神经肽Corazonin和其受体基因及在桔小实蝇特异性控制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种桔小实蝇神经肽基因Corazonin及其受体基因Corazonin receptor以及扩增方法、编码蛋白质和应用，提供了桔小实蝇神经肽Corazonin基因如SEQ ID NO:9所示，其编码的蛋白质如SEQ ID NO:10所示；还提供桔小实蝇神经肽Corazonin配体的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示，其编码的蛋白质如SEQ ID NO:12所示；还提供桔小实蝇神经肽受体Corazonin receptor基因如SEQ ID NO:13所示，其编码的蛋白质如SEQ ID NO:14所示；还提供上述核苷酸和氨基酸序列的应用。

Neuropeptide Corazonin and its receptor gene and its application in specific control agent in Bactrocera dorsalis

The invention discloses a fly neuropeptide gene Corazonin and its receptor Corazonin gene and receptor amplification method, encoding protein and application, provides Bactrocera neuropeptide Corazonin gene such as SEQ ID NO:9 shown, its encoding protein is shown as SEQ ID NO:10; neuropeptide Corazonin ligands also provides Bactrocera nucleotide sequence of SEQ ID NO:11 shows, its encoding protein is shown as SEQ ID NO:12; Corazonin also provides Bactrocera neuropeptide receptor genes such as receptor SEQ ID NO:13 shown, its encoding protein is shown as SEQ ID NO:14; application also provides the nucleotide and amino acid sequence.

