本发明专利技术涉及一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，属于生物制药领域。本发明专利技术在传统的５％低蛋白浓度的静注人免疫球蛋白的制备工艺的基础上，在提取过程中采用压滤法代替离心法；超滤时，将蛋白浓度调整至３％～６％，用０．５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ调ｐＨ至６．４～６．６，然后加１ｍｏｌ／Ｌ磷酸－ＮａＯＨ缓冲液调节电导率在Ｔ＝１９℃时测为０．１７５ｓ／ｍ～０．２０５ｓ／ｍ，调节好后，采用层析法，用离子交换柱进行上柱层析纯化；能够有效地去除杂蛋白，提高蛋白纯度，并且能够提高产品得率；使用麦芽糖或甘氨酸为保护剂，有利于提高静注人免疫球蛋白稳定性，甘氨酸作保护剂可满足了糖尿病患者临床使用；本发明专利技术可得到５－１１％蛋白浓度的静注人免疫球蛋白。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，属于生物制药领域。
技术介绍
静注人免疫球蛋白的活性成份为蛋白质，其中95%以上为免疫球蛋白。由健康人 血浆，经低温乙醇蛋白分离法(压滤分离法)分离纯化，去除抗补体活性并经病毒灭活处理 制成。目前，静注人免疫球蛋白生产品种一般都为5%低蛋白浓度的静注人免疫球蛋白，因 此，现有静注人免疫球蛋白临床使用时，输注的剂量相对较大，相对高浓度制品输注时间相 对较长；此外，达到血药浓度的时间相对较长。由于其生产方法为低温乙醇离心法，产品得 率低，稳定性不好，同时使用糖作为保护剂，不利于临床忌糖患者使用。为了使静注人免疫 球蛋白的产品得率进一步提高、稳定性增强、适应人群更广，开发出一种能制备出5-11%蛋 白浓度的性能更好的静注人免疫球蛋白的制备工艺显得十分必要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种采用低温乙醇压滤法与层析法相结合，同时针对临床使 用需求选用麦芽糖或甘氨酸作为保护剂制备出5-11%蛋白浓度的静注人免疫球蛋白的制 备工艺。本专利技术的目的是这样实现的在传统的5%低蛋白浓度的静注人免疫球蛋白的制 备工艺的基础上，在提取过程中采用压滤法代替离心法；超滤时，将蛋白浓度调整至3% 6%，用0. 5mol/L的NaOH调pH至6. 4 6. 6，然后加lmol/L磷酸一 NaOH缓冲液调节电导率 在T=19°C时测为0. 175 s / m 0.205s / m，调节好后，采用层析法，用离子交换柱进行 上柱层析纯化；能够有效地去除杂蛋白，提高蛋白纯度，并且能够提高产品得率；同时使用 麦芽糖或甘氨酸都为保护剂，优选方案为(1)按《中国药典》2010年版三部要求采集，且经复检合格并通过检疫期检疫合格的原 料血浆，在预融间，用75%乙醇消毒、再用低于35°C注射用水冲洗尽乙醇后，进行破袋；破 袋后输送到融浆罐，用30 35°C的循环水进行夹层循环融浆；血浆融化后，及时停止热水 循环，把血浆温度控制在0 4°C之间，取样送质检进行抗-HIV、HBsAg、抗-HCV、梅毒、ALT、 抗-HBs等检测；经过滤或离心，离心速度不大于4L/min/台，出液温度控制在0 4°C，分离 冷沉淀，冷沉淀用于VDI因子生产；将去除冷沉淀的血浆取样进行蛋白含量、组分分析、细菌 内毒素检测；将符合药典要求的去除冷沉淀的血浆输送至蛋白分离反应罐；控制该血浆的 温度在1 3°C之间，按不超过1. 0升/分钟的流速加入pH4. 0缓冲液调节pH值至6. 80 7. 00 ；再加入低于一 15°C的95%乙醇或50%乙醇，流速不超过1. 5升/分，使乙醇体积比 终浓度至8%，温度控制在一 1 一 3°C，加完乙醇后的pH值为6. 80 7. 20 ；搅拌30分钟 以上，进行离心，离心过程中出液流速不超过4升/分/台，出液温度控制在一 1 一 3°C， 离心得组分I沉淀和组分I上清液；(2)取上述组分I上清液，加pH4.0缓冲液调节组分I上清液的pH值为6. 80 6. 85，控 制流速不超过1. 0升/分钟，添加低于一 15°C的95%乙醇至乙醇体积比浓度为20%，温度 控制在一 4 一 6°C;加完乙醇后，pH为6. 80 7. 