本发明专利技术公开了一种柑橘类植物Cit sh1基因的启动子、分子标记及应用，其中，柑橘类植物Cit sh1基因的启动子由SEQ ID:1～SEQ ID:6中任意一条的核苷酸序列组成。本发明专利技术通过获得易诱发人体上火等炎症反应相关蛋白Cit sh1的基因序列信息，对特异性引物进行改进，分别获得了柑橘类植物Cit sh1基因的启动子、基于柑橘类植物Cit sh1基因启动子序列差异的分子标记，能够有效解决现有的分子标记无法判断柑橘类植物是否诱发人体炎症的问题，并且该分子标记可以将上火柑橘品种和不上火柑橘品种有效地区分开来，为例如柑橘育种选育不上火品种提供支持。
【技术实现步骤摘要】
柑橘类植物Citsh1基因启动子、分子标记及应用
本专利技术属于柑橘类植物生物
，更具体的，涉及柑橘类植物Citsh1基因启动子、分子标记及应用，通过该分子标记对柑橘类植物(包括本地早、国庆1号、红夏橙以及高斑柚等)进行检测，得出该柑橘类植物是否诱发人体上火的结论。该分子标记可以将上火柑橘品种和不上火柑橘品种有效地区分开来，并且可为柑橘育种选育不上火品种奠定基础。
技术介绍
“上火”(热量增加)是一个非常流行的中医概念，起源于传统的中医理论，在亚洲被人们所熟知。“上火”症状主要包括嘴唇干裂、口腔灼热、嘴唇和喉咙发痒肿胀、脸变红、便秘、腹泻，体温升高等【13】。两千年以来，中国和印度人都坚信相对于人的身体来讲，食物有“热性”和“寒性”之分。这个区分和食物本身的温度没有关系，主要是就它们对食用者产生的影响而言的。人体很多生理、疾病状态都和“热性”、“寒性”相关，而和自身的体温无关【3,13】。传统上，人们认为荔枝、龙眼、宽皮柑橘、榴莲、椰子、花生等是“热性”食物，过量食用(剂量依赖性)会诱导产生“上火”症状。很多人都有过“上火”的经历，严重影响了他们的生活质量。“上火”患者坚信食物不耐受是导致他们产生“上火”症状的主要原因，并且饮食上剔除某些“热性”食物可以有效地缓解他们的症状。柑橘果实富含维生素C、类胡萝卜素，类黄酮和类柠檬苦素类等多种生物活性功能成分【11】，具有抗氧化、抗癌、预防心脑血管疾病等作用【4,5,12】，是含功能性成分最多的保健水果之一。另外，柑橘是世界上栽培面积最广泛以及消费最多的水果之一，在很多国家，柑橘以三种主要形式存在于人们的日常饮食中：鲜食、果汁以及罐头。在中国，柑橘品种繁多，但历来以宽皮柑橘为主，从产量上看，宽皮柑橘、橙、柚的比例分别为73.1％、13.5％以及12.2％【14】。经验上，温州蜜柑(宽皮柑橘)被认为是“热性”食物，容易引起“上火”；甜橙、柚不引起“上火”。因此，过多食用温州蜜柑果实后，很多食用者会出现“上火”症状，从而限制了柑橘产业的发展以及柑橘营养功能的发挥。“上火”是中医概念，在中国被广为接受，国际上尚未有报道；“过敏”是国际上报到最多的由水果诱导的疾病。水果过敏最常见的症状是口腔反应，该症状发病轻微，仅出现在口腔部位，表现为发痒、肿胀等，称为口腔过敏综合征(oralallergysyndrome,OAS)【8】,与“上火”出现的口腔症状非常相似。目前，国际上已分离出三种柑橘过敏原：Cits1(orangegermin-likeglycoprotein)、Cits2(profilin)、Cits3(lipidtransferprotein)。Cits1和Cits3均可以从甜橙果肉、果皮中分离得到，SDS-PAGE和免疫检测揭示，它们在果皮和果肉中含量相当；Cits2亦存在于甜橙果肉、果皮，其在果肉中的含量远高于果皮【1,2,7】。桃果实中与上述过敏原相对应的蛋白质是Prup1～Prup3，其中，Prup1在果皮和果肉中的平均含量分别为0.62ug/g、0.26ug/g鲜重；相应的，Prup3平均含量分别为132.86ug/g、0.61ug/g鲜重，表明Prup3主要存在于果皮中【9】。尽管上述柑橘过敏原(蛋白质)在一定程度上揭示了导致柑橘类水果诱发过敏的原因，能够在一定程度上对柑橘类水果提前进行过敏筛选，但这些过敏原往往并不是“上火”症状的主要诱因，过敏反应是机体自身的一种免疫反应，与摄入量无关，而“上火”症状既与摄入的水果类别有关，又与摄入量有关，并且，这些已发现的过敏原大部分位于果皮中，而大部分柑橘类水果主要是食用它们的果肉部分，对在实际中过敏筛选的效果并不明显。此外，由于过敏涉及的过敏原种类较多，且与机体(如人体)自身条件有关，人体对柑橘类水果过敏的案例较为罕见，而“上火”反应在人群中发生则较为普遍，因此，为减小柑橘类水果诱发的“上火”反应，在柑橘育种选育中对柑橘类植物“上火”性状的筛选更加必要。