运用双重PCR引物检测禾草腥黑粉菌和雀麦腥黑粉菌的方法技术

本发明专利技术涉及使用PCR扩增技术检测禾草腥黑粉菌(TilletiafuscaEⅡ&EⅤ)和雀麦腥黑粉菌[T.bromi(Brockm.)Brockm]的方法，属于禾本科草种腥黑粉菌检测领域。本发明专利技术设计了6套引物，即通用外套引物、通用内套引物、T.fusca的外套引物和特异引物、T.bromi的外套引物和特异引物。通用外套引物用于菌丝基因组DNA或冬孢子的套式扩增，通用内套引物用于冬孢子的套式扩增，这两套引物用于扩增过程质量监测，检查所抽提的菌丝基因组DNA质量和冬孢子的挑取和破碎，避免检测过程中的假阴性。T.fusca和T.bromi的外套引物和特异引物可用于两种菌的菌丝基因组DNA双重特异PCR扩增，各自的外套引物与特异引物用于双重套式PCR特异扩增冬孢子DNA。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及使用PCR技术检测寄生于禾本科草种中禾草腥黑粉菌(7 fusca E II & E V )和雀麦腥黑粉菌的方法，属于禾本科草种腥黑粉菌检测领域。
技术介绍
早熟禾属(/^3L )植物中的许多种是优质的牧草和草坪草，在全国各地广泛种植， 以满足畜牧业及城市园林绿化建设的需要。草地早熟禾A pratensis L.的再生能力强， 抗寒性和秋季保绿性较好；加拿大早熟禾A compressaL.具发达的根系和根状茎，耐寒、 耐土壤干旱、耐瘠薄的能力优；一年生早熟禾A annua L.喜光，耐阴、耐旱性强，耐瘠薄 (谢可军等.10种早熟禾属植物的过氧化物酶同工酶分析.中国草地，2003，25(2): 30-33 )。目前，在进境禾本科草种中，早熟禾数量最多，每年约有2000多吨被引入中国。优良草种的引进，一定程度上促进了畜牧业的发展和改善了城市的环境水平，产生了较好的经济效益和社会效益。但同时，随着国外草籽的大量引进，外来危险性有害生物也随草籽进入，对我国城市园林绿化建设及农牧业生产安全造成潜在威胁。龚贤弟等(六月禾腥黑穗病菌的初步研究.植物检疫，，1991，5(6):本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种运用双重ＰＣＲ引物检测禾草腥黑粉菌和雀麦腥黑粉菌的方法，既能对菌丝基因组ＤＮＡ实现双重特异ＰＣＲ检测，又能对冬孢子实现双重套式ＰＣＲ检测，其特征在于，所设计的引物和用途如下：（１）设计腥黑粉菌属通用引物，序列如下：通用外套引物：ＩＧＳＵＦ１：ＧＧＡ　ＴＧＣ　ＡＴＴ　ＣＴＧ　ＧＧＧ　ＡＣＧ　ＴＩＧＳＵＲ１：ＧＴＡ　ＧＣＣ　ＴＴＧ　ＴＴＧ　ＣＴＡ　ＣＧＡ　ＴＣＴ　Ｇ通用内套引物：ＮＩＧＳＵＦ１：ＣＡＣ　ＣＧＣ　ＣＣＡ　ＡＧＣ　ＡＣＧ　ＴＡＣＮＩＧＳＵＲ１：ＧＡＣ　ＣＴＴＴＴＧ　ＧＧＧ　ＴＣＡ　ＡＡＣ　ＴＴＣ　ＴＣ通用外套引物用于腥黑粉菌属菌丝基因组ＤＮＡ或冬孢子套式扩增，扩增片段约为９００...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗加凤，廖芳，刘跃庭，刘鹏，张裕君，黄国明，
申请(专利权)人：天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，
类型：发明
国别省市：12