本发明专利技术涉及能够表达两个或多个同源外源序列的重组痘病毒载体，其中外源序列来源于微生物的不同变种，之间具有50％或更高的同源性。本发明专利技术进一步涉及制备这种重组痘病毒的方法以及这种重组痘病毒作为药物或疫苗的应用。此外，本发明专利技术还提供一种影响优选为诱导活体动物包括人的免疫反应的方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
表达插入痘病毒基因组中的同源基因的重组痘病毒本案是申请日为2003年5月14日、中国申请号03811106. 3、专利技术名称为“表达插入痘病毒基因组中的同源基因的重组痘病毒”的专利技术申请的分案申请。本专利技术涉及能够表达两个或多个同源外源基因的重组痘病毒，其中所述基因与病毒基因组异源，但相互之间具有同源性。所述基因尤其来源于微生物非常相关的变种或亚型。本专利技术进一步涉及制备这种重组痘病毒的方法以及这种重组痘病毒作为药物或疫苗的应用。此外，本专利技术还提供一种对活体动物包括人的免疫反应进行影响优选为诱导的方法。
技术介绍
每一个活生物体经常受感染性或致病因子如细菌、病毒、真菌或寄生虫的挑战。生物体的所谓免疫系统能够阻止它们免受这些致病因子引起的持久感染、疾病或中毒。哺乳动物的免疫系统可分成特异性和非特异性部分，虽然这两部分紧密交联。非特异性免疫反应能够介导对广泛不同的病原体或感染因子(agent)的即时防御。特异性免疫反应在当生物体第一次受到物质的挑战后，于迟滞期后形成。特异性免疫反应主要是因为产生了抗原特异性抗体，并形成巨噬细胞和淋巴细胞，如细胞毒素T-细胞(CTL)。之所以称为特异性免疫反应，是基于下述事实，生物体个体受到特异性感染后能够痊愈，但对其它感染病仍然易感。通常，同样的或非常类似的感染因子的第二次感染引起非常温和的症状或根本没有发病的症状。这种所谓的免疫持续非常长的时间，有的甚至持续终生。这种潜在效果通常称为免疫记忆，对此可以用于接种疫苗。术语接种疫苗描述一种方法，其中用无毒、部分或失活形式的感染因子攻击个体， 影响优选诱导所述个体的免疫反应，导致即使不是终生但长时间持续的对特异感染因子的免疫抵抗。人所患的天花疾病是由于天花(Variola)病毒引起的。天花病毒属于痘病毒科 (Poxviridae)，这是具有复杂DNA大的病毒科，可在脊椎动物和无脊椎动物细胞的细胞质中复制。根据寄生在脊椎动物和昆虫的不同宿主范围，可将痘病毒科分成两个亚科即脊椎动物痘病毒亚科(Chordopoxvirinae)和昆虫痘病毒亚科(Entomopoxvirinae)。脊椎动物痘病毒亚科包括正痘病毒属(Orthopoxviruese)和禽痘病毒属(Avipoxviruse)以及其它一些属的病毒(Fields Virology, ed. by Fields B. N. ,Lippincott-Raven Publishers, 3rd edition 1996，ISBN :0-7817-0253_4，Chapter 83)。正痘病毒属包括引起人患天花的病原即天花病毒，和其它非常重要的病毒，如骆驼痘病毒、牛痘病毒、绵羊痘病毒、山羊痘病毒、猴痘病毒和痘苗病毒。该属中的所有成员具有遗传相关性，相似的形态和宿主范围。限制性内切酶图谱甚至表明正痘病毒属的不同成员之间具有高至90%的序列同一性(Mackett & Archard, , J Gen Virol,45 683-701)。使用了至少100年的针对天花的疫苗接种的疫苗称为痘苗病毒(VV)。不清楚的是，VV是否是来源于通过延长的连续传代的痘苗病毒或牛痘病毒-目前已根除的活的代表物或者是遗传重组的产物。此外，在W的历史过程中，形成了许多痘苗株系。不同株系表现出不同的免疫原性，并涉及不同程度的潜在的并发症，最严重的可引起接种后脑炎。然而， 许多这些株系用于针对天花的接种。例如NYCBOH、Western Reserve或Wyeth株系主要在美国使用，而Ankara、Bern、Copenhagen、Lister和MVA菌株在欧洲使用。WHO在1980年实施的VV不同株系的全球接种计划而最终宣告天花病毒被成功根除。