一种神经酰胺的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种从海葵中提取神经酰胺的方法，包括破碎、抽提、萃取、吸附、洗脱、蒸干、重结晶等步骤，得到纯度较高的神经酰胺。本方法操作简单，易放大生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，尤其涉及一种从海葵中提取神经酰胺的方 法。
技术介绍
神经酰胺(ceramide)即N-脂酰神经鞘胺醇，是细胞膜的组成成分_鞘磷脂的基 本单位，由一长链的鞘胺醇和连接在其氨基端的饱和脂肪酸组成。它是体内一类重要的生 物活性物质，主要存在于角质层中的细胞膜和细胞间基质中。神经酰胺是人体皮肤最外侧的角质层细胞间类脂体的主要构成成分(> 50% )， 起着防止水分散发、滋润和保护皮肤的重要作用。近年来开发的最新一代神经酰胺保湿剂， 是水溶性脂质物质，它和构成皮肤角质层的物质结构相近，能很快渗透进皮肤，和角质层中 的水结合，形成一种网状结构，锁住水分。有许多研究报告指出，使用含神经酰胺的外用膏 类产品，可防止过敏性皮肤病和抑制黑色素褐斑。因此神经酰胺作为一种新型化妆品添加 剂，有着广阔的市场空间。在日本这种新颖的美容原料正在以每年15%左右的增长率迅速发展，市场的需求 不断扩大。神经酰胺除了作为化妆品的添加剂，在功能性食品中的应用也非常广泛，成为一 大热点。神经酰胺在服用后，经小肠吸收，转移到血液，然后运送到全身，使皮肤细胞得到良 好的恢复和再生，同时还可以促使人体自身合成神经酰。神经酰胺的来源非常广泛，可以从众多的海洋生物如海星、海葵、海绵、珊瑚中得 到，也可以从被囊类动物和某些高等植物如大豆、洋葱中得到。但是现在提取神经酰胺的主 要方法如高效液相色谱法、薄层色谱法等，受到实验仪器和成本的制约，一般不适用于大规 模生产。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是提供，此方法具有工艺简单， 容易放大的特点。本专利技术所述的神经酰胺的提取方法，是以海葵为原料，通过以下步骤提取1)破碎把海葵用自来水清洗干净，晾干，粉碎；2)抽提称取破碎好的海葵原料，加入1-3倍体积95%工业乙醇，在50_60°C搅拌 3_4h，静置使固形物沉淀，倒出抽提液，重复抽提3-5次，合并抽提液，用0. 45 μ m滤膜过滤， 减压浓缩得浸膏；3)萃取将浸膏悬浮于30-60倍体积水中，以与水等体积乙酸乙酯搅拌萃取3_4h， 静置分层后取出乙酸乙酯层，重复萃取2-3次，合并萃取液，减压浓缩得焦油状脂类混合 物；4)吸附取萃取的脂类混合物溶于二氯甲烷，上大孔树脂色谱柱吸附，用2-5倍柱 体积的正己烷洗柱；35)洗脱用极性逐渐增大的正己烷/乙醇进行梯度洗脱，通过神经酰胺苯甲酰化 UV法检测洗脱液，合并含神经酰胺的洗脱液；6)蒸干减压蒸干洗脱液，得到物质固体；7)重结晶将上一步的到的固体物质溶于50-80°C丙酮，搅拌溶解，减压浓缩，于 4-10°C结晶，减压抽滤收集晶体。进一步的，所述大孔树脂色谱柱填料选用中等极性大孔吸附树脂。本专利技术中所述 中等极性大孔树脂是含酯基的吸附树脂，且多功能团的甲基丙烯酸酯作为交联剂。其表面 兼有疏水和亲水两部分。既可极性溶剂中吸附非极性物质，又可由非极性溶剂中吸附极性 物质，也称为脂肪族吸附剂，例如聚丙烯酸酯型聚合物。本专利技术具有以下优点从海葵中提取神经酰胺的收率较高；不干扰海葵中其他天 然活性的提取；分离出来的神经酰胺纯度高，可以应用于化妆品原料和神经酰胺单体的分 离。由于本专利技术所述提取步骤为常规实验，因此操作简单，适用于大规模工业生产。具体实施例方式结合具体实施例进行说明。实施例1取新鲜的海葵放入水中浸泡，冲洗干净，放在室外晾干，用搅拌机打碎。称取500g 破碎海葵加入500ml的95%工业乙醇，在60°C搅拌3小时。停止搅拌，待固体物质沉淀下 去收集抽提液，反复3次，合并抽提液，用0. 