一种从紫锥菊提取物中非柱分离和纯化菊苣酸的方法，称取3～5%的紫锥菊提取物,加入提取溶剂，加酸调节pH为2～4，超声提取,离心得到上清液；按每毫升上清液加入0.1-0.3g无机混合盐；搅拌，超声溶解，离心使溶液分成上下两相，其上下相的体积比约为1:8～12，菊苣酸分配在上相，实现菊苣酸的分离与富集；加入上相溶液2-3倍体积的氯仿和无水乙醇，减压蒸发，得到菊苣酸的含量为25-40%的深黄色粉末。比原料中菊苣酸的纯度提高了近10倍。本发明专利技术操作常简单，回收率高，分离速度快，避免了原料和能耗的损失，有效降低成本。用到的有机溶剂和盐都可以通过回收利用，能有效的节约成本。
Method for separating and purifying chicory acid from Echinacea extract by non column chromatography
From a non separation column of Echinacea extract and purification method of cichoric acid, called Echinacea extract from 3 to 5%, with the extraction solvent, adding acid to adjust pH to 2 ~ 4, ultrasonic extraction, centrifugal supernatant; by joining the 0.1-0.3g inorganic salt mixture per ml of supernatant; stirring, ultrasonic dissolving. The centrifugal solution is divided into the upper and lower phase, the phase volume ratio is 1:8 to 12, the distribution of cichoric acid in the upper phase, realize the separation and enrichment of cichoric acid; adding the aqueous solution of 2-3 times the volume of chloroform and ethanol, vacuum evaporation, the content of cichoric acid is deep yellow powder 25-40%. The purity of chicory acid was almost 10 times higher than that of raw material. The operation of the invention is simple, the recovery rate is high, the separation speed is fast, the loss of raw materials and energy consumption is avoided, and the cost is effectively reduced. The organic solvents and salts used can be effectively saved by recycling.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及从紫锥菊提取物中提纯和制备菊苣酸的方法。尤其是一种。
技术介绍
紫锥菊的主要成分包括咖啡酸衍生物，烷基胺和多糖，经研究咖啡酸衍生物中的菊苣酸具有明显的免疫调节功能，能够降解自由基，抑制HIV-I整合酶，促进T细胞生产，保护被HIV-I感染的细胞等功能。因此，菊苣酸成为了人们争相研究的对象，成为了国际上备受关注的一种免疫促进剂和免疫调节剂，其药物制剂已经在北美、欧洲和澳大利亚广为流行。目前，在我国，市场上已有紫锥菊提取物规模化的生产，但菊苣酸的含量一般只有4%左右。因此，这种低含量的提取物在一定程度上阻碍了菊苣酸的研发和应用，满足不了人们日益增长的需要，有效提取菊苣酸的方法的研发迫在眉睫。Nigel B. Perry等人(J. Agric. Food Chem, 2001, 49 G) 1702-1706)利用制备色谱制得了纯度95%的菊苣酸对照品。吴启林和曾栋等曾利用大孔吸附树脂(柱色谱)分离纯化紫锥菊提取物中的菊苣酸，其纯度分别提高5倍和9倍。但是色谱设备要求高，成本高，不易放大，特别是柱色谱操作步骤繁琐， 耗时费力，回收率低，难于实现大规模的工业生产。现有的技术中还没有能从紫锥菊提取物中利用非柱色谱分离和纯化菊苣酸的工艺。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从紫锥菊提取物中非柱色谱分离和纯化菊苣酸的工艺。以避免使用昂贵的制备色谱设备，以及繁琐耗时的大孔吸附柱色谱，操作简单，所用试剂廉价且易于回收，反应条件温和，能够实现菊苣酸的初步纯化，实现工业化生产，有利于制备高纯度菊苣酸的进一步开发利用。本专利技术包括以下步骤(1)溶解提取称取3 5%的紫锥菊提取物，按提取物与溶剂的质量比为1:10 20 加入提取溶剂，加酸调节pH为2 4，超声提取20 50min，在IOOOOrpm离心3 6min， 得到上清液；所述提取溶剂是有机溶剂与水的混合物，其有机溶剂与水的体积比为1:2-6，(2)富集取一定体积上清液，按每毫升上清液加入0.1-0. 3 g无机混合盐；搅拌，超声溶解2min，在IOOOOrpm条件下离心3 6min，，溶液分成上下两相，其上下相的体积比约为 1 8 12，菊苣酸分配在上相，实现菊苣酸的分离与富集；(3)干燥纯化加入上相溶液2-3倍体积的氯仿和无水乙醇，所述氯仿和无水乙醇的体积比为1:2-4 ；减压蒸发，反复操作三次，得到菊苣酸含量为25-40%的深黄色粉末。所述有机溶剂是甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、或石油醚或它们的混合物。