本发明专利技术公开了一种检测血友病致病基因F8基因和F9基因是否发生突变的试剂盒。该试剂盒的主要成分包括：(1)F8基因第1到第32外显子区PCR扩增与测序引物24对，(2)F9基因第1到第8外显子区PCR扩增与测序引物6对，(3)PCR扩增试剂，(4)PCR产物纯化试剂，(5)DNA测序试剂。本发明专利技术的试剂盒可用于检测血友病致病基因F8基因和F9基因的突变体，可以快速方便地查出致病基因的携带者以及病人，可应用于产前诊断，避免血友病胎儿的出生，降低血友病的发病率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物
，具体涉及检测血友病致病基因是否发生突变的试剂盒。
技术介绍
血友病(Hemophilia)，是一组由于血液中某些凝血因子的缺乏而导致患者产生严重凝血障碍的遗传性出血性疾病，男女均可发病，但绝大部分患者为男性。包括血友病 A(甲)、血友病B(乙)和因子XI缺乏症(曾称血友病丙)。前两者为性连锁隐性遗传，后者为常染色体不完全隐性遗传。血友病在先天性出血性疾病中最为常见，出血是该病的主要临床表现。血友病分多型，甲型血友病是一种常见的遗传性出血性疾病，由F8基因的突变导致该凝血因子功能缺陷所致的一种凝血功能障碍性遗传病。根据患者血浆凝血因子8活性和临床表现差异，临床上分成重型，中型和轻型。患者主要临床表现为复发性关节出血及血友病性关节病，血友病性假性瘤及囊肿。乙型血友病是凝血因子IX编码基因突变导致该凝血因子功能缺陷所致的一种凝血功能障碍性遗传病。以身体负重关节、软组织及粘膜等身体部位损伤后过量出血或自发性出血为其典型临床特征。根据患者血浆凝血因子9活性大小及其临床症状的差异，本病可分为重型，中型和轻型。甲型血友病呈X连锁隐性遗传，发病率约为1/5000男性活婴，女性患者极为罕见，约占血友病的80%。F8基因存在大量不同的突变，这些突变为临床上病人表型的各种显著差异提供了遗传学基础。乙型血友病也呈X连锁隐性遗传，发病率约为男性活婴的 1/30000，约占血友病的10%。研究表明，检测F8基因的STR位点、SNP位点能有效地进行甲型血友病的诊断；检测F9基因STR位点能够有效的进行B型血友病诊断。由于血友病缺乏根治措施，故通过携带者和患者的产前诊断可避免血友病胎儿的出生，对提高人口素质，减轻社会负担有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种采用DNA测序技术检测导致血友病发病的F8基因和F9 基因是否突变的试剂盒。本检测试剂盒主要包括以下成分(I)FS基因第1到第32外显子区PCR扩增与测序引物M对，各对引物序列见表 1 ；(2)F9基因第1到第8外显子区PCR扩增与测序引物6对，各对引物序列见表2 ；(3)常规PCR扩增试剂，如dNTP、Taq DNA聚合酶等；(4)常规PCR产物纯化试剂，如SAP酶、ExoI酶等；(5)常规DNA测序试剂，如BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液、HIDI溶液等。表1 F8基因第1-32外显子区的PCR扩增与测序引物序列权利要求1. 