本发明专利技术涉及Ｔ２Ｒ味觉受体家族中响应特定苦味配体即２－乙酰吡嗪和乙基吡嗪的人味觉受体ｈＴ２Ｒ５０的新单体型的发现。本发明专利技术还涉及此新单体型在用于鉴定调节ｈＴ２Ｒ５０味觉受体活化的配体的测定中的用途。这些化合物潜在地可用作食品、饮料和药品中的添加剂，以改变（阻断）ｈＴ２Ｒ５０相关的苦味。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
然而，尽管已有报道并理解T2R成员调控苦味，且它们可 能在胃肠功能中的起作用，但有需要鉴定活化人苦味T2R味觉受体的特 异性配体。更好地理解不同T2R (特别是人T2R)的结合特性将非常有 益，因为其将更好地促进其在选择具有预期味觉调节特性(即阻断或抑 制特异性苦味化合物的味道)的化合物中的用途。另外，它也将提供用 于治疗和调节胃肠功能和相关疾病(如肥胖症、糖尿病、食物吸收、食 物感受、进食障碍)，并调控相关激素和肽(如GLUT2、胆嚢收缩素等) 的化合物的鉴定。
技术实现思路
"T2R单体型"指见于不同个体的hT2R多肽的天然存在的 等位基因变体，如附图说明图1所含hT2R50单体型及相应DNA。此类T2R单体 型可与早先报道的最初鉴定的hT2R多肽响应相同或不同的苦味配体。 例如， 一些单体型可参与一些个体品尝不同的苦味配体或与其它个体不 同地感知此类配体的能力。某些化学感受GPCR在拓朴学上具有"N-末端结构域"、"胞 外结构域"、包含七个跨膜区及相应胞质和胞外环的"跨膜结构域"、"胞 质区，，和"C-末端区，，(参见，例如Hoon等人，Cell, 96:541-51 ( 1999); Buck&Axel， Cell, 65:175-87 ( 1991 ))。使用本领域技术人员已知的方 法，如鉴定疏水性和亲水性结构域的序列分析程序(参见，例如Stryer， Biochemistry (生物化学)(第三版，1988);另请参见许多基于互联网的 序列分析程序，如见于dot.imgen.bcm.tmc.edu的那些中的任何一个)，可在结构上鉴定这些区域。可将这些区域用于制备嵌合蛋白，并用于本 专利技术的体外测定法(例如配体结合测定法)。本文所用术语"纯化的"、"基本纯化的"和"分离的"指不含天 然状态下一般与本专利技术的化合物结合的其它、不相似的化合物的状态。 "纯化的"、"基本纯化的"和"分离的，，优选指所述组合物以重量计包含至 少0.5%、 1%、 5%、 10%或20%，且最优选至少50%或75%重的给定 样品。在一个优选实施方案中，这些术语指以重量计包含至少95%重的 给定样品的本专利技术的化合物。当指核酸或蛋白时，本文所用术语"纯化 的"、"基本纯化的"和"分离的"核酸或蛋白也指不同于哺乳动物(尤其是 人)身体中天然存在的纯化或浓缩状态。任何大于所述哺乳动物(尤其 是人)身体中天然存在的纯化或浓缩程度，包括(1)从其它结合的结构或化合物中纯化，或(2)与在哺乳动物(尤其是人)身体中一般不结合 的结构或化合物结合亦在"分离的，，的含义内。可根据本领域技术人员已 知的多种方法和程序分离本文所述核酸或蛋白或所述类别的核酸或蛋 白，或将它们与天然状态下一般不与它们结合的结构或化合物结合。术语"文库，，指为不同核酸或多肽分子的混合物的制品，如用 简并引物对扩增核酸或包括扩增的配体结合区的载体的分离收集而产生 的重组产生的感觉(特别是味觉)受体配体结合区的文库，或用至少一 种编码味觉受体的载体各自随机转染的细胞的混合物。对于是保守变体的本专利技术的多肽，常规实验即确定模拟物是 否在本专利技术范围内，即其结构和/或功能未被实质性改变。多肽模拟物组19合物可含非天然结构组件的任意组合，其一般来自三个结构組a)不是 天然酰胺键("肽键")连接的残基连接组；b)非天然残基取代天然存在 的氨基酸残基；或c)诱导二级结构模拟(即诱导或稳定二级结构(例如 P转角、y转角、p折叠、a螺旋构象等))的残基。当多肽的所有或一些 残基通过不是天然肽键的化学方式连接时，可将其表征为模拟物。个别 的肽模拟物残基可通过肽键、其它化学键或偶联方式(如，例如戊二醛、 N-羟基琥珀酰亚胺酯、双功能马来酰亚胺、N，N'-二环己基碳二亚胺 (DCC)或N，N，-二异丙基碳二亚胺(DIC))连接。