45 μ m有机相滤膜过滤，然后用旋转蒸发仪浓 缩抽提液得15克浸膏。将浸膏悬浮于IL蒸馏水中，加入IL乙酸乙酯，搅拌4h，静置池分 层，抽取乙酸乙酯层。重复萃取2次，合并萃取液，减压蒸干乙酸乙酯，得到棕色固体6. 2g。 把此固体溶于IOml 二氯甲烷，上10*180mm苯乙烯型CG161大孔树脂柱(罗门哈斯)，上样 流速为0. 2ml/min。用20ml正己烷洗柱，流速为0. 5ml/min。然后用极性逐渐增大的正己 烷/乙醇进行梯度洗脱，流速为0. 5ml/min，用苯甲酰化UV法检测后合并含有神经酰胺的洗 脱液。旋转蒸发有机溶剂后得到粗制神经酰胺固体0.2g。将得到的固体溶于70°C的丙酮 2ml中，搅拌至溶解，放入4°C冰箱结晶，减压抽滤通过0. 45 μ m有机相滤膜，得神经酰胺结 晶 0. 041g。权利要求1.，其特征在于以海葵为原料，通过以下步骤进行提取1)破碎把海葵用自来水清洗干净，晾干，粉碎；2)抽提称取破碎好的海葵原料，加入1-3倍体积95%工业乙醇，在50-60°C搅拌 3_4h，静置使固形物沉淀，倒出抽提液，重复抽提3-5次，合并抽提液，用0. 45 μ m滤膜过滤， 减压浓缩得浸膏；3)萃取将浸膏悬浮于30-60倍体积水中，用与水等体积乙酸乙酯搅拌萃取!3h-4h，静 置分层后取出乙酸乙酯层，重复萃取2-3次，合并萃取液，减压浓缩得焦油状脂类混合物；4)吸附取萃取的脂类混合物溶于二氯甲烷，上大孔树脂色谱柱吸附，用2-5倍柱体积 的正己烷洗柱；5)洗脱用极性逐渐增大的正己烷/乙醇进行梯度洗脱，通过神经酰胺苯甲酰化UV法 检测洗脱液，合并含神经酰胺的洗脱液；6)蒸干减压蒸干洗脱液，得到物质固体；7)重结晶将上一步得到的固体物质溶于50-80°C丙酮，搅拌溶解，减压浓缩，于 4-10°C结晶，减压抽滤收集晶体。2.根据专利要求1所述的神经酰胺的提取方法，其特征在于大孔树脂色谱柱填料选 用中等极性大孔吸附树脂。全文摘要本专利技术提供了一种从海葵中提取神经酰胺的方法，包括破碎、抽提、萃取、吸附、洗脱、蒸干、重结晶等步骤，得到纯度较高的神经酰胺。本方法操作简单，易放大生产。文档编号C07C233/20GK102093244SQ201010575340公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月6日 优先权日2010年12月6日专利技术者张巍, 徐彬, 郑春阳 申请人:天津强微特生物科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种神经酰胺的提取方法，其特征在于：以海葵为原料，通过以下步骤进行提取：　　１）破碎：把海葵用自来水清洗干净，晾干，粉碎；　　２）抽提：称取破碎好的海葵原料，加入１－３倍体积９５％工业乙醇，在５０－６０℃搅拌３－４ｈ，静置使固形物沉淀，倒出抽提液，重复抽提３－５次，合并抽提液，用０．４５μｍ滤膜过滤，减压浓缩得浸膏；　　３）萃取：将浸膏悬浮于３０－６０倍体积水中，用与水等体积乙酸乙酯搅拌萃取３ｈ－４ｈ，静置分层后取出乙酸乙酯层，重复萃取２－３次，合并萃取液，减压浓缩得焦油状脂类混合物；　　４）吸附：取萃取的脂类混合物溶于二氯甲烷，上大孔树脂色谱柱吸附，用２－５倍柱体积的正己烷洗柱；　　５）洗脱：用极性逐渐增大的正己烷／乙醇进行梯度洗脱，通过神经酰胺苯甲酰化ＵＶ法检测洗脱液，合并含神经酰胺的洗脱液；　　６）蒸干：减压蒸干洗脱液，得到物质固体；　　７）重结晶：将上一步得到的固体物质溶于５０－８０℃丙酮，搅拌溶解，减压浓缩，于４－１０℃结晶，减压抽滤收集晶体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑春阳，张巍，徐彬，
申请(专利权)人：天津强微特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：12