T1R味觉受体及其编码基因制造技术

描述了最近鉴定的哺乳动物味觉细胞特异性G蛋白偶联受体以及编码该受体的基因和cDNA。特别地，描述了在味觉信号传导中起作用的T1RG蛋白偶联受体以及其编码基因和cDNA，同时还描述了用于分离该基因和用于分离与表达该受体的方法。也描述了用于在哺乳动物中表示特殊味觉刺激物的味觉感受的方法，以及用于产生在哺乳动物中引起预定味觉感受的新分子或分子组合的方法，和模仿一种或多种味觉的方法。此外，也公开了用于在哺乳动物中刺激或阻断味觉感受的方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及最近鉴定的哺乳动物化学感受性G蛋白偶联受体、这种受体的家族和编码该受体的基因与cDNA。更具体而言地，本专利技术涉及最近鉴定的在味觉信号传导中起作用的哺乳动物化学感受性G蛋白偶联受体、这种受体的家族、编码该受体的基因与cDNA以及在味觉调节子的分析和发现中使用这种受体、基因与cDNA的方法。本专利技术特别提供了编码新的在下文标识为T1R2的人味觉受体的DNA序列和相应的受体多肽。相关领域描述味觉系统提供了有关外部世界化学组合物的感觉信息。认为哺乳动物具有至少 5种基本的味觉形式甜、苦、酸、咸和umami。参见如Kawamura等人，Umami介绍一种基本的味觉(Introduction toUmami :A Basic Taste) (1987) ；Kinnamon 等人，Ann. Rev. Physiol.，54 :715-31 (1992) ；Lindemann, Physiol. Rev. ,76 :718-66(1996) ；Stewart 等人，Am. J. Physiol.，272 :1-26(1997)。每一种味觉形式被认为是由舌表面上的味觉受体细胞所表达的多种受体或一种独特的蛋白质受体来介导的(Lindemarm，Physiol. Rev. ,76 718-716(1996))。识别苦、甜和umami味觉刺激物的味觉受体属于G蛋白偶联受体(GPCR) 超家族(Hoon 等人，Cell 96:451(1999) ；Adler 等人，Cell 100 693 (2000)) (认为其他味觉形式通过离子通道介导。)G蛋白偶联受体介导了许多其他的生理学功能，如内分泌功能、外分泌功能、心率、 脂解作用和糖类代谢。对于一些这种受体的生物化学分析和分子克隆已揭示出许多有关这些受体功能的原理。例如，美国专利No. 5，691，188描述了当配体结合到GPCR上时，受体怎样经过构象变化从而导致异三聚体化的G蛋白的激活，其中G蛋白的激活通过促进( 亚基表面所结合的GDP被GTP的置换以及随后( 亚基从( 与Gg亚基的解离来进行。游离的 Ga亚基和(ibg复合物激活了多种信号转导通路的下游元件。当前已知许多人和其他真核生物化学感受性受体的完整或部分序列。参见如 Pilpel, Y.禾口 Lancet，D. ，Protein Science,8 :969-977(1999) ；Mombaerts, P. ，Annu. Rev. Neurosci.，22 :487-50 (1999)。也参见 EP0867508A2、US 5874243、WO 92/17585、WO 95/18140、W097/17444、W0 99/672820由于配体-受体相互作用的复杂性，更具体而言地为味觉刺激物-受体相互作用的复杂性，关于配体-受体识别的信息是缺乏的。作为甜和umami味觉受体的GPCR的鉴定和表征可允许发现新味觉刺激物的新方法。例如，受体的可用性能够允许对于受体调节子的筛选。这种化合物能够调节味觉，并可在食品工业中用于改善多种消费产品的味道；例如，通过新人工甜味剂的开发来改善低卡路里饮料的可口性。部分地，本专利技术提出了对于更好地理解化学感受性受体和化学刺激物之间相互作用的需要。其中，本专利技术(除了其它)也提供了新的化学感受性受体和使用这种受体的方法，以及编码这种受体的基因与CDNA，从而鉴定可用于调节化学感受性转导如味觉的分子。专利技术概述本专利技术涉及G蛋白偶联受体的新家族和编码该受体的基因与cDNA。认为受体主要地与甜味觉转导有关，但是也可以参与转导来自其他味觉形式的信号。本专利技术提供了在哺乳动物中(包括人)表示味觉感受和/或预测味觉感受的方法。优选地，这种方法可通过使用此处所公开的受体和编码该受体的基因来进行。所以，提供此处称为TlRs的在味觉中起作用的哺乳动物G蛋白偶联受体新家族是本专利技术的一个目的。