【技术实现步骤摘要】
神经肽Corazonin和其受体基因及在桔小实蝇特异性控制剂中的应用
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种神经肽Corazonin和其受体基因及在桔小实蝇特异性控制剂中的应用。
技术介绍
桔小实蝇(Bactroceradorsalis，Hendel),又名东方实蝇、黄苍蝇、果蛆，隶属双翅目Diptera，果实蝇科Tetriphitidae，该虫具有极强的环境适应能力和入侵扩散能力，主要为害柑橘、番石榴、芒果等46个科250多种果树、蔬菜和花卉，对我国的果蔬和花卉产业的健康发展造成巨大危害。目前，欧、美、日及东南亚等多个国家和地区已经将桔小实蝇列为重要的危险性检疫对象。在桔小实蝇的防治方面，化学杀虫剂的是防治措施的重要组成部分，包括有机磷杀虫剂、拟除虫菊酯和阿维菌素等，但是化学防治离我们的环保要求甚远，尤其是害虫抗药性的产生、环境残留、食品安全隐患等问题严重威胁着人类健康，因此，新型杀虫剂的研究开发有待继续进行。Corazonin(CZ)是普遍存在于昆虫体内存在的一类相对保守的神经肽，介导Corazonin作用的Corazonin受体是典型的G蛋白偶联受体(G-proteincoupledreceptor，GPCR)。在不同昆虫中，Corazonin信号系统具有多种不同的生理功能，如心率加速、体色改变、物质代谢增减、发育与生理节律调控、蜕皮延迟、吐丝减少等。在果蝇中,通过RNAi沉默技术或者转基因技术发现，Corazonin调控果蝇对饥饿、高渗、低氧等环境胁迫的响应。此外，果蝇Corazonin的表达随着个体发育发生了位置变化，其表达具有组织、时期和性别的特异性，表明Corazonin在果蝇中可能存在较为广泛的生理作用。而对烟草天蛾的研究表明，Corazoninreceptor对烟草天蛾的蜕皮行为具有调控作用，Corazonin是调控烟草天蛾蜕皮行为的一系列激素中最先被释放的激素，并且注射高剂量的Corazonin会导致幼虫蜕皮时间推迟。当前国际新药研发进入低谷，但是以G蛋白偶联受体(GPCR)为靶标的新药研发却一枝独秀，引领着全球新药研发的重大前沿。GPCR是细胞膜受体中的最大家族，具有7个特有的跨膜螺旋结构，在细胞信号转导过程中扮演重要角色。目前，昆虫中以GPCR作为靶标的新型农药鲜有报道，而在桔小实蝇中的研究和应用更少。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供桔小实蝇神经肽Corazonin及其受体的基因及扩增方法、编码的蛋白质及应用。在本专利技术的第一方面，提供一种桔小实蝇神经肽Corazonin基因及其编码的蛋白质，所述桔小实蝇神经肽Corazonin基因的核苷酸序列如SEQIDNO:9所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示。在本专利技术的另一方面，提供一种桔小实蝇神经肽Corazonin基因的扩增方法，包括如下步骤：提取桔小实蝇总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板采用巢式PCR的扩增方法，第一轮扩增的引物为Corazonin-F1和Corazonin-R1，第二轮扩增的引物为Corazonin-F2和Corazonin-R2，所述引物的序列为：Corazonin-F1：CAAACGGCTTTTTATTAAAAC，Corazonin-R1：CTACTAAATTCGTGTGGAGTC，Corazonin-F2：CATCATGTTCAAATTATTCTTC，Corazonin-R2：GCCATAATCATGTTTTAATGC。在本专利技术的另一方面，提供一种桔小实蝇神经肽Corazonin成熟肽(也称CorazoninGPCR配体)基因及其编码的蛋白质，所述桔小实蝇神经肽Corazonin配体的核苷酸序列如SEQIDNO:11所示，所述核苷酸序列编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQIDNO:12所示。在本专利技术的另一方面，提供一种桔小实蝇神经肽受体Corazoninreceptor基因及其编码的蛋白质，所述桔小实蝇神经肽受体Corazoninreceptor基因的核苷酸序列如SEQIDNO:13所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO:14所示。在本专利技术的另一方面，提供一种桔小实蝇神经肽受体Corazoninreceptor基因的扩增方法，包括如下步骤：提取桔小实蝇总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板采用巢式PCR的扩增方法，第一轮扩增的引物为CorazoninGPCR-F1和CorazoninGPCR-R1，第二轮扩增的引物为CorazoninGPCR-F2和CorazoninGPCR-R2，所述引物的序列为：CorazoninGPCR-F1：ACCTCGAAAAATCACTAAATGG，CorazoninGPCR-R1：CACATACTCCCCTCCACAGAC，CorazoninGPCR-F2：CTAAATGGAAGGTGCAAGTGTG，CorazoninGPCR-R2：CTCGCTTACACATTAGAGATATGC。在本专利技术的另一方面，提供一种前述的桔小实蝇神经肽Corazonin基因及其编码的蛋白质、桔小实蝇神经肽Corazonin成熟肽基因及其编码的蛋白质、或者桔小实蝇神经肽受体Corazoninreceptor基因及其编码的蛋白质，在实蝇神经调节方面的应用，在实蝇防治上的应用，或者在制备实蝇杀虫剂方面的应用。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的桔小实蝇神经肽受体Corazoninreceptor的配体多肽与Corazoninreceptor具有很好的结合能力，证明本专利技术提供的配体具有体外活性，提供的配体多肽和编码该配体多肽的DNA可以用于针对该GPCR开发药物，例如桔小实蝇神经调节剂。按照本专利技术中的重组G-蛋白偶联受体蛋白的表达体系以及受体结合测定系统，可以筛选桔小实蝇神经肽Corazonin特异性的激动剂和拮抗剂(对模式配体活性有促进作用的为激动剂，对模式配体活性起拮抗作用的为拮抗剂)，所获得的激动剂或拮抗剂可以用于桔小实蝇的防治，在制备实蝇杀虫剂方面有潜在的应用前景。附图说明图1为桔小实蝇神经肽Corazonin成熟肽对Corazonin受体的活性测定结果图。图2为RNA干扰后Corazoninreceptor基因的相对表达量。图3为RNA干扰后幼虫化蛹时间及化蛹率统计图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。主要试剂及生产者：2×PrimeSTARMaxPremix(Takara公司，日本)RNA提取试剂盒、反转录试剂盒(天根公司，中国)pGEM-TEasyVector(Promega公司，美国)DNA连接试剂盒(Takara公司，日本)Trans5α感受态细胞(Transgen公司，中国)pcDNA3.1(+)质粒(Invitrogen公司，美国)酶NotI(NEB公司，美国)质粒提取试剂盒(QIAGEN，德国)DMEM/F-12medium(Gibco公司，美国)T4DNA连接酶(Takara公司，日本)水母素Aequorin质粒由美国堪萨斯州立大学提供ViaFect转染试剂(Promega公司，美国)腔肠素CoelanterazineH储存溶液(Life-technologies公司，美国)CHO细胞(西南大学昆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种桔小实蝇神经肽Corazonin基因及其编码的蛋白质，其特征在于，所述桔小实蝇神经肽Corazonin基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。

【技术特征摘要】
1.一种桔小实蝇神经肽Corazonin基因及其编码的蛋白质，其特征在于，所述桔小实蝇神经肽Corazonin基因的核苷酸序列如SEQIDNO:9所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示。2.一种权利要求1所述的桔小实蝇神经肽Corazonin基因的扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：提取桔小实蝇总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板采用巢式PCR的扩增方法，第一轮扩增的引物为Corazonin-F1和Corazonin-R1，第二轮扩增的引物为Corazonin-F2和Corazonin-R2，所述引物的序列为：Corazonin-F1：CAAACGGCTTTTTATTAAAAC，Corazonin-R1：CTACTAAATTCGTGTGGAGTC，Corazonin-F2：CATCATGTTCAAATTATTCTTC，Corazonin-R2：GCCATAATCATGTTTTAATGC。3.一种桔小实蝇神经肽Corazonin配体基因及其编码的蛋白质，其特征在于，所述桔小实蝇神经肽Corazonin配体的核苷酸序列如SEQIDNO:11所示，所述核苷酸序列编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQIDNO:12所示。4.一种桔小实蝇神经肽受体Corazoninreceptor基因及其编码的蛋白质，其特征在于，所述桔小实蝇神经肽受...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋红波，侯秋莉，陈二虎，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50