萃取3次，萃取液浓缩至小体积作为样品溶液，取氯仿、甲醇、水按体积比为5:3:4混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为700rpm， 同时以lOml/min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为2ml/min， 注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，过滤，固体物加乙醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶，干燥得到葫芦素E9. 6g，经HPLC检测，含量为 99. 1%。实施例2:取山芝麻药材粉碎，取^g，加8倍量85%乙醇溶液，在80°C温度下回流提取3次，合并两次提取液减压回收乙醇，加适量水，放入分液漏斗，加入乙酸乙酯萃取3次，萃取液浓缩至小体积作为样品溶液，取氯仿、甲醇、水按体积比为6:3:4混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为800rpm， 同时以lOml/min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为3ml/min，注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，过滤，固体物加乙醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶，干燥得到葫芦素E6. 8g，经HPLC检测，含量98. 1%。实施例3:取山芝麻药材粉碎，取^g，加8倍量85%乙醇溶液，在100°C温度下回流提取2次，合并两次提取液减压回收乙醇，加适量水，放入分液漏斗，加入乙酸乙酯萃取3次，萃取液浓缩至小体积作为样品溶液，取氯仿、甲醇、水按体积比为6:3:4混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为750rpm， 同时以lOml/min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为1. 5ml/min, 注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，过滤， 固体物加乙醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶，干燥得到葫芦素ElO. 2g JSHPLC检测，含量 98. 8%ο实施例4:取山芝麻药材粉碎，取10kg，加10倍量85%乙醇溶液，在70°C温度下回流提取3次，合并两次提取液减压回收乙醇，加适量水，放入分液漏斗，加入乙酸乙酯萃取3次，萃取液浓缩至小体积作为样品溶液，取氯仿、甲醇、水按体积比为混合，静置分层，以上相为固定相， 下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为800rpm，同时以lOml/min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为2. 5ml/min, 注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，过滤， 固体物加乙醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶，干燥得到葫芦素E27. 7g，经HPLC检测，含量 98. 8%ο实施例5:取山芝麻药材粉碎，取MkgJn 10倍量80%乙醇溶液，在100°C温度下回流提取2次， 合并两次提取液减压回收乙醇，加适量水，放入分液漏斗，加入乙酸乙酯萃取3次，萃取液浓缩至小体积作为样品溶液，取氯仿、甲醇、水按体积比为5:3:2混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为700rpm，同时以lOml/min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为 2ml/min,注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，过滤，固体物加乙醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶，干燥得到葫芦素E39. 3g，经HPLC检测，含量为99. 4%。本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种纯化葫芦素Ｅ的方法，其特征在于：取山芝麻药材粉碎，加７－１０倍量８０－９０％乙醇回流提取２－３次，提取液减压回收乙醇，浓缩液用乙酸乙酯萃取，取有机层浓缩，注入高速逆流色谱仪，以氯仿－甲醇－水为溶剂系统，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析出结晶，过滤，结晶加乙醇回流溶解，放置重结晶。
【技术特征摘要】
1. 1. 一种纯化葫芦素E的方法，其特征在于取山芝麻药材粉碎，加7-10倍量80-90% 乙醇回流提取2-3次，提取液减压回收乙醇，浓缩液用乙酸乙酯萃取，取有机层浓缩，注入高速逆流色谱仪，以氯仿-甲醇-水为溶剂系统，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩， 放置过夜，析出结晶，...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，万冬梅，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：84
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