可室温贮存的免疫球蛋白静脉注射制剂制造技术

一种免疫球蛋白静脉注射制剂，在溶液状态下室温保存至少１年后仍能保持稳定，并且该制剂含有至多５μｇ／ｍｌ的人血清白蛋白、至多１６ｐｇ／ｍｌ的人单核细胞趋化性蛋白－１、至多３μｇ／ｍｌ的激活的人补体－３和至多１ｍｇ／ｄｌ的聚乙二醇。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种免疫球蛋白静脉注射制剂，更具体地说，是一种可室温贮存的免疫球蛋白静脉注射液体制剂。
技术介绍
在作为血浆蛋白成份的γ-球蛋白中，一种包含IgG的免疫球蛋白制剂已经被用来预防和治疗各种传染病。这种球蛋白的溶液形式是不稳定的。人们知道免疫球蛋白聚集的后果，也就是说，在分离操作过程中，免疫球蛋白形成多聚体或二聚体的变性后果是，其表现出补体结合能力即抗补体活性的显著增加，导致a)人体静脉给药后血清中补体浓度降低，或b)严重的副作用例如过敏性休克。因此，免疫球蛋白没有被制成液体制剂，而是制成无水制剂尤其是冷冻干燥剂型。然而，无水制剂伴随的问题是它不能方便地给药，因为在注射或类似使用时需先在蒸馏水中溶解。另一方面，与无水制剂相比，液体制剂在注射或类似使用时不用在蒸馏水中溶解，能方便地给药。然而，正如上面所描述的，它伴随的缺陷是免疫球蛋白的稳定性很差。因此，人们一直试图研制出能用于静脉给药的并且稳定的免疫球蛋白液体组合物。例如在JP-A-63-192724(这里使用的术语“JP-A”表示一个“尚未审查的已公开的JP申请”(美国专利4,876,088，EP278422))中公开了一种能用于静脉注射的免疫球蛋白液体组合物，所述的组合物甚至在溶液形式时也很稳定，具有低的传导度，pH值是5.5±0.2，含有山梨糖醇作为稳定剂。JPA-58-43914(美国专利4,396,608和4,499,073，EP73371)中公开，为了获得一种基本上不含有免疫球蛋白聚集物，且血清免疫球蛋白单体含量超过90％的免疫球蛋白组合物，将一种血清免疫球蛋白溶液被调节到离子强度不到0.001，pH值为3.5-5.0。JP-A-9-124507(EP76447)公开了一种为了降低免疫球蛋白抗补体活性，在pH为3.5-5.0条件下降低免疫球蛋白溶液离子强度的步骤，此步骤为病毒灭活步骤后用三-(正丁基)磷酸酯处理免疫球蛋白。JP-A-7-238036(EP702960)公开了改善免疫球蛋白的稳定性的方法，可通过酸处理或贮存在室温中抑制免疫球蛋白的聚集，也就是说，不仅抑制免疫球蛋白多聚体，还抑制免疫球蛋白二聚体的增多。JP-W-59-501546(这里使用的术语“JP-W”表示一个尚未审查的已公开的日本国际专利申请，WO 84-891)公开了将pH为5-5.6并有0.05-2W/V％聚乙二醇(PEG)存在的免疫球蛋白制剂进行超滤处理的方法。然而，即使考虑到上面公开的各种步骤的效果，但仍存在进一步改善免疫球蛋白制剂的室温贮存稳定性的余地，尤其是免疫球蛋白溶液的室温贮存稳定性。JP-A-63-8340(美国专利4,762,714和4,948,877，EP240856)中公开了一种制备其中基本上不含有获得性病毒的血清免疫球蛋白制剂的方法，通过在pH约为5.4或更低些条件下用冷的乙醇分级分离方法包括从人血浆中得到血清免疫球蛋白，将血清免疫球蛋白在pH为4.25或更低些条件下贮存至少3天，或在pH为6.8或更低些和温度至少45℃条件下贮存以便基本上不含有传染性还原病毒。然而，上面描述的专利技术的目的是灭活还原病毒。它没有报道因此获得的免疫球蛋白制剂改善了免疫球蛋白聚集问题方面。WO 95-3826公开了一种免疫球蛋白制剂，其中含有0.1g/L或更低的非离子表面活性剂作为维持溶液状态的稳定剂，并基本上不含有白蛋白。然而，由于此专利中公开的检测方法的灵敏度不高，当污染白蛋白含量为1％或更少时用WO 95-3826的方法不能被检测到。JP-A-63-183539(美国专利5,132,406，EP246579)公开了一种制备免疫球蛋白静脉注射制剂的方法，其中包括热处理步骤，用4-10％PEG进行分级分离处理回收上清液的步骤，和用10-15％PEG进行分级分离处理回收沉淀部分的步骤。