本发明专利技术公开了一种地胆草提取物及其制备方法和用途。该地胆草提取物的制备方法是将地胆草的干燥全草或根用乙醇或水提取，再经过大孔吸附树脂柱纯化得到，其活性成分为咖啡酰奎宁酸类物质。本发明专利技术首次从广东民间应用广泛的草药地胆草中，提取并富集了具有抗呼吸道病毒作用的地胆草提取物，该提取物可用于制备抗呼吸道合胞病毒、抗副流感3型病毒或抗甲型流感病毒的药物或保健品。本发明专利技术不但为地胆草的民间应用提供了一定的科学依据，而且为开发安全、高效的新型抗呼吸道病毒药物提供了新资源。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药领域，特别涉及一种从中药地胆草(El印hantopus scaber)中得到的提取物及其制备方法和在制备抗病毒药物中的用途。
技术介绍
地胆草(El印hantopus scaber)为菊科(Compositae)地胆草属(El印hantopus) 植物，也叫地胆头、苦地胆、土公英，主要分布在我国的华南和西南地区，具清热、凉血、利湿的功效，该草药在我国广东民间应用广泛，用于治疗感冒、百日咳、黄疽、咽炎、结膜炎、肾炎、湿疹和虫蛇咬伤等，并收录于1977年版《中国药典》。地胆草中主要的化学成分有倍半萜类、黄酮类和咖啡酰基奎宁酸类化合物。现代药理研究表明，地胆草具有抗病毒、抑菌、抗肿瘤和解热等作用，其中，有研究报道地胆草的粗提物具有较好的抗呼吸道合胞病毒(RSV) 活性，但是，对地胆草的抗病毒活性部位及和活性成分没有研究报道。在国家知识产权局相关检索和中国期刊网、Scifinder Scholar的检索结果显示，未发现以咖啡酰奎宁酸类物质作为有效成分的地胆草提取物及其制备方法和在抗呼吸道病毒方面的用途的专利和文献。众所周知，呼吸道病毒感染是严重危害人类健康的传染性疾病之一，其中流感病毒、副流感病毒和呼吸道合胞病毒是呼吸道病毒感染的主要病原体。由于病毒是细胞内寄生的微生物，它的复制与宿主细胞的许多生化过程密切相关，因此，寻找能选择性地抑制病毒又不影响宿主细胞功能的抗病毒药物有一定困难；此外，病毒抗原的易变异性和抗病毒药物的耐药性等因素也给抗病毒药物的研究和开发造成困难。因此，目前FDA批准用于临床的抗病毒药比抗菌药少得多，而且还存在毒副作用和耐药性等问题。因此，亟需寻找和开发安全、高效的新型抗病毒药物。
技术实现思路
为了解决上述现有技术存在的缺点和不足，本专利技术的首要目的在于提供一种地胆草提取物。本专利技术的另一目的在于提供上述地胆草提取物的制备方法。本专利技术的再一目的在于提供上述地胆草提取物在制备抗病毒药物中的用途。本专利技术的目的通过下述技术方案实现一种地胆草提取物的制备方法，包括以下操作步骤(1)将地胆草全草或根部干燥和粉碎后，用质量百分比浓度为0 100%的乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，减压浓缩至无醇味，得到粗提物浸膏；或将地胆草全草或根部干燥和粉碎后，采用水提醇沉法提取，提取液过滤，浓缩，得到粗提物浸膏；(2)将粗提物浸膏用蒸馏水溶解成粗提液，经大孔吸附树脂纯化得到地胆草提取物。步骤⑴所述用质量百分比浓度为0 100%的乙醇溶液提取的次数为1 3次， 每次提取1 3小时。步骤(2)所述经大孔吸附树脂纯化得到地胆草提取物是先将粗提液流经大孔吸附树脂柱，用蒸馏水洗脱柱子，用薄层色谱(TLC)分析跟踪，直至流出液在硅胶薄层板上展开后喷洒质量百分比浓度5%的FeCl3Z醇溶液显蓝色或蓝黑色斑点；再用质量百分比浓度50 60%的乙醇溶液洗脱柱子，用薄层色谱(TLC)分析跟踪，直至流出液在硅胶薄层板上展开后喷洒质量百分比浓度5%的FeCl3乙醇溶液不显色；收集乙醇溶液洗脱柱子的流出液，回收溶剂，浓缩，干燥，得到地胆草提取物。步骤(1)所述地胆草是菊科地胆草属植物。步骤(1)所述水提醇沉法是按制药工业常规的方法进行提取。一种根据上述方法制备得到的地胆草提取物，包括以下活性成分3，5-0_ 二咖啡酰奎宁酸、3，4-0-二咖啡酰奎宁酸、4，5-0-二咖啡酰奎宁酸、3，5-0-二咖啡酰奎宁酸甲酯、 3,4-0- 二咖啡酰奎宁酸甲酯、4，5-0- 二咖啡酰奎宁酸甲酯和5-0-咖啡酰奎宁酸。以地胆草提取物的干品重量计算，地胆草提取物中总酚的质量百分含量> 50%。上述的地胆草提取物在制备抗病毒药物或保健品中的用途。所述病毒为呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感3型病毒(PIV 3)或甲型流感病毒 (FluA, H1N1)。所述抗病毒药物含有治疗有效量的地胆草提取物和药学上可接受的载体。