所述无机混合盐为硫酸钠、硝酸铵、硫酸镁、氯化钾、磷酸氢二钾，硫酸铵、或氯化钠中的两种或两种以上的混合物。本专利技术的优点本方法步骤简单，可在常温常压下操作，反应条件温和，能很好的保持菊苣酸的生物活性，回收率高，分离速度快，能够高效地将菊苣酸从紫锥菊提取物中分离出来，避免使用大量非极性有机溶剂和剧烈机械振动所带来的原料和能耗的损失，有效降低成本。另外，实验中用到的有机溶剂和盐都可以通过回收，重复利用，改变了其他方法中有机溶剂回收困难的问题，能有效的节约生产成本。该方法易于进行连续化操作，设备简单，可直接与后续提纯工序相连接，无需进行特殊处理，易于实现工业化生产。附图说明图1为实施例1的高效液相色谱图。图中的A代表菊苣酸提取的上清液；B代表分配富集后的下层溶液；C代表分配富集后的上层溶液稀释5倍的色谱图，1代表目标物菊苣酸。具体实施例方式实施例1 (1)溶解提取过程取3g3. 6%的菊苣酸提取物，加入50ml提取溶剂，本实施例的提取溶剂是乙腈水 =1:4，用少量酸调节pH为4，超声提取30min，在IOOOOrpm调节下离心5min，即可得到上清液，一次提取效率在98%以上。(2)分配富集过程量取40ml上清液，加入8g无水硫酸镁和2g氯化钠，搅拌，超声2min，促使盐溶解，原来均一的溶液逐渐出现分层现象，以IOOOOrpm离心5min，得到具有明显界限的两层。其中菊苣酸所处的上层溶液体积约为細1，约占原溶液体积的1/10，该步骤的菊苣酸回收率为 85%。(3)干燥纯化过程取細1上相溶液，加入IOml氯仿和无水乙醇(体积比为l:3)，50°c条件下减压蒸馏，反复操作三次，可以得到0. 25g深黄色粉末，其中菊苣酸的含量为3696，整个菊苣酸纯化过程中的回收率达到了 83%。实施例2: (1)溶解提取过程取100g4%的菊苣酸提取物，加入IlOOml提取溶剂；本实施例的提取溶剂是丙酮水 =1:2，用甲酸调节PH约为3，超声提取30min，在IOOOOrpm调节下离心5min，即可得到上清液，提取效率在95%以上。(2)分配富集过程取IlOOml上清液，加入多少120g磷酸氢二钾和60g氯化钠，搅拌，超声促使盐溶解，原来均一的溶液逐渐出现分层现象，IOOOOrpm离心5min，得到具有明显界限的两层。其中菊苣酸所处的上层溶液体积为130ml。(3)干燥纯化过程取130ml上层溶液，加入300ml氯仿和无水乙醇(体积比为1 3)，50°C条件下减压蒸馏，反复操作三次，可以得到Ilg深黄色粉末，其中菊苣酸的含量约为3096，菊苣酸回收率达到了 81%。 实施例3 (1)溶解提取过程取1000g4. 5%的菊苣酸提取物，加入20000ml乙醇和水的混合物，本实施例的提取溶剂是乙醇水=1:2，用170ml甲酸调节pH约为2，超声提取30min，在1OOOOrpm调节下离心5min，即可得到上清液，提取效率在95%以上。(2)分配富集过程取20000ml上清液，加入3000g硫酸铵和750g氯化钾，搅拌，超声促使盐溶解，原来均一的溶液逐渐出现分层现象，1OOOOrpm离心5min，得到具有明显界限的两层。其中菊苣酸所处的上层溶液体积为2500ml。(3)干燥纯化过程取2500ml上层溶液，加入5000ml氯仿和无水乙醇(体积比为1 3)，50°C条件下减压蒸馏，反复操作三次，可以得到130g深黄色粉末，其中菊苣酸的含量约为28%’菊苣酸回收率达到了 80%ο权利要求1.，其特征在于，包括以下步骤(1)溶解提取称取3 5%的紫锥菊提取物，按提取物与溶剂的质量比为1 10 20 加入提取溶剂，加酸调节pH为2 4，超声提取20 50min，在IOOOOrpm离心3 6min， 得到上清液；所述提取溶剂是有机溶剂与水的混合物，其有机溶剂与水的体积比为1:2-6 ；(2)富集取一定体积上清液，按为每毫升上清液加入0.1-0. 3 g无机混合盐；搅拌，超声溶解2min，在IOOOOrpm条件下离心3 6min，，溶液分成上下两相，其上下相的体积比约为1:8 12，菊苣酸分配在上相，实现菊苣酸的分离与富集；(3)干燥纯化加入上相溶液2-3倍体积的氯仿和无水乙醇，所述氯仿和无水乙醇的体积比为1:2-4，减压蒸发，反复操作三次，得到菊苣酸含量为25-40%的深黄色粉末。2.根据权利要求1所述的，其特征在于，所述有机溶剂是甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、或石油醚或它们的混合物。3.根据权利要求1所述的，其特征在于，所述无机混合盐为硫酸钠、硝酸铵、硫酸镁、氯化钾、硫酸铵、磷酸二氢钾或氯化钠中的两种或两种以上的混合物。全文摘要一种从紫锥菊提取物中非柱分离和纯化菊苣酸的方法，称取3～5%的紫锥本文档来自技高网...
【技术保护点】
１． 从紫锥菊提取物中非柱色谱分离和纯化菊苣酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（１）溶解提取：称取３～５％的紫锥菊提取物，按提取物与溶剂的质量比为１：１０～２０加入提取溶剂，加酸调节ｐＨ为２～４，超声提取２０～５０ｍｉｎ，在１００００ｒｐｍ离心３～６ｍｉｎ，得到上清液；所述提取溶剂是有机溶剂与水的混合物，其有机溶剂与水的体积比为１：２－６；（２）富集：取一定体积上清液，按为每毫升上清液加入０．１－０．３ ｇ无机混合盐；搅拌，超声溶解２ｍｉｎ，在１００００ｒｐｍ条件下离心３～６ｍｉｎ，，溶液分成上下两相，其上下相的体积比约为１：８～１２，菊苣酸分配在上相，实现菊苣酸的分离与富集；（３）干燥纯化：加入上相溶液２－３倍体积的氯仿和无水乙醇，所述氯仿和无水乙醇的体积比为１：２－４，减压蒸发，反复操作三次，得到菊苣酸含量为２５－４０％的深黄色粉末。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈波，李圣军，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：43
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