用环介导恒温扩增技术检测贾第虫DNA的引物组、试剂盒、检测方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种用环介导恒温扩增技术检测贾第虫DNA的引物组，包括外部引物对(F3、B3)和内部引物对(FIP、BIP)，其中，F3具有SEQ?ID?No：1所示的序列，B3具有SEQ?ID?No：2所示的序列，FIP具有SEQ?ID?No：3所示的序列，BIP具有SEQ?ID?No：4所示的序列。本发明专利技术还公开了用上述引物组进行环介导恒温扩增反应，检测蓝氏贾第鞭毛虫(以下简称贾第虫)DNA的方法、检测用试剂盒以及上述引物组在制备贾第虫DNA检测剂中的应用。该检测方法通过设计4条贾第虫特异引物，实现了贾第虫DNA的LAMP快速检测，从而提高了贾第虫病的临床诊断速度和准确率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及寄生虫病诊断领域，尤其涉及一种利用环介导恒温扩增技术检测贾第虫DNA的方法。本专利技术还涉及一套用于该方法的引物组、检测用试剂盒以及该引物组在制备贾第虫DNA检测剂中的应用。
技术介绍
蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia Iamblia，简称贾第虫)广泛分布于世界各地，尤以热带和亚热带为最普遍，是人体肠道感染的常见寄生虫，感染率为10% 20%，特别是在经济欠发达和环境卫生相对较差的地区，人群的感染率更高。由该寄生虫感染引起的腹泻症状可通过水源、食物源等途径在人和动物之间广泛传播，甚至可能引起传染病的暴发或流行，是一种危害严重的人畜共患传染病病原。临床上诊断蓝氏贾第鞭毛虫病的传统方法是检测粪便中是否存在蓝氏贾第鞭毛虫滋养体或包囊。由于在慢性感染期，虫体是以低水平间歇性地排出的，因此，需要反复多次粪检(一般为隔日查一次，连续查3次)，并需与病毒性肠炎、细菌性痢疾或由细菌及其他原因引起的食物中毒及隐孢子虫病作鉴别；因此，这种传统的检测方法与临床经验有关，不仅费时费力，且存在一定的诊断难度。随着检测技术的不断提高，目前已建立了以聚合酶链反应(PCR)技术为基础的检测方法，可以提本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用环介导恒温扩增技术检测贾第虫ＤＮＡ的引物组，其特征在于：所述引物组包括外部引物对（Ｆ３、Ｂ３）和内部引物对（ＦＩＰ、ＢＩＰ），其中，Ｆ３具有ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：１所示的序列或其互补链，Ｂ３具有ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：２所示的序列或其互补链，ＦＩＰ具有ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：３所示的序列或其互补链，ＢＩＰ具有ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：４所示的序列或其互补链。

【技术特征摘要】
1.一种用环介导恒温扩增技术检测贾第虫DNA的引物组，其特征在于所述引物组包括外部引物对(F3、B3)和内部引物对(FIP、BIP)，其中，F3具有SEQ ID No 1所示的序列或其互补链，B3具有SEQ ID No 2所示的序列或其互补链，FIP具有SEQ ID No 3所示的序列或其互补链，BIP具有SEQ ID No :4所示的序列或其互补链。2.一种用环介导恒温扩增技术检测贾第虫DNA的方法，其特征在于，包括步骤(1)提取待测虫株的DNA；(2)用权利要求1所述的引物组，进行环介导恒温扩增反应；(3)根据扩增产物判定该虫株是否为贾第虫。3.如权利要求2所述的用环介导恒温扩增技术检测贾第虫DNA的方法，其特征在于， 所述步骤O)中，环介导恒温扩增的总反应体系为10 μ mol/L的FIP和BIP各2 μ 1、F3和 B3 各 0. 5μ 1，10mmol/L 的 dNTPs 1 μ l，5mol/L 的三甲铵乙内酯 5 μ 1，0. lmol/L 的 MgSO4 1. 5μ 1, IOXBst DNA 聚合酶缓冲液 2. 5 μ 1，Bst DNA 聚合酶 8U 1 μ 1，DNA 模板 5 μ 1，加双蒸水至25 μ 1。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：卢潍媛，曹建平，袁忠英，沈玉娟，尹建海，徐馀信，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，
类型：发明
国别省市：31