相关参考文献如下：【1】Ahrazem,O.,Ib,etal.(2005)."LipidTransferProteinsandAllergytoOranges."InternationalArchivesofAllergyandImmunology137(3):201-210.【2】Ahrazem,O.,Ib,etal.(2006)."OrangeGermin-LikeGlycoproteinCits1:AnEquivocalAllergen."InternationalArchivesofAllergyandImmunology139(2):96-103.【3】Anderson,E.N.(1980)."'Heating'and'cooling'foodsinHongKongandTaiwan."SocialScienceInformation19(2):237-268.【4】Benavente-Garcia,O.andJ.Castillo(2008)."UpdateonUsesandPropertiesofCitrusFlavonoids:NewFindingsinAnticancer,Cardiovascular,andAnti-inflammatoryActivity."JournalofAgriculturalandFoodChemistry56(15):6185–6205.【5】Lian,F.,K.Q.Hu,etal.(2006)."β-Cryptoxanthinsuppressesthegrowthofimmortalizedhumanbronchialepithelialcellsandnon-small-celllungcancercellsandup-regulatesretinoicacidreceptorβexpression."InternationalJournalofCancer119(9):2084-2089.【6】Livak,T.D.S.K.J.(2008)."Analyzingreal-timePCRdatabythecomparativeCTmethod."NatureProtocols3:1101-1108.【7】Lopez-Torrejon,G.,M.D.Ibanez,etal.(2005)."Isolation,cloningandallergenicreactivityofnaturalprofilinCits2,amajororangeallergen."Allergy60(11):1424-1429.【8】OrtolaniC,I.M.,PastorelloE,BigiA,AnsaloniR(1988)."Theoralallergysyndrome."AnnalsofAllergy61:47-52.【9】OussamaAhrazem,L.J.,GemaLópez-Torrejón,MaríaHerrero,JoséL.Espada,RosaSánchez-Monge,OscarDuffort,DomingoBarber,GabrielSalcedo(2007)."Assessingallerg本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种柑橘类植物Cit sh1基因的启动子，其特征在于，该启动子由SEQ ID:1～SEQ ID:6中任意一条的核苷酸序列组成。
【技术特征摘要】
1.一种柑橘类植物Citsh1基因的启动子，其特征在于，该启动子由SEQID:1～SEQID:6中任意一条的核苷酸序列组成。2.一种基于柑橘类植物Citsh1基因启动子序列差异的分子标记，其特征在于，该分子标记是通过特异性引物进行PCR扩增得到的，所述特异性引物的正向引物的碱基序列优选为ATTCTGGGAAATCAGGTGG，反向引物的碱基序列优选为AGAGGCTAGAAGCTCAATGTA。3.一种根据权利要求2所述的分子标记在检测和区分柑橘类植物是否引起炎症中的应用。4.一种特异性引物，其特征在于，该特异性引物为第一类引物、第二类引物和第三类引物中的任意一种，其中，所述第一类引物，其正向引物的碱基序列优选为GAGCTGGAACGTATTGGTG，反向...
【专利技术属性】
技术研发人员：马兆成，邓秀新，季群，吴金龙，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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