至今，VV主要在实验室中使用的实验菌株，除此之外，仍然被认为是正痘病毒属的原型，这也是为什么VV成为研究最为详细的病毒之一的原因所在(Fields Virology, ed. by Fields B. N. , Lippincott-Raven Publishers,3rd edition 1996，ISBN :0-7817-0253-4, Chapter 83 and 84)。VV和其它最近应用的痘病毒已被用于插入和表达外源基因。将外源基因插入到活的感染性痘病毒的基本技术包括，供体质粒上位于侧接外源遗传元件的痘病毒DNA序列与拯救痘病毒中存在的同源序列之间的重组。遗传重组通常是两条DNA链中的同源部分之间的交换。某些病毒RNA可以取代DNA。核酸的同源部分可以是具有相同核苷酸碱基序列的核酸序列(DNA或RNA)。在被感染的宿主细胞中，新病毒基因组的产生和复制过程中可能自然发生遗传重组。因此，宿主细胞被两个或更多不同病毒或其它遗传构建体感染时，在病毒的复制循环过程中，病毒基因之间可能发生遗传重组。来自第一基因组的DNA序列部分在构建与第二共感染的病毒中交换使用，其中所述DNA与第一病毒基因组的DNA之间具有同源性。通过修饰感染性病毒而使插入的DNA遗传序列的成功表达要求两个条件。第一， 插入在病毒的非必需区域以使被修饰病毒仍然能够成活。表达所插入DNA的第二个条件是存在着与插入DNA合适关联的启动子。通常，启动子位于要表达的DNA序列的上游。利用重组VV表达，如肝炎B病毒表面抗原(HBsAg)、流感病毒血凝素QnfHA)、或诺尔斯氏疟原虫孢子体抗原(Plasmodium knowlesi sporozoite antigen)，以作为活性疫苗预防疾病的感染，这些用途已被证实并已有综述(Smith，et al. Biotechnology and Genetic Engineering Reviews 2,383-407)。VV的另一个优点是单VV基因组能够携带多个外源序列、基因或抗原的能力 (Smith & Moss ，Gene，25(1) :21-28)。而且，已有报道称用多价疫苗的单次接种能够激发对多个异源感染性疾病的免疫(Perkus et al. , , Science, Vol. 229,981-984) 0利用单个VV表达多个抗原的一个实例如Bray等所描述。重组VV能够表达登革 (Dengue)病毒血清型4的三个不同结构蛋白，即衣壳(C)、pre-membrane (prM)、包膜(E)蛋白，以及登革病毒血清型4的两个不同的非结构蛋白，即NSl和NS2a，其保护鼠抵抗对同源的登革病毒血清型 4 的攻击(Bray et al.，，Virology 2853-2856) 登革病毒有4个血清型，即登革病毒血清型I(Den-I)至登革病毒血清型 4(Den-4)。对于能够感染人而言，登革病毒是黄病毒(Flavivirus)属中重要的成员之一。 登革病毒感染导致的疾病范围可以是从类流感症状疾病到严重疾病或致死疾病，休克症状 (DSS)的登革出血热(DHF)。登革病毒爆发仍然是热带和亚热带人口密集地区公共健康的主要问题，因为这些地区有大量的传播媒介-蚊。由于登革病毒感染和其它由蚊介导黄病毒导致的疾病在全球许多地区传播，因此投入很大努力来能阻止登革热(DF)和登革出血热(DHF)的登革病毒疫苗的进展，并使接种的个体能够抵抗由某些或所有蚊介导黄病毒导致的本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种重组痘病毒，至少包含两个具有至少６０％同源性的同源外源基因，其中每一个所述基因插入到病毒基因组的不同插入位点。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：保罗·豪利，桑加·莱勒，
申请(专利权)人：巴法里安诺迪克有限公司，
类型：发明
国别省市：DK
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