本专利技术相对现有技术具有如下的优点及有益效果(1)首次从广东民间应用广泛的草药地胆草中，提取并富集了具有抗呼吸道病毒作用的地胆草提取物，抗病毒实验表明该提取物具有很强的抗呼吸道合胞病毒(RSV)和副流感3型病毒(PIV 3)的活性，而且细胞毒性小，因此其抗RSV和PIV 3的选择性指数 (Si值，SI = CC50/IC50)高于阳性对照药病毒唑；另外，该提取物还具有一定的抗甲型流感病毒的活性，其抗甲型流感病毒的SI值与病毒唑的相当。(2)明确了该地胆草提取物主要由活性很好的咖啡酰奎宁酸类物质组成。(3)本专利技术不但为地胆草的民间应用提供了一定的科学依据，而且为开发安全、高效的新型抗呼吸道病毒药物提供了新资源。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1 取菊科地胆草属草药地胆草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥根200g，粉碎，分别用2000mL质量百分比浓度为95%的乙醇水溶液回流提取2 次，每次1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到粗提物浸膏；称取大孔吸附树脂(DlOl) 500g,加蒸馏水800mL，搅拌均勻，用水浮选法除去树脂单体或碎片，然后在室温下放置24h，待树脂充分溶胀后，将树脂抽干，再用乙醇湿法装柱， 用乙醇流动清洗柱子至流出液与水的体积比为1 5混合时不呈白色浑浊，然后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇的味道，放置过夜平衡柱子，得到大孔树脂柱。将上述粗提物浸膏用500mL蒸馏水溶解，过滤，滤液缓缓流过上述处理和平衡过的大孔树脂柱中，用蒸馏水继续洗柱子，洗脱过程用TLC分析跟踪，水洗脱过程直至流出液在硅胶薄层板上展开后、喷洒质量百分比浓度5 %的FeCl3乙醇溶液显蓝色或蓝黑色斑点即停止。接着再用质量百分比浓度50 60%的乙醇溶液洗脱柱子，流出液同上用TLC分析跟踪，直至流出液在硅胶薄层板上展开后、喷洒质量百分比浓度5 %的FeCl3乙醇溶液不显色， 收集流出液，回收溶剂，浓缩、冷冻干燥得到地胆草提取物1。以提取物干品重量计算，该地胆草提取物中总酚的质量百分含量> 50%。实施例2 将200g地胆草的干燥根粉碎，用2000mL的蒸馏水回流提取3小时，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，在搅拌下加入质量百分比浓度95%的乙醇溶液至乙醇含量为质量百分比浓度80%，静置24小时，滤取上清液，减压回收乙醇至无醇味，得得到粗提物浸膏。粗提物浸膏经大孔吸附树脂柱纯化得地胆草提取物2，纯化方法与实施例1 一致。以提取物干品重量计算，地胆草提取物中总酚的质量百分含量> 50%。实施例3 将200g地胆草的干燥根粉碎，分别用2000mL的蒸馏水回流3次，每次1 3小时，过滤，合并滤液得粗提物浸膏。粗提物浸膏经大孔吸附树脂柱纯化得地胆草提取物3，纯化方法与实施例1 一致。以提取物干品重量计算，地胆草提取物中总酚的质量百分含量> 50%。实施例4 地胆草提取物的总酚含量测定(比色法)在IOmL容量瓶中，加入待测物(本专利技术地胆草提取物)的丙酮_水溶液8ml，然后加入Folin-Ciocalteau试剂0. 5mL，摇勻，放置1分钟。再加入质量百分比浓度为20%硫酸钠溶液1.5mL，摇勻，放置1小时。在750nm下测定吸收度。同时在另一容量瓶中加本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种地胆草提取物的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：（１）将地胆草全草或根部干燥和粉碎后，用质量百分比浓度为０～１００％的乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，减压浓缩至无醇味，得到粗提物浸膏；或将地胆草全草或根部干燥和粉碎后，采用水提醇沉法提取，提取液过滤，浓缩，得到粗提物浸膏；（２）将粗提物浸膏用蒸馏水溶解成粗提液，经大孔吸附树脂纯化得到地胆草提取物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李药兰，叶文才，吴霞，王国才，王英，张晓琦，张冬梅，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：81
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