提供保留味觉刺激物结合活性的这种TlRs的片段和变体为本专利技术的另一个目的。提供编码这种TlRs或其片段或变体的核酸序列或分子是本专利技术的另外一个目的。提供包括编码这种TlRs或其片段或变体的核酸序列的表达载体为本专利技术的另外一个目的，该核酸序列可操作地连接到至少一个调节序列上，如启动子、增强子或其他参与正或负的基因转录和/或翻译的序列。提供功能性地表达至少一种这种TlRs或其片段或变体的人或非人细胞为本专利技术的另外一个目的。提供包括至少一种这种TlRs的至少一个片段的TlR融合蛋白质或多肽为本专利技术的另外一个目的。提供分离的编码TlR多肽的核酸分子为本专利技术的另一个目的，该核酸分子含有与选自SEQ ID NOS :1、2、3、9、11、13、15、16、20的核酸序列具有至少50%，优选的为75%、 85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的一致性的核酸序列及其保守修饰的变体。提供分离的包含编码多肽的核酸序列的核酸分子为本专利技术的进一步的目的，该多肽具有与选自SEQ ID NOS :4、10、12、14、17、21的氨基酸序列具有至少35 50%，优选的为 60%、75%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的一致性的氨基酸序列及其保守修饰的变体，其中片段长度为至少20个，优选的为40、60、80、100、150、200或250个氨基酸。可选地，片段可以为与抗TlR抗体结合的抗原片段。提供分离的含有该片段变体的多肽为本专利技术另外的目的，其中有至多10个，优选的为5、4、3、2或1个氨基酸残基发生变异。提供这种TlRs的激动剂或拮抗剂，或其片段或变体为本专利技术的另外一个目的。提供在哺乳动物包括人中表示味觉感受和/或预测味觉感受的方法为本专利技术的另外一个目的。优选地，这种方法可通过使用此处所公开的TlRs或其片段或变体和编码这种TlRs的基因或其片段或变体来进行。提供在哺乳动物中引起预定味觉感受的新的分子或分子组合为本专利技术的另外一个目的。这种分子或组合物可通过下述方法产生测定已知分子或分子组合在哺乳动物中的味觉感受值；测定一种或多种未知分子或分子组合在哺乳动物中的味觉感受值；将一种或多种未知组合物在哺乳动物中的味觉感受值与一种或多种已知组合物在哺乳动物中的味觉感受值进行比较；选择出在哺乳动物中引起预定味觉感受的分子或分子组合；以及合并两种或更多种未知分子或分子组合以形成在哺乳动物中引起预定味觉感受的分子或分子组合。合并步骤产生在哺乳动物中引起预定味觉感受的单一分子或分子组合。提供筛选一种或多种化合物以确定哺乳动物可探测的味觉是否存在的方法为本专利技术另外的目的，该方法包括将该一种或多种化合物与至少一种公开的TlRs或其片段或变体接触的步骤，其中哺乳动物优选地为人。提供用于模拟味觉的方法为本专利技术的另一个目的，该方法包括下列步骤对于此处所公开的大量TlRs或其片段或变体的每一个，优选的为人TIRs，确定TlR与味觉刺激物相互作用的程度；以及以一定量组合大量的化合物，其中每一个具有先前所确定的与一种或多种TlRs的相互作用，它们总和在一起提供了模拟味觉特征的受体-刺激特征。味觉刺激物与TlR的相互作用可以使用任何这里所描述的结合或受体测定来确定。然后，可将大多数化合物组合形成混和物。如果需要，大多数本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种分离的核酸序列，其编码与ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１中的人类Ｔ１Ｒ２多肽具有至少９８％序列一致性的人类味觉受体多肽，或者其在严格性杂交条件下与ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０中的核酸序列杂交，其中当所述多肽与ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７中的人类Ｔ１Ｒ１多肽或ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４中的人类Ｔ１Ｒ３多肽一起表达时产生功能性味觉受体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：J·E·阿德勒，李晓东，L·斯塔谢夫斯基，S·奥康奈尔，S·佐祖利亚，
申请(专利权)人：塞诺米克斯公司，
类型：发明
国别省市：US