正如上面所描述的，免疫球蛋白本质上是一种不稳定的蛋白，因此其液体组合物制备时的稳定性是人们最关心的问题之一。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是克服上面描述的问题并提供一种即使在溶液剂型下也具有好的贮存稳定性的免疫球蛋白制剂。本专利技术的这个以及其它目的已经通过下述方法达到了(1)一种制备免疫球蛋白静脉注射制剂的方法，包含以下步骤 用4-10W/V％，分子量1000-10000的PEG在pH值为4.5-6.5，离子浓度为0.0001-0.1M，温度0-4℃的条件下分级分离一种含有免疫球蛋白的水溶液，回收含有免疫球蛋白的上清液馏份；在pH为3.5-5.0条件下浓缩上清液馏份；(2)根据上面的步骤(1)制备免疫球蛋白静脉注射制剂的方法，其中进一步包括至少一个，优选全部下面的步骤，病毒灭活处理步骤，阴离子交换处理回收没被吸收馏份的步骤，用平均孔径为1-100nm的多孔膜进行过滤处理的步骤，用硅胶接触处理，回收没被吸收馏份的步骤；(3)根据上面的步骤(1)或(2)制备的免疫球蛋白静脉注射制剂，尤其是含有未经化学修饰的完全以分子形式存在的免疫球蛋白，pH值为5-6，导电性为1mmho或更低的(在8℃测定的)免疫球蛋白液体静脉注射制剂，这种制剂制备后可以室温贮存至少1年，在贮存过程中能使抗补体活性维持在20单位或20单位以下并且免疫球蛋白的二聚体含量在7％或7％以下。具体实施例方式(1)原料含有免疫球蛋白的馏份被用作原料。此馏份不是特别限制为仅从人血清中得到的，并且含有免疫球蛋白。这种含有免疫球蛋白的馏份的特定例子包括使用Cohn的乙醇分离方法(E.J.Cohn et al.，J.Am.Chem.Soc.，68,459(1946))得到的馏份II+III和馏份II，和含有与其等同的免疫球蛋白馏份的糊状物。原料中可能含有杂质，例如人血型抗体、激肽释放酶、激肽释放酶原、IgM和IgG聚合物等。(2)方法(a)用聚乙二醇(PEG)处理将含有免疫球蛋白的馏份用低浓度的PEG处理，上清液回收。先将原料悬浮在合适的水溶剂中。在此，使用至少是所述馏份的2倍，优选5倍所述馏份体积的水溶剂。水溶剂含有氯化钠，磷酸钠，磷酸钾，乙酸，醋酸钠，柠檬酸，柠檬酸钠等。另外，含有免疫球蛋白的水溶剂的pH范围优选4.5-6.5之间，离子浓度范围优选0.0001-0.1M之间。得到的悬浮液用PEG处理，使用的PEG分子量为1000-10000，优选2000-6000。可将悬浮液进行处理，例如，可以通过在搅拌状态下将悬浮液和PEG混合，通常在0-4℃经过30分钟到6小时完成处理过程。推荐的处理条件是蛋白浓度是1-20W/V％，优选5-15W/V％；PEG浓度是4-10W/V％，优选4-8W/V％；pH值是4.5-6.5，优选5-6；离子浓度是0.0001-0.1M，优选0.0001-0.01M。将混合物离心，例如以6000-8000rpm离心10-30分钟，回收上清液。(b)在酸性pH条件下浓缩处理在此步骤中，将上面(a)处理中获得的上清液馏份在pH值为3.5-5.0(优选4-4.5)条件下浓缩。特别地，浓缩处理是使用一种超滤膜，此超滤膜的截留分子量约为100,000。浓缩处理可以在1-10kg/m2压力条件下进行。(c)阴离子交换剂处理本步骤包括将一种含有免疫球蛋白的馏份溶解到一种含水溶剂中，将溶液与一种阴离子交换剂混本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫球蛋白静脉注射制剂，在溶液状态下室温保存至少１年后仍能保持稳定，并且该制剂含有至多５μｇ／ｍｌ的人血清白蛋白、至多１６ｐｇ／ｍｌ的人单核细胞趋化性蛋白－１、至多３μｇ／ｍｌ的激活的人补体－３和至多１ｍｇ／ｄｌ的聚乙二醇。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：平尾丰，桥本元范，北村妙，上村八寻，
申请(专利权)人：三菱制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]