一种检测血友病致病基因F8基因和F9基因是否发生突变的试剂盒，其特征在于包括以下成分(1)F8基因第1到第32外显子区PCR扩增与测序引物M对，(2)F9基因第1 到第8外显子区PCR扩增与测序引物6对，(3)PCR扩增试剂，G)PCR产物纯化试剂，(5)DNA 测序试剂；所述的30对引物序列如下第 1 对F :5，-tgagcacatccagtgggtaa-3，，R :5，_ctaacccgatgtctgcacct_3， 第 2 对F -ttcaaatttgcctccttgct-S'，R -tttggcagctgcacttttta-3' 第 3 对F :5，-tgttggcagcaagcaaatac-3，，R :5，_aaaagagttgtaacgccacca_3， 第 4 对F :5，-tgtagaacctattggtgacaataaac-3，，R :5，_caggtgaaggaacacaaatgc_3， 第 5 对F -agacctgacatcaaagccaag-S'，R -cccatctccttcattcctga-S' 第 6 对F :5，-cacactgggagcagggaag-3，，R :5，_ctctgagatgccgagctgtt_3， 第 7 对F -cttggcaagagctgttggtt-3'，R -Batgtccccttcagcaacac-S' 第 8 对F :5，-ttcctgagacctccctgaag-3，，R :5，_catgtccattggagacaagg_3， 第 9 对F :5，-gaggccacttttatttatctgga-3，，R :5，_agctggagaaaggacca aca_3，第10对:F:5，-ttccacttgctcagaaacttca--3，，R 5' -atccagcaggcacgtttact-3‘第11对:F:5，-gccctggtacatgcctaaga-3，，R:5，-gtgcacatacaattcattcattatc-3，第12对:F:5，-tctcctcacattgggattgg-3，，R:5，-tgacagcatgtgagctagtgg-3，第13对:F:5，-ccaggcaatctgatggattt-3，，R:5，-gggccatcaatgtgagtctt-3，第14对:F:5，-agctcatggacctgctttgt-3，，R:5，-ctcggggtcaaatgtttcat-3，第15对:F:5，-cagaattttgtcacgcaacg-3，，R:5，-gatttcccctgcagctcata-3，第16对:F:5，-aaatgcttctcaggcaccta-3，，R:5，-gaacgtacacaaagataattatggaa-3，第17对:F:5，-cagcatccatcttctgtacca-3丨，，R :5‘-agcatggagcttgtctgctt-3‘第18对:F:5，-tcagaaagaccctgggaatg-3，，R:5，-cagtgggaagtggagaggag-3，第19对:F:5，-aatggacaacaaggataagcaa--3，，R 5' -tgtcttgagagatgacgagttca-3‘第20对:F:5，-tgtagcaatgtagattcttcctaagc-3'‘,R 