00 ；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以 上，再开启搅拌，按每升反应液加入18g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0. 20Mpa, 压滤后得组分II +III沉淀和组分II +III上清液；(3)取10 15倍上述组分II+III沉淀的重量的注射用水，用氯化钠调整注射用水的 钠离子浓度为0. 01mol/L ；加入搅拌机中开启搅拌，降温至0°C 3°C时，将上述组分II + III 沉淀倒入搅拌机中搅拌溶解；待沉淀完全溶解，在搅拌过程中以不大于0. 5升/分钟的流 量缓慢加入PH4.0缓冲液到反应液中，调整反应液的pH至5. 20士0. 1，控制反应液温度 为0°C -rC，加完pH4. 0缓冲液，继续搅拌至少10分钟；开启制冷循环，加低于-15°C的 95%乙醇，控制流速不大于1. 5升/分钟，使反应液最终的乙醇体积比浓度为17% ；反应液 最终温度控制在_4°C _6°C，加完乙醇继续搅拌2小时，静置4小时以上进行压缩过滤； 先用_4°C以下的压缩空气吹出滤器中的水，启动反应罐搅拌器，按每升反应液加入18g硅 藻土，使硅藻土与反应液混合均勻10分钟以上边搅拌边过滤，在过滤过程中保持出液温度 为-4 _6 °C，过滤压力不超过0. 2 Mpa，得压滤液上清；(4)上述压滤液上清计量后，启动反应罐搅拌器和制冷循环，控制温度为_4 -6°C， 进行深层过滤，过滤出液温度控制在_4 -6°C，过滤后用lmol/L的HCl调节pH为3. 8 4. 0，输入超滤透析罐中进行下道工序的脱醇、纯化；(5)开始对上述调节完毕pH值的过滤液进行超滤，浓缩至5%以上，用5倍体积的2 80C的注射用水进行透析；将蛋白浓度调整至3% 6%，用0. 5mol/L的NaOH调pH至6. 4 6. 6，然后加lmol/L磷酸一 NaOH缓冲液调节电导率在T=19°C时测为0. 175 s / m 0.205s / m，调节好后用离子交换柱进行上柱层析纯化；层析完毕用lmol/L的HCl调节pH为 3. 8 4. 0，开启超滤机浓缩至5%以上，用5倍体积2 8°C注射用水进行透析，使乙醇含 量< 0. 025%，然后将蛋白液浓缩至6%以上，将麦芽糖或甘氨酸加入蛋白液内，用lmol/L的 HCl调节pH值，使麦芽糖含量为10 士 1%或甘氨酸含量为2 士0. 2%，pH为3. 8 4. 4，蛋白含 量为8士3%，得配制后的蛋白液；(6)配制后的蛋白液经0.2μ m除菌滤芯过滤，放置在孵放室，经24°C 士 1°C在孵放21 天；孵放结束后用DV50滤芯除病毒过滤，并根据蛋白含量调整过滤液，过滤液蛋白含量符 合生产要求；用0. 2 μ m除菌滤芯过滤分装，分装后的制品送检、灯检，检验合格后包装、入 库；所述PH4. 0缓冲液是由乙酸钠与冰乙酸组成的水溶液，每升水中添加244. 9ml冰乙酸 和65. 6g乙酸钠；所述磷酸一 NaOH缓冲液为每升水中添加1. 6ml磷酸和1. 2gNa0H ；以上百分比除特别说明，其余均为重量百分比。组分I上清液，组分I沉淀，组分II + III沉淀，组分II + III上清液为所属
的通用分类方法，在本专利技术中是对特定物质的名称的命名；并不是指单纯的序号。本专利技术具有积极的意义1、采用压滤法代替离心法，产品得率显著提高，得率提高15-20%；2、超滤时，将蛋白浓度调整至3% 6%，用0.5mol/L的NaOH调pH至6. 4 6. 6，然后加lmol/L磷酸一 NaOH缓冲液调节电导率在T=19°C时测为0. 175 s / m 0. 205s / m， 调节好后，采用层析法，用离子交换柱进行上柱层析纯化；能够有效地去除杂蛋白，提高蛋 白纯度，并且能够提高产品得率；3、麦芽糖或甘氨酸都为保护剂，有利于提高静注人免疫球蛋白稳定性，甘氨酸作保护 剂可满足了糖尿病患者临床使用；4、本专利技术可得到5-11%蛋白浓度的静注人免疫球蛋白。具体实施例方式本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐建新，尧振，梁小明，姜国亮，何淑琴，
申请(专利权)人：江西博雅生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：36
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。