拟穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子及其制备方法与应用，涉及一种抗病毒型抗脂多糖因子。提供拟穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子Sp-ALF2的基因序列、氨基酸序列、拟穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子Sp-ALF2的制备方法以及拟穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子的应用。构建拟穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子Sp-ALF2重组表达载体；将重组表达载体导入宿主细胞，并将宿主细胞进行诱导表达，获得表达产物；分离纯化后产物，获得重组蛋白，即Sp-ALF2。所述拟穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子Sp-ALF2对WSSV和多种病原菌具有明显抑制作用和杀伤作用，在制备抗病新药和作为动物抗病饲料添加剂中具有广泛应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗病毒型抗脂多糖因子，尤其是涉及一种拟穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子及其制备方法与应用。
技术介绍
白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)不仅是危害对虾的主要病毒性病原，而且能够感染其他许多甲壳类十足目动物，而这其中包括许多重要水产经济养殖品种。WSSV病害自1993年发生以来，给全球水产养殖业造成了巨大经济损失，近20年来，国内外学者在WSSV侵染和水生甲壳动物抗WSSV免疫研究方面取得了一些关键性进展， 遗憾的是，至今尚无针对此病毒的有效防治方法。众所周知，与脊椎动物相比，虾、蟹等无脊椎甲壳动物缺乏后天免疫应答系统，它们仅依靠非特异性免疫来抵御微生物入侵感染。已有研究表明病毒感染对虾、蟹后能够激活宿主的免疫识别信号传导通路，如NF-kappaB信号通路、肿瘤坏死因子受体相关因子 6(TRAF6)信号通路和STAT信号通路M等，从而引发一系列免疫应答反应，包括抗菌肽的合成与释放、细胞吞噬和细胞凋亡等，这些免疫应答反应在甲壳类动物抵御外界病原微生物感染过程中发挥重要作用。值得一提的是，近年来陆续有一些抗病毒活性物质得以分离鉴定，诸如血蓝蛋白、溶菌酶、抗菌肽等，这些研究报道为虾、蟹等水产养殖病毒病的有效防治提供了重要理论依据。抗脂多糖因子首次发现于鲎体内，该因子具有抗凝血作用，能够抑制细菌脂多糖(LPQ引发的凝集反应，故命名为抗脂多糖因子。研究表明，ALF对LPS具有高亲和力， 能够结合LPS的类脂A部位并中和其生物学活性，对于抵抗内毒素血症和内毒素休克具有重要作用；此外，ALF对R-型革兰氏阴性菌生长具有强烈抑制作用。ALF在其他多种甲壳动物体内也相继得以分离鉴定，并且ALF在LPS、细菌、真菌和WSSV刺激后均有不同程度的上调表达，而体外重组表达的ALF蛋白也表现出广谱抗菌活性，包括对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抑制与杀伤作用。近期研究表明，螯虾Pl-ALF具有显著的抗WSSV活性，而对虾Pm-ALF3亦显示出抗WSSV活性。综上所述，ALF是水生甲壳类动物的重要免疫因子，对其功能的深入鉴定研究不仅在抗微生物感染理论研究方面具有重要意义，而且在生产实践中亦具有广泛应用前景。拟穴青蟹kylla paramamosain与基因工程，特别涉及拟穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子(Anti-lipopolysaccharide factor)，即Sp_ALF2基因克隆、重组表达产物及其制备方法，尤其是利用红螯螯虾造血组织干细胞作为细胞模型进行Sp-ALF2产品抗WSSV感染的抗病毒实验技术。参考文献如下1. Huang XD, Zhao L, Zhang HQ, Xu XP, Jia XT, Chen YH, Wang PH, Weng SP, Yu XQ,Yin ZX et al. Shrimp NF-kappaB binds to the immediate-early gene iel promoter of white spot syndrome virus and upregulates its activity. Virology,2010,406 (2) :176-180.2. LiF, Wang D，Li S，Yan H，Zhang J, Wang B，Xiang J. A Dorsal homolog(FcDorsal) in the Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis is responsive to both bacteria and WSSV challenge. Dev Comp Immunol，2010，34(8) :874-883.3. Wang PH，Wan DH, Gu ZH，Deng XX，Weng SP, Yu XQ, He JG. Litopenaeus vannamei tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (TRAF6)responds to Vibrio alginolyticus and white spot syndrome virus (WSSV) infection and activates antimicrobial peptide genes. Dev Comp Immunol，2011，35(1) :105-114.4. Sun C，Shao HL，Zhang XW，Zhao XF，Wang JX. Molecular cloning and expression analysis of signal transducer and activator of transcription (STAT) from the Chinese white shrimp Fenneropenaeus chinensis. Mol Biol Rep,2011.5. Antony SPiSingh IS, Sudheer NS，Vrinda SiPriyaja PiPhilip R. Molecular characterization of a crustin-like antimicrobial peptide in the giant tiger shrimp， Penaeus monodon, and its expression profile in response to various immunostimulants and challenge with WS SV. Immunobiology,2011，216 (1-2) 184-194.6. Wu W, Zong R，Xu J，Zhang X. Antiviral phagocytosis is regulated by a novel Rab-dependent complex in shrimp penaeus japonicus. J Proteome Res, 2008, 7(1) :424-431.7. Wang Z，Hu L，Yi G，Xu H，Qi Y，Yao L，0RF390 of white spot syndrome virus genome is identified as a novel anti-apoptosis gene. Biochem Biophys Res Commun，2004，325(3) :899-907.8.Zhang X，Huang C，Qin Q. Antiviral properties of hemocyanin isolated from shrimp Penaeus monodon. Antiviral Res，2004，61 (2) :93-99.9. Mai WJ, Wang WN. Protection of blue shrimp (Litopenaeus stylirostris) against the White Spot Syndrome Virus (WSSV) when injected with shrimp lysozyme.Fish Shell本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．拟穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子Ｓｐ－ＡＬＦ２的基因序列为：ｃａｇｔａｔｇａａａ ｃｔｃｔｇａｔａｇｃ ｃｔｃｃｇｔｔｃｔｔ ｇｇａａａａｃｔｃａ ｃｔｇｇａｃｔｇｔｇ ｇｃａｃａａｃａａｃ ６０ｔｃａｇｔｇｇａｃｔ ｔｃａｔｇｇｇｃｃａ ｃａｃｃｔｇｔｃａｃ ｔｔｃｃｇｃｃｇｃｃ ｇｔｃｃｔａａｇｇｔ ｃａｇｇａａａｔｔｃ １２０ａａｇｃｔｇｔａｃｃ ａｃｇａｇｇｇｃａａ ｇｔｔｔｔｇｇｔｇｔ ｃｃｔｇｇｃｔｇｇｇ ｃｇｃｃｔｔｔｔｇａ ｇｇｇｃａｇｇｔｃｇ１８０ａｇｇａｃａａａｇａ ｇｃａｇｇｔｃｇｇｇ ｇｔｃａｔｃｃａｇｇ ｇａａｇｃｃａｔｃａ ａｇｇａｃｔｔｃｇｔ ｇｃｇｃａａａｇｃｔ ２４０ｔｔａｃａｇａａｃｇ ｇａｃｔｃａｔｃａｃ ａｃａｇｃａｇｇａｃ ｇｃｔａｃｇｇｔｇｔ ｇｇｇｔｇａａｔａａ ｔｔａａ ２９４。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘海鹏，陈荣元，王克坚，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：92
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