FGFR-Fc融合蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及疾病的治疗，尤其是与FGF过度表达相关的疾病的治疗。具体地，本发明专利技术涉及FGFR-Fc融合蛋白及其在治疗与血管新生调控相关的疾病中的用途。更具体地，本发明专利技术涉及分离的可溶性FGFR-Fc融合蛋白及其在制备用于治疗与血管新生调控相关的疾病的药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及疾病的治疗，尤其是与FGF过度表达相关的疾病的治疗。具体地，本专利技术涉及FGFR-Fc融合蛋白及其在治疗与血管新生调控相关的疾病中的用途。更具体地，本专利技术涉及分离的可溶性FGFR-Fc融合蛋白及其在制备用于治疗与血管新生调控相关的疾病的药物中的应用。
技术介绍
血管新生(Angiogenesis)是导致恶性肿瘤生长和转移的基本要素之一 。血管新生过程受多种因子的调节，有些因子促进血管新生，有些因子抑制血管新生，因而，血管新生的调控是一个十分复杂的动态平衡过程。抗血管新生治疗旨在通过阻断血管新生刺激因子或者用血管新生抑制因子阻止肿瘤中血管的新生，从而达到控制肿瘤生长的目的。目前已经知道相当数目的血管新生刺激因子，例如血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor， VEGF)、@ 千会IfiHISi (Fibroblast growth factor, FGF)、肝细胞生长因子Ofepatocyte growth factor, HGF)等，这些因子能刺激血管内皮细胞的分裂、分化和血管的形态发生。其中，VEGF是目前所知对血管新生最特异、最有效的生长因子。在肿瘤组织内的缺氧环境中，肿瘤细胞分泌大量的VEGF，诱导血管内皮细胞的分裂和迁移，最终建立肿瘤血管网络。众多动物试验证明，抑制VEGF能阻止血管新生，进而抑制肿瘤的生长。正因为此，VEGF及其受体是抗血管新生药物最重要的靶标，目前在临床试验中取得显著疗效的抗血管新生药物有贝伐单抗(Bevacizumab，商品名Avastin)，它能够直接阻断VEGF，抑制肿瘤血管的新生，于2004年被美国FDA批准上市作为结直肠癌的一线用药，是第一个被批准上市的通过抑制血管新生发挥抗癌作用的新药。Avastin是一种人源化的抗VEGF的单克隆抗体，由美国著名生物技术公司Genentech生产。在大规模三期临床试验中，Avastin与化疗联合用药可以显著延长多种肿瘤病人的生存时间，包括直肠癌、肺癌、乳腺癌、肾癌等。Avastin在临床上的成功具有划时代的意义，它证明以肿瘤血管系统为靶标的抗血管新生治疗是一个在临床上有效的治疗手段，为多种肿瘤的治疗开辟了一个全新的途径。在西方国家，Avastin已在肿瘤治疗上得到广泛应用，是目前全球销售额最大的药物之一。除了 Avastin，国际上还有若干个抗VEGF信号的药物正处于人体临床试验的后期，有望在将来几年进入临床应用。其中，美国生物技术公司Regeneron和Sanofi-Aventis 合作的AfliberC印t(或称VEGF-Trap)目前正在进行大规模第三期临床试验。Imclone 公司的抗VEGF受体II (VEGFR2)单克隆抗体药物IMC-1121B也在第三期临床试验。在国内，以抗血管新生为靶标的肿瘤药物新药也是目前新药开发的热点。国内有若干公司和科研机构正在研发针对VEGF及其受体，或其它血管新生靶标的药物。毫无疑问，这些新药将为癌症的治疗提供新的选择，给病人带来新的希望。抗VEGF药物在肿瘤的临床治疗上取得了重大的进展，但是，临床试验也显示抗VEGF治疗也存在相当大的局限。从肿瘤的治疗效果看，Avastin对直肠结肠癌病人能延长半数生存时间约3-4个月，对乳腺癌病人能延长半数生存时间约为7-8个月， 因此，Avastin并不能长期有效地抑制肿瘤血管的生长。因此，如何进一步提高抗血管新生的临床治疗效果是肿瘤研究者需要解决的问题，也是研究开发下一代抗血管新生药物的重点ο导致抗VEGF治疗失败或产生抗性的的根本原因可能在于肿瘤血管新生是受到多种因子控制的，尽管VEGF在血管新生中起到重要作用，但它不是唯一的血管新生刺激因子。