本发明专利技术涉及一种启动子BgIosP522及其制备方法和用途，所述启动子含有选自以下任意一组并具有启动子功能的核苷酸序列：a、SED?ID?NO：1所示的核苷酸序列；b、与SED?ID?NO：1互补的核苷酸序列；c、在高等严紧条件下能够与上述a或b的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；d、对上述a或b所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的置换、缺失、添加修饰的核苷酸序列；e、与上述a或b所示核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列。本发明专利技术还涉及所述启动子在调控单子叶植物或双子叶植物中目的基因表达以及育种的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因调控领域。具体而言，本专利技术涉及一种启动子，具体是水稻的启动 子BgIosP522，以及所述启动子的制备方法。本专利技术还涉及所述启动子在调控单子叶植物或 双子叶植物中目的基因表达的用途。
技术介绍
启动子是基因的一个组成部分，通常位于结构基因5’端上游，是RNA聚合酶识别、 结合和开始转录的一段DNA序列。启动子能够指导全酶(holoenzyme)同模板正确结合，活 化RNA聚合酶，启动基因转录，从而控制基因表达(转录)的起始时间和表达的程度。在转 基因植物中，启动子是影响转基因表达效率的重要因素之一，选择高效率的启动子是高效 率表达外源基因的关键。根据启动子的转录模式可将其分为3类组成型启动子、组织或器官特异性启动 子和诱导型启动子。所谓组成型启动子是指在组成型启动子调控下，不同组织器官和发育 阶段的基因表达没有明显差异，因而称之组成型启动子。双子叶植物中最常使用的组成型 启动子是花椰菜花叶病毒(CaMV) 35S启动子。另一种高效的组成型启动子CsVMV是从木薯 叶脉花叶病毒(cassava vein mosaic virus)中分离的。人们高度重视从植物本身克隆组成型启动子。例如肌动蛋白(actin)和泛素 (ubiquitin)等基因的启动子已被克隆。用这些启动子代替CaMV 35S启动子，可以更有效 地在单子叶植物中驱动外源基因的转录。Naomi等分别从拟南芥的色氨酸合酶β亚基基因 和植物光敏色素基因中克隆了相应启动子，用其代替CaMV 35S启动子，在转基因烟草中也 取得了很好的表达效果(Plant biotechnology, 2002,19(1) :19-26)。单子叶植物基因中常见的启动子有山bi启动子(Plant ubiquitin promoter)、 Actin 启动子(Plant Actin promoter)禾口 Adh-I 启动子(Maize alcohol dehydrogenase lpromoter)。Ubi启动子以其启动效率高、甲基化程度低、遗传性状稳定等因素而倍受青睐。目 前，已经从很多泛素基因中分离得到启动子序列，包括玉米基因组中的WDi-I启动子、水稻 泛素RUBQ2启动子、拟南芥泛素启动子、向日葵泛素WdBI启动子、烟草泛素Ubi. U4启动子、 马铃薯泛素证丨7启动子、番茄泛素W^il-I启动子，大麦泛素Mubl启动子。玉米泛素W^i-I 启动子已经广泛地应用于玉米、小麦、水稻等单子叶植物中，水稻泛素RUBQ2启动子在水稻 和甘蔗中也有较多的应用。Actin启动子1990年由康奈尔大学的McElroy等首次在水稻中发现，属于强组成 型启动子。Actin启动子在单子叶禾本科中作用显著，但是邻近科属的植物中的基因调控功 能却十分不理想。因此，许多相关研究通过其他单子叶植物寻找Actin启动子，并成功在香 蕉、甜瓜、玉米和拟南芥中陆续发现。Actin启动子由于对基因表达的强调控作用，在单子叶 植物优良性状的转基因中已经得到越来越广泛的应用。Adh-I启动子调控乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase)基因，对植物在缺氧环境下乙醇脱氢酶的表达至关重要。Adh-I启动子对单子叶植物特别是谷类植物如水稻、燕麦 和大麦，和少部分双子叶植物如烟草，基因的调控功能比花椰菜花叶病毒CaMV 35S启动子 提高10-50倍。Adh-I启动子主要应用于单子叶植物，对绝大部分双子叶植物基因表达的调 控效果都很有限。单子叶植物是被子植物的主要类群，单子叶植物中的禾本科、百合科、棕榈科和天 南星等，是非常重要的农业作物。单子叶植物基因的强效启动子，能够调控植物高效率表达 具有特殊性状的外源基因，对优良作物的分子育种研究意义重大。在强效启动子相关研究领域，发现并验证了许多单子叶植物的启动子。此外，双子 叶植物中的一些强效启动子如CsVMV启动子、番茄E8启动子、白藜芦醇合酶基因Vstl启动 子等高效启动子，在单子叶植物中也有很强的基因调控作用。尽管已经有上述已知的单子叶植物的启动子，本专利技术人通过对水稻基因组的深入 研究，提供了一种新的单子叶植物启动子，所述启动子能够用于调控单子叶植物和双子叶 植物中目的基因表达，同时为研究单子叶植物和双子叶植物中目的基因表达提供了一种新 的工具和选择。
技术实现思路