可替代传统酰胺键 ("肽键")连接的连接基团包括，例如酮亚甲基(例如-C(，-.O)--CH2 替代一C(.-O)--NH—)、氨亚甲基(CH2NH )、乙烯、烯烃(CH.dbd.CH )、 醚(CH20 )、硫醚(CH2—S )、四唑(CN4 )、噢唑、逆酰胺(retroamide )、 石l/f戈酰胺或酉旨(参见，，W口 Spatola， Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides and Proteins,第7巻，267-357， Marcell Dekker， Peptide Backbone Modifications, NY ( 1983 ))。还可将含取代了所有或一些天 然存在的氨基酸残基的被非天然残基的多肽表征为模拟物；非天然残基 在科学和专利文献中已有详细描述。"经标记的核酸探针或寡核苷酸"是通过连接体或化学键共 价结合，或通过离子键、范德华键、静电键或氢键非共价结合标记物， 从而可通过检测出结合到所述探针的标记物的存在情况来检测所述探针 的存在情况的核酸探针或寡核苷酸。0073本文所用"核酸探针或寡核苷酸"的定义是能够通过一种或 多种类型的化学键，通常通过互补碱基配对，通常通过氬键形成，结合 具有互补序列的靶核酸的核酸。本文所用探针可包括天然(即A、 G、 C 或T)或经修饰碱基(7-脱氮鸟苷、次黄苷等)。此外，探针中的碱基可通过不是磷酸二酯键的连接而连接，只要其不干扰杂交。因此，例如， 探针可为肽核酸，其中作为组成的碱基通过肽键，而非磷酸二酯连接连 接。本领域技术人员应理解，探针可依赖于杂交条件的严格性而与所述 探针序列缺乏完全互补性的靶序列结合。所述探针任选用同位素、发色 团、发光团、色原进行直接标记，或用如生物素进行间接标记(随后可 将链霉亲和素复合体结合至所述生物素)。本领域技术人员可通过测定所 述探针的有无来检测所选序列或子序列的有无。基于前述内容，本专利技术提供用于鉴定调节(优选阻断) hT2R50的新单体型和先前鉴定的人苦味受体hT2R50被苦味化合物(即 吡溱和结构上相关的化合物)的特异性活化的化合物的测定法。本专利技术 尤其提供用于鉴定调节(例如阻断)hT2R50及其单体型被苦味配体的活 化的化合物的基于细胞的测定法。预期这些化合物将在人受验者中调节与hT2R50和其它潜在T2R味觉受体相关的苦味。这可在味觉试验中确 认。另外，这些核酸也可通过公知的化学合成技术在体外合成， 参见,例如 Carruthers, Cold Spring Harbor Symp. Quant. ■ Biol. 47:411-18(1982); Adams, Am. Chem. Soc.， 105:661 ( 1983 ); Belo脂v， Nucleic Acids Res. 25:3440-3444 (1997); Frenkel， Free Radic. Biol. Med. 19:373-380 ( 1995 ); Blommers， Biochemistry 33:7886-7896 ( 1994 ); Narang, Meth. Enzymol. 68:90 (1979 ); Biwn， Meth. Enzymol. 68:109(1979 ); Beaucag本文档来自技高网...
【技术保护点】
编码苦味受体ｈＴ２Ｒ５０单体型的核酸序列或其变体，所述核酸序列编码具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３所含序列的Ｔ２Ｒ多肽序列，所述变体编码与所述Ｔ２Ｒ多肽序列具有至少９０％序列同一性且在其羧基末端含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３所含ｈＴ２Ｒ５０多肽相同 的１０个氨基酸的Ｔ２Ｒ多肽。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：李晓东，A普洛宁，徐宏，
申请(专利权)人：塞诺米克斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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