同时，由于肿瘤细胞的非均质性和肿瘤微环境的复杂性以及机体的代偿性反应机制，当 VEGF的活性被长时间抑制，其它血管新生刺激因子便会被表达，从而使肿瘤血管的生长不再依赖于VEGF信号途径。美国加州大学旧金山分校Hanahan教授的小组研究了胰岛肿瘤在接受抗VEGFR2治疗过程中肿瘤表达血管生长因子的变化，发现在抗VEGF的治疗过程中有若干基因的表达发生了变化，其中最为突出的是FGF-2的表达显著增加，研究表明对抗VEGF治疗出现耐受的肿瘤中FGF，尤其是FGF-2的表达显著增加，从而再次激活血管新生，而阻断FGF信号途径后肿瘤再生则被抑制。由此可见FGF-2的过度表达与肿瘤获得逃逸抗VEGF治疗的能力有着密切的关系。因此，我们认为阻断FGF通路能够高效地阻止肿瘤血管新生，抑制肿瘤的生长，从而单独或与抗VEGF治疗相组合地治疗与血管新生有关的疾病。成纤维细胞生长因子(FGF)是结合肝素的生长因子家族，在哺乳动物中其具有22 个家族成员(FGF 1-14，16-23)。FGF在多种生物学功能上具有重要作用，例如细胞增殖、分化、迁移、血管新生和肿瘤发生等。成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor, FGFR)是与成纤维细胞生长因子家族成员相结合的受体。FGF可以结合FGFR并激活下游信号通路，在胚胎发生、发育、血管发生、血管舒张、神经调节、缺血保护、创伤愈合和肿瘤发生等生理和病理过程中起重要作用。现已证实，体内FGF/FGFR的过度表达与包括肿瘤(如纤维瘤、神经胶质瘤、黑色素瘤、前列腺瘤、淋巴瘤、白血病、泌尿系统癌等)、骨骼系统疾病(侏儒、颅缝早闭、软骨发育不全、黑棘皮症)和肾衰竭等多种疾病密切相关。已有报道称，FGF及其受体表达水平的提高有可能直接促进肿瘤细胞的存活和增殖，并且通过siRNA下调FGF显著降低了肝癌细胞的存活。因此，构建具有拮抗 FGF能力的FGFR-Fc融合蛋白有望阻断FGF通路，具有治疗与FGF过度表达相关疾病的潜能。目前在临床试验中以FGF及其受体为靶标的抗血管新生新药的研发相对较少，美国Five Prime公司研发的FP-1039处于一期临床招募志愿者阶段，FP-1039是由人FGFRl 整个细胞外结构域与人IgGl的Fc片段相融合而成的蛋白。而Wang和Olsen等人的研究均表明人FGFRl细胞外结构域的第一个Ig样结构域及其与第二个Ig样结构域之间的连接片段会抑制FGFRl与FGF的结合。因此，构建具有拮抗FGF能力的FGFR-Fc融合蛋白有望阻断FGF通路，从而有效抑制血管新生或者直接作用于肿瘤细胞并抑制其生长，有治疗与FGF过度表达相关疾病的潜能，达到治疗肿瘤等与血管新生有关的疾病的目的
技术实现思路
蛋白质的空间结构与其生物学功能具有密切的关系。FGFR的细胞外结构域的各 Ig-Iike结构域及连接片段的构象的不同直接影响其与FGF结合的能力，通过基因工程的方法构建不同长度的FGFR细胞外结构域片段与IgG Fc组成不同的融合蛋白，形成具有不同构象的融合蛋白，可以从中筛选获得高效结合FGF且具有生物学活性的融合蛋白。哺乳动物中有四个FGFR基因fgffRl-fgfR4。成纤维细胞生长因子受体由胞外区、跨膜结构域和胞内结构域组成，FGFR家族有许多个成员，其配体结合性质和激酶结构域各有不同，但是都具有相似的胞外区。它们的胞外区包含三个免疫球本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种分离的可溶性成纤维细胞生长因子受体（ＦＧＦＲ）的融合蛋白，其包含：源自ＦＧＦＲ　Ｉｇ样结构域中间功能性序列（ＩＦＳ）的部分、ＦＧＦＲ第二Ｉｇ样结构域（Ｄ２）、ＦＧＦＲ第三Ｉｇ样结构域（Ｄ３）和免疫球蛋白Ｆｃ区。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：房健民，李栋，
申请(专利权)人：烟台荣昌生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：37