在第一方面中，本专利技术提供了一个具有启动子活性的启动子基因BgIosP522。所述 启动子的核苷酸序列如SEQ ID N0:1所示。TAGGTGCCATCTACCAACTTGGATCTCTGATATCAATGTTTTTGGTGGGTAGTAGAATAATATGTCAT TTATGTTTGTTTTTTGGCCTTCAATTTTCTCAATCATCTTTCACTCTGATTATGTGCATGATTTCTCCCATCCTTG TATTACATTCAGTAGCTTCAGACATATTAGTGGAGCTAGGGAAAGGCATATCTATCCTAATTGTGATTATCATAT CAAGTGCTACCACAGATGATCTGCAAGACTACTACATGGCTGGAATTGTTTGAAGGCACTCTTGGCATAGACTTG TCAAATTAGTGGTGAATATGTCTTCTGCAGCCATCTGTCTCCTGATCTACTAGAACAATGTGTGCCACAGAAGGG ACCCAGCATACAACAAACAACTCACTGCTGGAGTTGTTATCACCCAAACACCAACAGGAAATTCTTGTGAATTTC AATGGTCAGGACAGGTTCATGGATGTCATATATCAGGACATCTCCACCGTCGAAACTCGAAAGACGCCTATGGGC AACAGTTCCTGGTGAAATGCACCCACAGAAAGCCAGAATTCTTCATCATCCAGCCAGGGATGATCCTTATTTATG GACCGCGTATCGCGAAGAAGAAAAAACTCTGTTTTTACATGGTACACAAAAAAAAGGGAAAGGAAAATCATGGGG AGGAAATCATGTTGCCAGGGTCAGGACAAAGGAGGTGGTGGCAAGAGGATTGGAGCAACCAAAGCAGAGCCATTC ATATCCAGGAGGCCAACCTCCACCTCACAACTCATATCCCTTTTGCCCTTAAATCTGAGAAGTTGCTGCACTTCT CACCCCCCCTCTAAGGAAAGACTGCAAAGAAAAGGCCTGTGTCAAGGAGAGGGTAGTAGCACCTTGCTCTCCTTT GCCTTCAGAGAAACCGGAAGCACC(SEQ ID NO :1)。在一个实施方案中，本专利技术涉及含有选自以下任意一组并具有启动子功能的核苷 酸序列的启动子a、SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列；b、与SEQ ID NO 1互补的核苷酸序列；C、在高等严紧条件下能够与上述a或b的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；d、对上述a或b所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的置换、缺失、添加修饰的核 苷酸序列；以及e、与上述a或b所示核苷酸序列具有至少90%本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种启动子，所述启动子含有选自以下任意一组并具有启动子功能的核苷酸序列：ａ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示的核苷酸序列；ｂ、与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１互补的核苷酸序列；ｃ、在高等严紧条件下能够与上述ａ或ｂ的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；ｄ、对上述ａ或ｂ所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的置换、缺失、添加修饰的核苷酸序列；ｅ、与上述ａ或ｂ所示核苷酸序列具有至少９０％同一性的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种启动子，所述启动子含有选自以下任意一组并具有启动子功能的核苷酸序列a、SEQID NO 1所示的核苷酸序列；b、与SEQID NO 1互补的核苷酸序列；C、在高等严紧条件下能够与上述a或b的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；d、对上述a或b所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的置换、缺失、添加修饰的核苷酸 序列；e、与上述a或b所示核苷酸序列具有至少90%同一性的核苷酸序列。2.—种核酸构建体，包含权利要求1所述的启动子，以及与启动子可操作连接的基因 序列，其中所述启动子与所述基因序列来源相同或者不同。3.一种载体，含有权利要求1的启动子或权利要求2的核酸构建体，例如含有权利要求 1的启动子或权利要求2的核酸构建体的pMDIS-T质粒或p8质粒。4.一种重组细胞，含有权利要求1的启动子、权利要求2的核酸构建体或权利要求3的 载体，所述重组细胞例如为重组大肠杆菌细胞或重组农杆菌细胞。5.一种含有权利要求1的启动子、权利要求2的核酸构建体、权利要求3的载体或权利 要求4的重组细胞的植物愈伤组织、植物外植体或植物，所述植物可以为单子叶植物或双 子叶植物，优选稻属或烟草属，更优选水稻或烟草，最优选水稻日本晴或烟草NC89。6.一组引物对，所述引物对用于扩增得到权利要求1所述的启动子，其特征在于所述 引物对的两条引物分别含有SEQ ID NO :2和SEQ ID NO :3所示的序列，优选地，所述引物对 的两条引物在...
【专利技术属性】
技术研发人员：张耕耘，费小红，张卫，张厚宝，
申请(专利权)人：深圳华大基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：94
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