5' -ccgtaataactctattgctcataagtg-3第21对:F:5，-agatgttggatgctgttgagaa--3，，R 5' -catatgcgtgcatgtgtctt-3‘第22对:F:5，-tgagctgagatcatgccact-3，，R:5，-aatgcctgtgtggttgtctg-3，第23对:F:5，-cagagcaagactccgtctca-3，，R:5，-tcactgtgttctctcagaatgc-3，第24对:F:5，-ccagatgcgtaggacagagtc-3丨，，R :51， -aggcttcaaggcagtgtctg-3‘第25对:F:5，-gccactatgcctatctccattc--3，，R 5' -gcgtgctggctgttagactc-3‘第26对:F:5，-gctccatgccctaaagagaa-3，，R:5，-agtgaaggttcccacactgg-3，第27对:F:5，-atcagactcccatcccaatg-3，，R:5，-gcttcttgaactcatatcctgaaa-3第28对:F:5，-ccactcttatttcaaggctcca--3，，R 5' -aaaggaagcagattcaagtaggaa-第29对:F:5，-ttctc本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种检测血友病致病基因Ｆ８基因和Ｆ９基因是否发生突变的试剂盒，其特征在于包括以下成分：（１）Ｆ８基因第１到第３２外显子区ＰＣＲ扩增与测序引物２４对，（２）Ｆ９基因第１到第８外显子区ＰＣＲ扩增与测序引物６对，（３）ＰＣＲ扩增试剂，（４）ＰＣＲ产物纯化试剂，（５）ＤＮＡ测序试剂；所述的３０对引物序列如下：第１对：Ｆ：５’－ｔｇａｇｃａｃａｔｃｃａｇｔｇｇｇｔａａ－３’，Ｒ：５’－ｃｔａａｃｃｃｇａｔｇｔｃｔｇｃａｃｃｔ－３’第２对：Ｆ：５’－ｔｔｃａａａｔｔｔｇｃｃｔｃｃｔｔｇｃｔ－３’，Ｒ：５’－ｔｔｔｇｇｃａｇｃｔｇｃａｃｔｔｔｔｔａ－３’第３对：Ｆ：５’－ｔｇｔｔｇｇｃａｇｃａａｇｃａａａｔａｃ－３’，Ｒ：５’－ａａａａｇａｇｔｔｇｔａａｃｇｃｃａｃｃａ－３’第４对：Ｆ：５’－ｔｇｔａｇａａｃｃｔａｔｔｇｇｔｇａｃａａｔａａａｃ－３’，Ｒ：５’－ｃａｇｇｔｇａａｇｇａａｃａｃａａａｔｇｃ－３’第５对：Ｆ：５’－ａｇａｃｃｔｇａｃａｔｃａａａｇｃｃａａｇ－３’，Ｒ：５’－ｃｃｃａｔｃｔｃｃｔｔｃａｔｔｃｃｔｇａ－３’第６对：Ｆ：５’－ｃａｃａｃｔｇｇｇａｇｃａｇｇｇａａｇ－３’，Ｒ：５’－ｃｔｃｔｇａｇａｔｇｃｃｇａｇｃｔｇｔｔ－３’第７对：Ｆ：５’－ｃｔｔｇｇｃａａｇａｇｃｔｇｔｔｇｇｔｔ－３’，Ｒ：５’－ａａｔｇｔｃｃｃｃｔｔｃａｇｃａａｃａｃ－３’第８对：Ｆ：５’－ｔｔｃｃｔｇａｇａｃｃｔｃｃｃｔｇａａｇ－３’，Ｒ：５’－ｃａｔｇｔｃｃａｔｔｇｇａｇａｃａａｇｇ－３’第９对：Ｆ：５’－ｇａｇｇｃｃａｃｔｔｔｔａｔｔｔａｔｃｔｇｇａ－３’，Ｒ：５’－ａｇｃｔｇｇａｇａａａｇｇａｃｃａａｃａ－３’第１０对：Ｆ：５’－ｔｔｃｃａｃｔｔｇｃｔｃａｇａａａｃｔｔｃａ－３’，Ｒ：５’－ａｔｃｃａｇｃａｇｇｃａｃｇｔｔｔａｃｔ－３’第１１对：Ｆ：５’－ｇｃｃｃｔｇｇｔａｃａｔｇｃｃｔａａｇａ－３’，Ｒ：５’－ｇｔｇｃａｃａｔａｃａａｔｔｃａｔｔｃａｔｔａｔｃ－３’第１２对：Ｆ：５’－ｔｃｔｃｃｔｃａｃａｔｔｇｇｇａｔｔｇｇ－３’，Ｒ：５’－ｔｇａｃａｇｃａｔｇｔｇａｇｃｔａｇｔｇｇ－３’第１３对：Ｆ：５’－ｃｃａｇｇｃａａｔｃｔｇａｔｇｇａｔｔｔ－３’，Ｒ：５’－ｇｇｇｃｃａｔｃａａｔｇｔｇａｇｔｃｔｔ－３’第１４对：Ｆ：５’－ａｇｃｔｃａｔｇｇａｃｃｔｇｃｔｔｔｇｔ－３’，Ｒ：５’－ｃｔｃｇｇｇｇｔｃａａａｔｇｔｔｔｃａｔ－３’第１５对：Ｆ：５’－ｃａｇａａｔｔｔｔｇｔｃａｃｇｃａａｃｇ－３’，Ｒ：５’－ｇａｔｔｔｃｃｃｃｔｇｃａｇｃｔｃａｔａ－３’第１６对：Ｆ：５’－ａａａｔｇｃｔｔｃｔｃａｇｇｃａｃｃｔａ－３’，Ｒ：５’－ｇａａｃｇｔａｃａｃａａａｇａｔａａｔｔａｔｇｇａａ－３’第１７对：Ｆ：５’－ｃａｇｃａｔｃｃａｔｃｔｔｃｔｇｔａｃｃａ－３’，Ｒ：５’－ａｇｃａｔｇｇａｇｃｔｔｇｔｃｔｇｃｔｔ－３’第１８对：Ｆ：５’－ｔｃａｇａａａｇａｃｃｃｔｇｇｇａａｔｇ－３’，Ｒ：５’－ｃａｇｔｇｇｇａａｇｔｇｇａｇａｇｇａｇ－３’第１９对：Ｆ：５’－ａａｔｇｇａｃａａｃａａｇｇａｔａａｇｃａａ－３’，Ｒ：５’－ｔｇｔｃｔｔｇａｇａｇａｔｇａｃｇａｇｔｔｃａ－３’第２０对：Ｆ：５’－ｔｇｔａｇｃａａｔｇｔａｇａｔｔｃｔｔｃｃｔａａｇｃ－３’，Ｒ：５’－ｃｃｇｔａａｔａａｃｔｃｔａｔｔｇｃｔｃａｔａａｇｔｇ－３’第２１对：Ｆ：５’－ａｇａｔｇｔｔｇｇａｔｇｃｔｇｔｔｇａｇａａ－３’，Ｒ：５’－ｃａｔａｔｇｃｇｔｇｃａｔｇｔｇｔｃｔｔ－３’第２２对：Ｆ：５’－ｔｇａｇｃｔｇａｇａｔｃａｔｇｃｃａｃｔ－３’，Ｒ：５’－ａａｔｇｃｃｔｇｔｇｔｇｇｔｔｇｔｃｔｇ－３’第２３对：Ｆ：５’－ｃａｇａｇｃａａｇａｃｔｃｃｇｔｃｔｃａ－３’，Ｒ：５’－ｔｃａｃｔｇｔｇｔｔｃｔｃｔｃａｇａａｔｇｃ－３’第２４对：Ｆ：５’－ｃｃａｇａｔｇｃｇｔａｇｇａｃａｇａｇｔｃ－３’，Ｒ：５’－ａｇｇｃｔｔｃａａｇｇｃａｇｔｇｔｃｔｇ－３’第２５对：Ｆ：５’－ｇｃｃａｃｔａｔｇｃｃｔａｔｃｔｃｃａｔｔｃ－３’，Ｒ：５’－ｇｃｇｔｇｃｔｇｇｃｔｇｔｔａｇａｃｔｃ－３’第２６对：Ｆ：５’－ｇｃｔｃｃａｔｇｃｃｃｔａａａｇａｇａａ－３’，Ｒ：５’－ａｇｔｇａａｇｇｔｔｃｃｃａｃａｃｔｇｇ－３’第２７对：Ｆ：５’－ａｔｃａｇａｃｔｃｃｃａｔｃｃｃａａｔｇ－３’，Ｒ：５’－ｇｃｔｔｃｔｔｇａａｃｔｃａｔａｔｃｃｔｇａａａ－３’第２８对：Ｆ：５’－ｃｃａｃｔｃｔｔａｔｔｔｃａａｇｇｃｔｃｃａ－３’，Ｒ：５’－ａａａｇｇａａｇｃａｇａｔｔｃａａｇｔａｇｇａａ－３’第２９对：Ｆ：５’－ｔｔｃｔｃａｇａａｇｔｇａｃａａｇｇａｔｇｇ－３’，Ｒ：５’－ｔｃｔｇｇａｇｇｃｃｔｔｃｔｃａｃａ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：秦胜营，贺林，陈培华，马端，陈伟坚，王桢媚，
申请(专利权)人：上海佰真生物科技有限公司，上海佰真基因组学与人类健康研究院，
类型：发明
国别省市：31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。